一、肾移植后慢性排斥反应研究进展—Ⅰ.临床、病理和发病机制（论文文献综述）
郭晖,明长生,陈实[1]（2022）在《移植胰腺病理学诊断标准及其进展》文中进行了进一步梳理胰腺移植和胰肾联合移植是治疗1型糖尿病和部分2型糖尿病及其并发症导致的肾衰竭的最佳治疗方法。胰腺移植的类型主要包括同期胰肾联合移植（SPK）、肾移植后胰腺移植（PAK）和单纯胰腺移植（PTA）。在所有的胰腺移植类型中,对移植胰腺的活组织检查（活检）仍然是明确诊断其排斥反应并与其他并发症进行鉴别的最佳方法。本文对移植胰腺活检的方法及其相关的研究进展、移植胰腺活检排斥反应诊断标准及其进展、移植胰腺主要的并发症及其病理学表现进行阐述,旨在为指导临床对上述并发症予以准确诊断,良好地保障移植胰腺和受者的长期存活提供参考。
刘浩[2]（2021）在《缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究》文中研究表明新型免疫抑制剂的发明应用使器官移植术后的排斥反应发生率逐渐下降。临床上广泛使用的免疫抑制剂主要机制为T细胞抑制,这是因为既往认为细胞性排斥反应是移植术后发生排斥的直接原因,然而不断有临床数据发现即使采取了足量的T细胞免疫抑制治疗,仍然有排斥反应发生。直到后来研究发现是供体特异性抗体介导了排斥反应的发生,并对移植物失功甚至移植失败产生重要影响,进而影响着受体术后生存质量和存活率。抗体介导的排斥反应主要是由B细胞为主、T细胞辅助的体液免疫反应介导参与的。导致体液性排斥反应发生的抗体有很多,主要是抗供者HLA的抗体或ABO血型系统抗原的抗体。但越来越多的研究发现“非HLA抗体”也在损害移植器官中发挥了重要作用,“非HLA抗体”在移植中一般指的是自身反应性抗体和同种异体反应性抗体,种类繁多,其特异性针对HLA以外的靶点。炎症环境、抗原表达的增加以及通过翻译后修饰形成的新抗原都有助于非HLA抗体的形成,随后对移植物造成损伤。缺血再灌注损伤是影响器官移植术后受体发病率和死亡率的重要原因,因为缺血再灌注损伤与围手术期并发症息息相关,包括再灌注后综合征、移植延迟、原发性无功能以及急、慢性排斥反应。研究发现,细胞在缺血再灌注损伤的过程中会产生新抗原表位,然后引起机体产生获得性免疫分泌抗体与之结合进而加重再灌注损伤。这些缺血损伤相关的新生表位所带来的危害可能并不局限于缺血再灌注损伤本身,可能也会诱发或加重器官移植后机体的体液性排斥反应。一、缺血损伤导致新生表位的产生我们通过建立小鼠单次和二次肾脏缺血再灌注损伤模型来进行此部分研究（单次缺血:左肾行假手术,100天后行右肾缺血手术;二次缺血:左肾先行缺血手术,100天后再行右肾缺血手术）。病理及生化结果发现经历二次缺血的右肾组织和功能比单次缺血的右肾损害严重（p<0.05）,且首次左肾缺血时间越长,右肾损害越明显,表明首次左肾缺血对后期缺血的右肾产生了影响。ELISA结果提示血清中新生抗原表位ANAX4的抗体滴度在二次缺血损伤后较单次缺血小鼠显着升高（p<0.01）,提示ANAX4抗体可能与肾损害相关。流式细胞技术检测发现二次缺血损伤后小鼠脾脏中Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞比例增高,说明二次缺血损伤诱导了体液免疫的发生。免疫荧光结果显示ANAX4的新生抗原表位在各组中的表达情况无明显差异（p>0.05）,而血清中ANAX4抗体在二次缺血损伤后却增高,可能与记忆性B细胞激活分化为可分泌抗体的浆细胞有关。我们进一步在左肾缺血期间加用了T细胞免疫抑制剂FK506,结果显示FK506不仅可以减少二次缺血损伤后Tfh细胞在脾脏中的比例,也减少了生发中心B细胞、记忆性B细胞在脾脏中的比例,同时减少了血清中ANAX4抗体水平,右肾功能和病理损伤情况也得到好转,再次证明新生表位激活了体液免疫分泌抗体参与对机体的损害。此外,免疫荧光结果证实C4d和Ig G在肾缺血损伤时候会浸润肾组织,说明补体系统也参与了肾缺血损伤引起的体液免疫反应。二、缺血损伤相关的新生表位在器官移植中的作用及机制此部分我们建立了小鼠肾缺血100天后行异种小鼠肾移植的动物模型,在肾缺血时候或肾移植术时加用FK506,观察其对移植效果的影响。具体分组如下:sham,肾移植+FK506,肾缺血+肾移植,肾缺血+肾移植+FK506,肾缺血+FK506+肾移植+FK506。结果发现在肾缺血+移植组中的肾组织损害最严重,血清中ANAX4抗体水平也最高。而肾移植+FK506组与肾缺血+肾移植+FK506组比较,病理损害则较轻,ANAX4抗体水平也较低,这提示前期肾缺血对后期的移植肾组织产生不利影响,且可能与新生表位产生有关。而在移植肾的免疫荧光中,ANAX4抗原表位在各组间无明显差异,表明ANAX4抗体水平的变化与移植术后体液免疫反应有关。此外C4d和Ig G在肾缺血+肾移植+FK506组中沉积比在肾移植+FK506组中多（p<0.05）,也说明早期肾缺血更易导致补体对移植肾的损害。我们进一步检测了脾脏和移植肾引流淋巴结中的Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞的比例,结果显示肾缺血+肾移植+FK506小鼠的三种细胞比例较肾移植+FK506组更高（p<0.05）,这些结果再次表明早期肾缺血损伤更易导致移植术后体液免疫发生,从而对移植肾造成损害。而在肾缺血+FK506+肾移植+FK506组中,由于缺血期间应用了FK506,其病理损害、C4d和Ig G沉积较肾缺血+肾移植+FK506都有所下降,三种免疫细胞比例也降低（p<0.05）,提示早期应用FK506可以适当减轻损伤和免疫反应。移植术后体液免疫的活跃可能预示抗体介导的排斥反应的发生,于是我们进一步对供体特异性抗体进行了检测,如预期所料,前期肾缺血会导致肾移植术后DSA-Ig G升高,说明了抗体介导的排斥反应的发生,从而对移植肾造成排斥。三、新生表位诱导的移植术后体液性排斥反应的防治探讨第二部分证实早期肾血损伤相关新生表位会诱发移植术后的体液性排斥反应,此部分,针对免疫反应不同环节,我们将眼镜蛇毒因子、CTLA4-Ig和（或）FTY720用于移植术后体液排斥反应的治疗。结果发现眼镜蛇毒因子可以减轻移植肾病理损害,改善肾功能,同时降低血清中ANAX4抗体和DSA-Ig G水平,尤其在抑制补体沉积上作用明显,但其对新生表位生成和免疫细胞的比例变化上无作用。而CTLA4-Ig除了改善移植肾功能和损害等效果外,还能通过抑制Tfh细胞、生发中心B细胞、记忆性B细胞的活化、增值进而抑制体液性排斥反应。当与FTY720合用后这些效果进一步增强。以上结果说明CTLA4-Ig和FTY720联用是预防和治疗缺血损伤相关表位诱导的移植术后体液性排斥反应的有效方法。四、褪黑素对肾缺血再灌注损伤的作用及机制研究减轻缺血再灌注损伤也一直是研究热点。因为褪黑素具有调节节律、抗炎、抗氧化等作用,因此我们将褪黑素用于肾脏缺血再灌注损伤的研究。实验证明褪黑素预处理对肾脏有保护作用,褪黑素预处理后的小鼠即使经历缺血再灌注,组织损伤也较少,血清肌酐和尿素氮水平没有明显升高。褪黑激素的保护作用进一步通过降低氧化应激得到证实,表现为脂质过氧化降低,抗氧化能力增强。随后研究证明褪黑素预处理显着限制了肾缺血损伤时引起的促炎细胞因子产生和中性粒细胞、巨噬细胞的浸润。透射电镜和Western blot等结果提示褪黑素在缺血再灌注过程中可以诱导肾脏自噬产生,TUNEL结果证实褪黑素预处理可以减少细胞凋亡。进一步研究发现褪黑素可通过下调TLR4/My D88激发自噬发挥保护作用,此外,MEK/ERK/m TORC1通路的下调对于褪黑素介导的自噬也是必需的。综上所述,我们通过小鼠二次肾缺血损伤模型验证了新生抗原表位的产生以及对体液免疫的影响。然后通过肾缺血+肾移植模型明确了缺血损伤相关的新生表位可以诱导移植术后的体液性排斥反应并对移植物造成损害,进一步实验表明缺血早期或移植术后通过干预抑制免疫反应可减轻移植物损害和排斥反应。最后我们证实褪黑素可以在肾缺血损伤中通过诱导自噬发挥保护性作用。
张鹏[3]（2020）在《花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究》文中认为目的:探讨花椒毒酚（xanthotoxol）在大鼠心脏移植物血管病（cardiac allograft vasculopathy,CAV）中对移植动脉血管的保护作用及其相关机制。方法:（1）以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体（Wistar to SD）将大鼠随机分为对照组,模型组和药物组（n=15）,模型组和药物组再分为1周组,4周组和8周组（n=5）。采用动脉套管法,将供体大鼠胸主动脉固定于自制的套管上,植入到受体大鼠腹腔动脉中,药物组在关腹前注入花椒毒酚10mg/kg,之后每天灌胃给药,模型组在术后第一天起同剂量生理盐水灌胃作对照。（2）在各观察时间点,处死大鼠后取出移植动脉,常规行HE染色和免疫组织化学染色,观察动脉形态变化,测量各期动脉内膜增厚情况,并计算各组ICAM-1、TNF-α、SMA-α,TGF-β1和NF-κB/P65表达的平均光密度值。结果:（1）每组大鼠都存活到各观察时间点,药物组大鼠无明显不良反应。模型组在第4周动脉管壁出现大量炎症细胞的浸润,第8周动脉被侵蚀、管壁机化,内膜增厚明显,药物组在第4周和第8周炎症细胞浸润明显减少,管壁较完整,新生内膜可见完好的内皮细胞层和增殖的平滑肌细胞;（2）与模型组相比,药物组在第8周动脉内膜/中膜比值明显减小（P=0.004）,其中ICAM-1的平均光密度值在第4周（P=0.006）和第8周（P=0.017）明显降低,TNF-α的表达量比同期模型组都显着降低（P<0.01）,α-SMA的表达量在第4周（P=0.002）和第8周（P=0.005）明显增加,TGF-β1在第1周（P<0.001）和第4周（P=0.022）表达量明显减少,同时NF-κB/P65的表达量在第4周（P=0.016）和第8周（P=0.032）也明显降低。结论:花椒毒酚对心脏移植物血管病有一定防治作用,其能降低大鼠心脏移植物血管病中ICAM-1,TNF-α,TGF-β1的表达水平,保留部分平滑肌细胞的收缩表型,改善血管形态,其机制可能与部分抑制NF-κB/P65的活化相关。
张岩[4]（2019）在《沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究》文中指出诱导成功的移植耐受可以使人类跨过免疫系统的天然障碍,真正的完成器官“置换”的终极目标;成功的免疫耐受不仅可以延长移植物存活时间,而且可以缓解器官移植带来的巨大经济负担、患者身心压力和器官短期的医疗局面。现阶段治疗方案虽然能减少急慢性排斥反应发生,却无法达到耐受。肾移植术后随访4至5年,大约30%病人会呈现慢性排斥的病理表现。因此,当前移植学界的首要目标就是探求新的免疫抑制方案。大鼠肾脏移植模型具有通过可适用于人类情况的手段研究耐受性诱导的潜力,研究者可以通过操控大鼠肾移植排斥反应,理解其发病机制。泌尿道的重建技术是大鼠肾移植模型的关键技术之一,因为大鼠输尿管的口径极窄,易导致尿漏、输尿管坏死和输尿管狭窄等并发症,可致移植肾积水或移植肾功能恶化。不同的泌尿道重建术式也会导致肾移植的不同结局。我们在建立大鼠肾移植模型时采用包含输尿管的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合技术重建泌尿道,同时与供体膀胱瓣-受体膀胱吻合的方法进行比较,以期改良泌尿道重建方法,减少并发症的产生。我们前期的研究发现沙利度胺可以显着减轻大鼠血管移植物动脉粥样硬化,减轻移植物血管病。其机制为改善炎症反应,减轻淋巴细胞的浸润,减少VEGF、PDGF、ICAM、TNF-α及PCNA的表达,延缓移植血管的硬化进程以及减轻内膜增生。在本实验中我们通过建立改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合尿路重建建立大鼠肾移植模型,观察沙利度胺对大鼠肾移植急、慢性排斥的作用,并阐明其免疫学机制。通过混合淋巴细胞培养,观察沙利度胺在体外对异体反应性T细胞的增殖及分化等情况的影响,阐明其对反应性淋巴细胞的调控机制。第一部分:改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合建立大鼠肾移植模型目的:应用改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合泌尿道重建建立大鼠肾移植模型,与供体膀胱瓣-受体膀胱吻合的方法进行比较,明确改良的大鼠肾移植泌尿道重建方式的效果。方法:分别以供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合泌尿道重建及供体膀觥瓣-受体膀胱吻合泌尿道重建的方式建立大鼠肾移植模型:A组,供体小膀胱瓣-受体膀胱粘膜层浆肌层双层缝合（n=12）:B组,供体膀胱瓣-受体膀胱单层缝合（n=11）。对比泌尿道重建时间及并发症。结果:A组尿路重建时间为14.12±1.73min、B组尿路重建时间为10.16±1.19min,两组差异有统计学意义（P<0.05）;A组泌尿道并发症发生率为25%,B组泌尿道并发症发生率为9.09%,两组差异有统计学意义（P<0.05）。结论:改良的供体小膀胱瓣-受体膀胱双层缝合的泌尿道重建方式能减少大鼠肾移植术后泌尿系统并发症,尽管尿路重建时间时间较传统的单层缝合时间长,但可以显着减少尿漏的可能性,为可靠性高的重建术式。第二部分:沙利度胺对大鼠肾移植急性排斥反应的作用目的:阐明沙利度胺在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用。方法:建立Fischer到Lewis大鼠肾移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作为对照。将受体大鼠分为同系移植组（Isograft,Iso）、异系移植组（Allograft,Allo）、环孢素组（CsA）和沙利度胺组（Thalidomide,Tha）。动态监测术后肌酐（Scr）的变化,观察至术后5天,留取血液标本检测白细胞介素（IL）-2、IL-6、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度,移植肾行病理检查。结果:急性排斥模型中Allo组及Tha组大鼠肌酐均进行性升高,Tha组肌酐水平与Allo组相比无明显差异,均显着高于同时间点Iso组及CsA组。Tha组移植肾病理学改变与Allo组相似,均可见急性肾小管损伤表现,弥漫性重度炎症浸润伴严重肾小球病,内膜动脉炎和小动脉透明变性。Allo组IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的浓度显着升高,Tha组血清中IL-6、IL-17和TNF-α的浓度显着低于Allo组,但IL-2的浓度显着高于Allo组。结论:这些结果表明,沙利度胺的免疫抑制作用较弱,对急性排斥反应效果较差。第三部分:沙利度胺对大鼠肾移植慢性排斥反应的作用及其免疫调节机制的初步研究目的:观察沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的作用,并明确其确切的机制。方法:建立Fischer到Lewis大鼠肾移植模型。使用同系LEW-LEW移植物作为对照。将受体大鼠分为同系移植组（Isograft,Iso）、异系移植组（Allograft,Allo）和沙利度胺组（Thalidomide,Tha）。术后8周取血液测定受者血清中肌酐,IL-2、IL-6、IL-17和TNF-α的浓度;流式细胞术检测外周血中T细胞亚群分布。取移植肾行病理检查;免疫荧光、蛋白印迹实验检测各组肾组织中转换生长因子β1（TGF-βl）、平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果:肾移植后8周,移植肾出现不同程度的单个核细胞浸润、肾小球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化和小动脉内膜厚等病理学改变。Tha组大鼠移植肾的病理改变明显轻于Allo组。Tha组大鼠血肌酐水平及血清中炎性细胞因子的浓度显着低于Allo组,Tha组外周血中CD4+CD25+、CD4+CD25+FoxP3+T细胞比例显着升高、CD4+Th17+T细胞比例显着降低,TGF-β1,α-SMA和VEGF蛋白的表达显着降低。结论:沙利度胺可以显着减轻慢性排斥反应,其机制可能为沙利度胺减少炎症因子的分泌,改变T细胞亚群的分布,并降低相关致纤维化蛋白表达有关。第四部分:沙利度胺对异体反应性淋巴细胞的调控作用目的:观察沙利度胺在体外对体反应性淋巴细胞的影响,阐明其对反应性淋巴细胞的免疫调控作用。方法:建立Fischer-Lewis单向混合淋巴细胞培养（Mixed lymphocyte culture MLC）体系,分为对照组（Control,Con）及沙利度胺组（Thalidomide,Tha）,流式细胞术检测T细胞亚群分布情况及凋亡率,ELISA法测定培养液中IL-2,IL-6,IL-17和TNF-α的浓度。结果:Tha组中Th17细胞比例显着低于同时间点的对照组,Treg细胞比例均显着高于同时间点的Con组,差异均有统计学意义（P<0.05）:Tha组培养液中IL-2浓度显着高于同时间点的Con组（P<0.05）;Tha组中T细胞凋亡率显着高于同时间点的Con组,差异均有统计学意义（P<0.05）;而IL-6,IL-17和TNF-α浓度显着低于同时间点的Con组（P<0.05）。结论:沙利度胺在体外可以促进异体反应性T细胞中Treg细胞增殖,抑制Th17细胞增殖,改变T细胞亚群分布,增加异体反应性T细胞凋亡,降低炎症因子IL-6,IL-17和TNF-α的浓度。
Edoo Muhammad Ibrahim Alhadi[5]（2019）在《肝移植后糖蛋白130多态性与新发糖尿病风险分析》文中指出目的:经过半个多世纪的研究和开发,肝移植患者的预后得到了极大的改善。然而,肝移植后新发糖尿病的发病率仍然很高,这已成为影响患者长期存活率和生活质量的重要因素。我们的目的是研究GP130的单核苷酸多态性是否与NODAT相关。方法:本研究纳入了 2009年至2014年我中心接受肝移植的469例患者,分为两组:NODAT组和非NODAT组。我们使用单变量和多变量分析筛选了 NODAT的独立危险因素。我们进一步构建了两个包含风险因子的NODAT预测模型。最后,我们通过单变量分析分析了生存时间和存活率。排除标准患有家族性糖尿病史,多器官移植,不到6个月的随访或急性排斥反应结果:肝移植6个月后新发糖尿病的总发生率为31.3%（147/469）。男性414例,女性55例,平均年龄45.7±11.1岁。使用单变量分析,年龄（P<0.001）,BMI指数（P=0.029）,GP130 rs1800796 和 rs10941411 与 NODAT 显着相关。rs1800796和rs10941411的显性模型进一步证实了这些风险因素。NODAT组患者和移植肝脏的总生存时间和存活率显着低于非NODAT（P<0.05）。结论:NODAT代表移植的主要代谢并发症。根据这一声明,所有前瞻性移植患者都应该被告知移植后患糖尿病的潜在风险,并且应该鼓励他们在LT之前采取适当的生活方式措施,以降低患糖尿病的风险。此外,葡萄糖失调的筛查应该是系统性的,应该在移植过程的所有阶段进行。由于高血糖的程度可能因NODAT受试者而异,因此选择最合适的药物治疗以实现可接受的血糖控制非常重要。基于移植器官的恢复功能和抗糖尿病药物的毒性特征,应针对每位患者定制抗糖尿病治疗。因此,优化NODAT的预防和管理可以最大限度地降低与此病症相关的急性和长期风险.本研究首次证实GP130 rs1800796和rs10941411基因多态性与肝移植术后NODAT的发生密切相关。它揭示了年龄是NODAT的风险因素。进一步证实NODAT的存活时间和存活率比非NODAT的存活时间和存活率更差。
余鹏程,刘永光,郭颖,李民,肖宗宇,胡孔和,黄进军,辛军,吴志强,赵明[6]（2015）在《改进SD-Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的造模方法》文中进行了进一步梳理背景:国际上常用的肾移植慢性排斥模型是Fisher→Lewis大鼠肾移植模型等,但这些模型在国内均较难以获得并且价格昂贵,大规模使用受到了一定的限制。目的:探索建立SD→Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的新方法。方法:将56对SD→Wistar大鼠作左肾原位移植,受体自身右肾保留作为内对照。23只成功移植的受体大鼠随机分为模型组（n=15）和对照组（n=8）。模型组大鼠在移植后给予10 d的小剂量环孢素微乳化剂[2 mg/（kg·d）,腹腔注射],对照组大鼠未给予免疫抑制治疗。结果与结论:对照组大鼠所有移植肾均在4周内出现不可逆的急性排斥反应,移植肾坏死;模型组大鼠移植后4,8,12周时均可见移植肾中出现中等度的炎症细胞浸润,在移植后12周内出现典型的慢性排斥组织病理学改变,其Banff总分随移植后时间的延长而升高。2组大鼠所有受体的自身右肾均没有出现组织病理学改变。模型组大鼠移植后第4天环孢素浓度谷值为（153.2±17.1）μg/L。说明通过给予肾移植的SD→Wistar大鼠受体10 d小剂量的环孢素微乳化制剂（2 mg/kg）,可使移植肾出现中等度的炎症细胞浸润并于12周内形成慢性排斥的典型组织病理学改变,可作为研究肾移植慢性排斥的动物模型。
胡克邦[7]（2014）在《Treg/Th17/Th1细胞及其细胞因子在肾移植排斥反应中的机制研究及临床意义》文中进行了进一步梳理背景：肾功能衰竭是一种常见的临床疾病。近年来随着移植免疫的深入研究和新型免疫抑制剂的临床应用，其预后得到了明显改善，早期存活率大幅度提高，因此肾移植被认为是治疗终末期肾病患者的有效方法，备受关注，但是术后免疫排斥反应的发生仍然是影响移植肾长期存活的危险因素。因此进一步研究肾移植受者体内移植排斥的具体机制以及寻找一种能够有效监测移植肾功能状态的临床指标，将具有十分重要的临床意义。目的：通过检测移植治疗前后过程中移植肾受者外周血中的调节性T细胞，效应性T细胞及其血清中细胞因子IL-2，IFN，TNF，IL-4，IL-6和IL-10的表达水平，并与临床指标之间进行相关性分析，探讨这些免疫细胞及细胞因子在移植后免疫排斥发病机制中的作用，进一步评估其在临床意义。方法：通过流式细胞技术检测肾移植治疗前后患者和健康人外周血调节性T细胞和效应性T细胞亚型及其相关细胞因子的表达，采用微量样本多指标流式蛋白定量技术（CBA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-2，IFN，TNF，IL-4，IL-6和IL-10细胞因子的含量，并分析其与临床指标之间的关系。临床指标中血细胞计数、血沉、肌酐、尿素氮、肾小球滤过率等均由检验科专科医生完成。结果：1.终末期肾衰竭患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量较健康对照组明显增加，而CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量与健康对照组无明显变化；2.在移植后，与移植前以及健康对照组相比，肾功能稳定组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量明显增高，而肾功能稳定组患者外周血中CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量明显减少；3.在移植后，急性排斥反应组和亚急性排斥反应组患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞数量明显低于移植前和健康对照组，而移植后CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量高于移植前和健康对照组；而与亚急性排斥反应组相比，急性排斥反应组患者外周血中的CD4+CD25-Foxp3+T细胞明显增多，CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CXCR5+Foxp3+T细胞明显减少；4.终末期肾衰竭患者外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17，CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量较健康对照组明显增加；5.在移植后，与移植前相比，肾功能稳定组外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17,CD4+IFN-γ+IL-17-Th1与CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17细胞数量明显减少；而外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞数及其与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞比例增高；6.在移植后，在急性排斥反应组和亚急性排斥反应组患者外周血中CD4+IFN-γ-IL-17+Th17，CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量明显高于移植前和移植稳定组；此外，急性排斥反应组患者外周血中的CD4+IFN-γ-IL-17+Th17, CD4+IFN-γ+IL-17-Th1和CD4+IFN-γ+IL-17+Th1/17T细胞数量低于亚急性排斥反应组；7.终末期肾衰竭患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-6，IL-10及IL-17的浓度较健康对照组明显增加；8.在移植后，与移植前以及稳定组相比，各组移植排斥组患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α和IL-17浓度更高，IL-10浓度更低；而血清中IL-4和IL-6的浓度在各移植组前后无显着差异；9.在移植后，与亚急性排斥反应组和慢性排斥组相比，急性排斥反应组患者血清中IL-2，IFN-γ，TNF-α和IL-17浓度更高，IL-10浓度更低，而血清中IL-4和IL-6的浓度在各组移植前后无显着差异；10.相关性分析显示各组移植患者血清中IL-17和IFN-γ浓度分别与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞数和CD4+IFN-γ+IL-17-Th1细胞数呈正相关，此外，各组移植患者外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T细胞与CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞的数量呈负相关；11.相关性分析显示各组移植患者中外周血中CD4+CD25+Foxp3+和CD4+IFN-γ-IL-17+Th17细胞分别与eGFR和血清肌酐水平呈正相关；血清中TNF-α和IL-17水平与血清肌酐水平呈正相关；相反，各组移植患者血清中IL-10浓度与血清肌酐水平呈负相关。结论：1.调节性T细胞在肾脏移植排斥反应中起着重要的作用；2.效应性T细胞及其分泌的效应细胞因子（IL-2，IFN-γ，TNF-α，IL-4，IL-6，IL-10及IL-17）可能参与肾脏移植排斥反应的发病过程；3.在各组肾移植排斥反应组中Treg细胞与Th17/Th1细胞呈负相关性；4.在肾脏移植后，各组肾移植受者血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子的浓度与血清肌酐浓度具有一定的相关性，表明血清中细胞因子水平在移植排斥反应中可以作为一项临床监测指标，为预防抑制排斥反应的发生提供了新的思路，具有一定的临床意义。
张建强[8]（2012）在《大鼠肾移植慢性排斥模型中外周血清间α胰蛋白酶抑制剂水平的意义探讨》文中研究说明背景与目的随着医学技术的不断进步,在器官移植领域,组织配型技术取得跨越式的发展及新型免疫抑制剂在临床中的应用,肾移植术已成为临床治疗终末期肾病的主要方法,且人/肾存活率得到逐年升高,术后早期急性排斥反应发生率明显下降,移植肾短期存活率得到显着提高,但移植肾长期存活仍未得到明显改善,这其中包含免疫因素和非免疫因素的作用,其中在免疫因素中慢性排斥反应是其影响移植肾长期存活率的主要因素,慢性排斥反应仍然是一个长期困扰移植界的难题,供肾与受者达到完全耐受仍然是一个理想的目标。到目前为止,移植肾病理活检仍是目前能明确诊断慢性排斥反应的金标准,但鉴于其为有创操作,有导致不同并发症的风险,同时由于移植肾活检标本存在误差,或缺乏程序性肾活检的资料,供肾移植前存在组织学损伤和CsA或FK506肾毒性与慢性排斥难以区别,使慢性排斥反应的诊断更复杂,诊断需要3-5天的时间。因此探讨一种敏感特异的非侵袭性检查方法和客观指标,对于诊断和预测慢性排斥反应及其转归,及早干预病情的发展,制定个体化免疫抑制方案均具有重要意义。间α胰蛋白酶抑制剂,inter-alpha-trypsin inhibitors（简写成ITI）,是一系列蛋白水解酶抑制剂的统称,血浆中含量较高,ITI在炎症、创伤修复、肿瘤转移等免疫活动中发挥着重要作用。在脓毒症、坏死性结肠炎等患者血浆中ITI的含量较正常人明显下降,且下降幅度与病死率相关。而移植肾慢性排斥反应无论是从组织形态学还是细胞因子角度分析,均存在炎性细胞浸润、炎症因子的释放,在慢性排斥反应中免疫应答占据非常重要的位置,大量文献证实ITI可以用于预测体内免疫活动强弱的功能,临床或动物实验中,已成为脓毒症、溃疡性结肠炎、肿瘤等疾病的一个重要的预测及预后的指标,也有大量事实证明其用于治疗疾病上,鉴于ITI能预测体内免疫反应强弱的特性,我们通过检测慢性排斥反应大鼠血浆中ITI的水平,与正常肾移植组大鼠相比较,来初步探讨ITI在大鼠慢性排斥反应中所起的作用。本实验的目的就是通过观察间α胰蛋白酶抑制剂（inter-alpha-trypsin inhibitors,以下简称ITI）在肾移植术后慢性排斥反应及正常肾移植大鼠外周血动态表达情况,并与移植肾病理检查相比照,就ITI对移植肾慢性排斥反应是否有预测作用展开初步探讨和研究。方法1、SD-Wistar大鼠肾移植模型的建立进行一定时间的预实验,以熟悉显微外科技术及能建立稳定的肾移植模型,正式实验阶段分别选用SD大鼠和Wistar大鼠作为供体和受体,采用显微外科手术技术行SD-Wistar左肾原位肾移植术。麻醉后分离供体左肾动脉、静脉、部分腹主动脉及输尿管,切取供肾前用4℃乳酸林格氏液（含肝素25U/m1）通过腹主动脉原位灌注供肾至呈均匀土黄色,肾静脉流出液清亮,切取供肾并置于4℃乳酸林格氏液无菌保存。再离断受体左肾动脉、静脉及输尿管后切除左肾,供、受体左肾动脉、肾静脉及输尿管分别行端端吻合。受体右。肾不切除,完整保留作为每个移植肾样本的内参照。慢性排斥反应组受体于术前3天起,即给予腹腔注射环孢素A微乳化剂2mg/kg,每日1次,以抑制急性排斥反应,而正常肾移植组则给予环孢素A微乳化剂腹腔注射5mg/kg,每日1次。手术后当天一次性肌注青霉素50mg/kg预防感染。并随机选取两组大鼠（各10只）在术后当天取血标本检测CsA浓度谷值。2、大鼠肾移植慢性排斥反应组织病理及Treg细胞检测取SD大鼠作为供者,Wistar大鼠作为受体,行SD-Wistar大鼠左肾原位移植。保留受体自身右肾作为每一个移植肾的内对照。所有受体均于术后当天一次性肌肉青霉素50mg/kg预防感染。受者60只,存活57只（此数量包含术前大鼠,非实验设计死亡的大鼠均依据实验要求再补充至60只）,取肾移植存活受体以及术前大鼠共60只进行随机实验分组,分成正常肾移植组（对照组,n=30）、慢性排斥反应组（实验组,n=30）。实验组从术前3天起给予环孢素A（2mg/kg.d,腹腔注射）治疗,以抑制急性排斥反应,对照组从术前3天起给予环孢素A（5mg/kg.d,腹腔注射）治疗。移植前供者左肾及受者移植后第4周起陆续获取移植肾,并取相应的右肾作为内参照,用10%中性福尔马林固定,制作石蜡切片,行HE、PASM. Masson染色,行大体观察及组织病理学检测。根据组织病理学变化,取移植肾病理学变化最显着的阶段预先留取的血标本,进行流式细胞仪检测Treg细胞占淋巴细胞的比例,并进行统计学分析,对慢性排斥反应与Treg细胞的关系作初步的探讨。3、ITI的检测及初步探讨其在大鼠肾移植慢性排斥反应中的意义分别取两组大鼠术前、术后4、6、8、10、12周的血标本（各5只）,离心收集血浆标本,制备出血浆蛋白,依次进行下列步骤：分离胶和积层胶,制胶板；蛋白变性：准备蛋白样本,加入等体积的2×上样Buffer稀释,置于沸水中煮10min；加样：每孔加入20-40μl样品；电泳：置于电泳槽中电泳45mmin,恒定电流90mA；取出胶板,用切割刀修好胶；将胶置于转膜液中浸泡；按顺序放好下列物质：黑面→海绵→滤纸→胶→NC膜→滤纸（用吸管赶去气泡）→海绵；置于转膜槽中,黑面对黑面,加上冰块,加入转膜液；装好电极,于恒定电压100V下,90min；丽春红染膜；用TBST洗去丽春红；封闭：加入5%脱脂奶粉+TBST,常温摇床摇1h；回收封闭液,加入一抗；置于4。C摇床摇过夜；回收一抗,TBST洗膜,10min,共3次；加入二抗,常温摇床摇1h；回收二抗,TBST洗膜,10min,共3次；将膜置于发光液中浸泡约1min；将膜铺于曝光盒中,于暗室中曝光,洗胶片。结果1、慢性排斥组术后第1天CsA浓度为101.17±12.17ng/ml；正常肾移植组术后第1天CsA浓度为171.33±18.49ng/ml（F=2.164,P=0.159）。预实验阶段共用80只大鼠,其中SD、Wistar大鼠分别为40只,预实验阶段重点是熟悉显微技术操作及掌握并能稳定制作大鼠肾移植模型,在预实验阶段,肾移植大鼠至少观察12周,记录大鼠存活状况以及各种术后并发症发生情况（见表1-2）,经过2个多月的显微技能及模型制作的训练,即进入正式实验阶段,为便于分组及考虑到术后大鼠可能因某些不可预测因素致死的原因,适当扩大样本量（即补充非实验处理因素所致死亡的大鼠）,正式实验大鼠共60对,其中SD、Wistar大鼠分别为60只,记录大鼠存活状况以及各种术后并发症发生情况,（其中死亡大鼠指非按实验计划处死的大鼠）（见表1-2）。在正式实验阶段,供肾热缺血时间6S～12S,冷缺血时间50min-80min,供体手术1-1.5h,受体肾移植手术时间1.5-2h。2、正常肾移植组：肉眼所见移植肾大小适中,外观饱满,质韧,肾表面鲜红,术后各时间点移植肾大小、形态、质地均无明显的差别,组织病理学除见红细胞浸润外未见其他明显改变（图2-13）移植肾慢性排斥组：移植肾逐渐呈现慢性排斥反应改变,至术后第12周移植肾仍存活,体积较右肾明显缩小,色泽较苍白。光镜下病变进一步加重,除出现弥漫浆细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润外,肾小球基底膜增厚,广泛的肾小球硬化、萎缩以及间质纤维化、炎症,肾小管萎缩,小动脉内膜增厚,管腔狭窄甚至完全闭塞,呈典型的慢性排斥病理改变（图14-图16）,尤以小动脉内膜纤维样增厚为其特征性组织学改变。阴性内对照的右肾未出现任何组织学改变。3、大鼠肾移植术后第12周正常肾移植组与慢性排斥反应组血浆中CD4+CD25+Treg细胞的比例有统计学差异（t=6.155,df=8,P=0.000）；CD4+FoxP3+Treg细胞在两组血浆淋巴细胞中的比例也有显着差异（t=4.153,df=8,P=0.003）,即正常肾移植组血浆中CD4+CD25+标记的Treg细胞及CD4+FoxP3+标记的Treg细胞均高于慢性排斥反应组（见表2-1）。4、正常肾移植组与慢性排斥反应组血浆中ITI表达量不同（P=0.040）,术前两组ITI表达量无明显差异（F=2.486,P=0.154）,术后4、6、8、10、12周ITI表达量均有显着差异,其中术后4周、6周正常。肾移植组ITI表达量低于慢性排斥反应组（F值分别为7.942、19.562,P值分别为0.023、0.002）,而从术后8周开始至术后12周,正常肾移植组ITI表达量均高于慢性排斥反应组（F值分别为40.004、26.393、27.883,P值分别为0.000、0.001、0.001）；不同时间点所检测的血浆ITI表达量不同,慢性排斥反应组血浆ITI随移植术后时间推移表达量逐渐下降（P=0.000）,正常‘肾移植组术后4周、6周、8周、10周ITI表达量与术前、术后12周均有显着差异,即低于术前水平,高于术后12周水平（P值均为0.000）；慢性排斥反应组术后4周与术后6周间无显着差异（P=1.000）,术后8周与术后10周也无差异（P=1.000）,其他各两组间均存在统计学意义；分组与时间存在着交互效应（P=0.000）,提示术后12周慢性排斥反应组血浆ITI表达量最低。结论1、通过本实验中的处理方法我们可制作稳定的大鼠肾移植慢性排斥反应模型,且病理学提示,大鼠肾移植慢性排斥反应在第12周时最为明显；2、慢性排斥反应病理表现最明显时血浆Treg细胞占淋巴细胞比例低于正常肾移植组；3、移植肾慢性排斥反应血浆中ITI的量随移植术后时间推移逐渐减少,移植术后8周内慢性排斥反应组血浆ITI量高于正常肾移植组,而从8周开始ITI的量则低于正常肾移植组,慢性排斥反应组术后第12周血浆ITI量最低,提示ITI水平变化与大鼠慢性排斥反应关系密切。
余鹏程[9]（2011）在《供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥的作用及其免疫调节机制的初步研究》文中研究说明背景与目的肾移植是治疗终末期肾病患者的最有效手段,近年来随着对移植免疫的进一步认识以及新型免疫抑制剂的问世,急性排斥反应明显下降,但是移植肾的长期存活率并没有显着改善,慢性排斥反应已成为阻碍移植肾长期存活的主要原因。迄今为止,对慢性排斥反应的防治主要集中于几种免疫抑制剂,这些药物都是非特异性的免疫抑制剂,治疗效果不明显,并且具有严重的副作用,尚无任何药物及其他疗法能真正有效地防治移植肾慢性排斥,临床上迫切需要寻求防治移植肾慢性排斥的新途径。骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓中的非造血细胞集落,在不同的诱导条件下,可以分化为成骨细胞、软骨细胞、肌腱细胞、肌细胞、脂肪细胞等。既往研究表明,MSCs具有低免疫原性,能够逃避免疫排斥,并且具有免疫抑制特性以及组织修复/再生作用,不少学者推测输注MSCs有望诱导移植物包括移植肾的免疫耐受,达到移植物的长期存活。然而,尽管大量的体外试验数据提示MSCs可能能够抑制移植排斥反应,但是相关的体内试验研究仍然比较缺乏,且结论不一。在某些研究中MSCs可促进受者对移植物的耐受,而某些研究则没有影响甚至可引起或加重排斥。目前比较肯定的是MSCs在狒狒体内可延长皮肤移植物的存活期；可治疗骨髓移植后的移植物抗宿主病,已经进入了Ⅰ期和Ⅱ期临床试验,并且显示了良好的临床效果。在心脏移植方面,则有不同研究结论,有的研究发现可减轻排斥,有的发现甚至会加重排斥。导致这种不同研究结果的原因可能是MSCs在不同试验条件下处于不同的免疫微环境以及输注MSCs的时间以及用量等的不同。MSCs还可以减轻胰岛细胞移植的排斥反应。目前多数研究认为MSCs需在一定条件下尤其是同时联合使用短期的免疫抑制剂才有望诱导长期的移植物耐受。目前有关间充质干细胞对肾移植的效应的研究较少,部分研究发现骨髓间充质干细胞能够减轻大鼠肾移植急性排斥反应,减少移植肾组织炎症介质如IL-1、TGF-β1等的表达,对大鼠早期移植肾具有保护作用。还有研究发现人肾移植供者来源的脂肪MSCs在体外能显着抑制受体-供者的混合淋巴细胞反应,显着抑制肾移植受者移植前和移植后T细胞的增殖。但至今未见MSCs对于移植肾慢性排斥的远期效果的影响的体内研究,更未见其对肾移植慢性排斥的体内免疫调节作用机制的研究。国际上公认的大鼠肾移植慢性排斥模型就是在短期使用小剂量的免疫抑制剂环孢素条件下形成的,该模型于移植后8-12周可出现典型的慢性排斥表现,采用这个模型用于研究MSCs的作用符合加用免疫抑制剂的条件。因此,本研究采用这类模型作为研究对象,采用文献报道的具有体内体外免疫抑制作用的细胞数量,同时根据文献报道的MSCs的一般传代规律,制定了干预时间点,观察MSCs在同时短期使用环孢素A的条件下,对大鼠肾移植慢性排斥模型移植肾组织病理学和TGF-β1表达的影响及其不良反应和副作用,判断其确切治疗效果；并通过检测血清和肾组织Th1/Th2相关细胞因子的分泌水平,观察其在大鼠肾移植慢性排斥模型的体内免疫调节作用,探讨其可能的体内免疫调节机制,为临床应用MSCs防治肾移植慢性排斥、诱导移植肾长期存活提供进一步的体内实验数据。方法1、SD-Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的建立和改进分别选用SD大鼠和Wistar大鼠作为供体和受体,采用显微外科手术技术行SD-Wistar左肾原位肾移植术。麻醉后分离供体左肾动脉、静脉、部分腹主动脉及输尿管,切取供肾前用4℃乳酸林格氏液（含肝素25U/ml）通过腹主动脉原位灌注供肾至呈均匀土黄色。供肾置于4℃乳酸林格氏液无菌保存。在离断受体左肾动脉、静脉及输尿管后切除左肾,供、受体左肾动脉、肾静脉及输尿管分别行端端吻合。受体右肾不切除,完整保留作为每个移植肾样本的内对照。成活受体于手术当天及手术后9天,腹腔注射环孢素A微乳化剂2mg/kg,每日1次,以抑制急性排斥反应。手术后当天一次性肌注氨苄青霉素钠50mg/kg预防感染。术后4周、8周、第12周各取2只成活受体,处死后迅速摘取移植肾,用10%中性福尔马林固定,制作石蜡切片,行HE、PAS和PASM-Masson’s染色,光镜下动态观测组织病理学变化情况,按照Banff 2007移植肾病理分类方案,判断是否出现慢性排斥。随机选取8只接受CsA短期治疗的受体,于术后第4天从尾静脉采血测定CsA浓度谷值。2、大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定采用全骨髓贴壁分离培养法培养大鼠骨髓来源的间充质干细胞。取4周龄雄性SD大鼠处死,无菌条件下取其长骨,反复冲洗骨髓腔,收集细胞悬液。1000r/min,离心5min后,弃去上清。用含20%胎牛血清的L-DMEM培养基重悬细胞,接种于培养瓶中,置于37℃、50mL/LCO2培养箱培养。传代培养至第三代,倒置显微镜下观察MSCs形态；分别取P3代生长状态良好的细胞,采用流式细胞术检测其细胞周期：取生长良好的第三代细胞,应用流式细胞术检测其CD29,CD34,D44,CD45阳性率,同时用小鼠IgG1-FITC和IgG1-PE作为同型抗体对照；同时做骨髓间充质干细胞成脂肪细胞诱导分化以进一步鉴定MSCs。取P3代生长状态良好的细胞,用诱导脂肪样细胞的诱导培养液培养,2周后行油红O染色观察有否出现脂肪滴。3、供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥移植肾组织病理学的影响SD雄性大鼠作为供者,Wistar雌性大鼠作为受体,行SD-Wistar大鼠左肾原位移植。保留受体自身右肾作为每一个移植肾的内对照。所有受体均于术后当天一次性肌肉注射氨苄青霉素50mg/kg体重预防感染。取肾移植手术成功存活受体23只进入实验分组。23只成功移植的受体分成MSCs+环孢素A治疗组（简称治疗组,n=8）、环孢素A对照组（简称对照组,n=8）及单纯移植组（n=7）。治疗组和对照组所有受体均从术后当天起给予10天的小剂量环孢素A（2mg/kg.d,腹腔注射）治疗,以抑制急性排斥反应。治疗组（n=8）每只受体除给予小剂量环孢素A治疗外,另取SD大鼠来源骨髓MSCs,制备成1×107个/ml细胞悬液,于手术当天关腹前从左髂静脉注入1×107个/kg体重MSCs,于术后第3天和第7天从尾静脉再次注入同样剂量的MSCs。MSCs输注后每日观察治疗组受者可能出现的不良反应。对照组（n=7）则注入相同容量的生理盐水。单纯移植组未接受MSCs以及环孢素A免疫抑制治疗。移植后第4周即陆续获取单纯移植组双肾行大体观察及组织病理学检测。移植后12周,治疗组和对照组受体大鼠处死后,迅速摘取移植肾和受体自身右肾,分别行HE染色、PAS染色和PSM-Masson染色。参照Banff1997以及Banff2007移植肾病理分类方案制定评分标准,由两位观察者光镜下双盲方式观测对比组织病理学变化情况,分别对移植肾组织的肾间质炎（i,单个核细胞波润）、间质纤维化（ci）、肾小管萎缩（ct）、移植肾肾小球病（cg）、动脉内膜纤维性增厚（cv）等慢性损害进行评分,每项分为0-3分,总分0-15分。另外计算每张切片硬化的肾小球占所有肾小球的百分比。同时对治疗组和对照组所有受者作大体解剖以了解MSCs有无诱发肿瘤。4、免疫组织化学染色检测转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达留取治疗组和对照组术后12周移植肾和受体自身右肾部分肾组织作免疫组织化学染色检测TGF-β1的表达。5、酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和移植肾组织细胞因子浓度水平移植后12周,采集治疗组和对照组受体以及8只健康Wistar大鼠血清和肾组织行ELISA检测IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10浓度。结果1、整个实验过程共65对大鼠施行肾移植手术,预实验阶段37对和正式实验28对,预实验阶段存活受体20只,其中移植肾存活12只,成功率只有32%；正式实验成活受体24只,其中移植肾存活23只,成功率82%。正式实验阶段热缺血时间10S-15S,冷缺血时间40min-60min,总手术时间2h-2.5h,其中受体肾移植手术时间1.5-2h。术后第12周,移植肾仍存活,体积较右肾缩小,色泽较苍白,光镜下呈典型的慢性排斥病理改变,尤以小动脉内膜纤维样增厚为其特征性组织学改变。阴性内对照的右肾未出现任何组织学改变。术后第4天环孢素A浓度谷值是153.2±17.1ng/ml。2、MSCs原代细胞传代培养至第三代,光镜下见细胞呈梭形、星形,成纤维样,细胞形态较均一。使用流式细胞仪对P3代MSCs进行细胞周期检测,结果显示MSCs中G0/G1期的细胞约占81.5%以上。利用FCM检测培养的P3代骨髓间充质干细胞表面标记物,实验结果发现,CD29阳性细胞的比例达到98.3%；CD44阳性细胞达到99.2%；CD34和CD45阴性细胞的比例分别为98.9%、96.6%。P3代骨髓MSCs经成脂诱导2周后见大量脂肪滴相互融合,细胞由长梭形变为圆形或多边形,油红0染色显示有大量红色脂滴沉淀,证实为脂肪细胞。3、单纯移植组在4周内所有受体移植肾明显肿胀增大,暗淡,移植肾坏死。治疗组输注MSCs后无1例次出现寒战、呼吸困难等不良反应,无发现术口感染以及其他感染情况。术后12周,两组各组织器官均未见肿瘤发生；治疗组和对照组两组大鼠纳入统计的受体移植肾均存活,体积较正常右肾略小,色泽较苍白,出现不同程度的慢性排斥组织病理学改变。治疗组大鼠移植肾组织的各种组织病理学损害（5.13±0.99）均较对照组（10.13±0.99）减轻（P=0.000）,肾小球硬化率（%,12.44±1.01）低于对照组（%,27.21±3.23）（P=0.000）4、治疗组和对照组移植肾肾小管上皮细胞、间质细胞及肾小球的TGF-β1表达均可呈阳性,并且染色强度较强。治疗组移植肾组织的TGF-β1表达低于对照组（P=0.043）。5、治疗组血清IL-4浓度（pg/mL,48.18±5.43）较对照组（36.67±9.93）高（P=0.008）,两组血清IL-10、IFN-γ浓度差异无显着性意义（P=0.105,P=0.455）,治疗组血清TNF-α水平（pg/mL）（15.53±9.63）低于对照组（48.81±19.17）（P=0.000）。治疗组血清Th1/Th2（IFN-γ/IL-4） （1.52±0.63）低于对照组（2.47±0.99）（t=2.269,P=0.040）。治疗组和对照组移植肾组织上清液IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α浓度均高于正常组（均有P=0.000）。治疗组移植肾IL-4浓度（311.54±53.45）高于对照组（210.82±56.01）（P=0.000）,IL-10、IFN-y以及TNF-α浓度与对照组相比差异无显着性意义（P=0.254,P=0.349,P=0.480）,Th1/Th2（IFN-γ/IL-4） （1.41±0.42）（?）低于对照组（2.40±0.83）（P=0.009）。结论1、给予保留受体自身右肾的SD->Wistar大鼠肾移植受体腹腔注射10天小剂量的环孢素A微乳化制剂（2mg/kg.d）,可诱导移植肾长期存活并于12周内可形成慢性排斥的典型组织病理学改变,可作为研究肾移植慢性排斥的动物模型；2、采用全骨髓贴壁分离培养法可获取纯度较高的骨髓MSCs。本实验培养的细胞经形态学、细胞表型特点及其可诱导成脂肪细胞分化鉴定证实为骨髓间充质干细胞。3、供者骨髓MSCs可明显改善大鼠移植肾慢性排斥组织病理学损害,对大鼠移植肾具有远期的保护作用。本研究所采用的细胞剂量及用法还不足以诱导移植物完全免疫耐受；该剂量的MSCs输注未发现致肿瘤及感染等副作用,安全性好。4、供者骨髓间充质干细胞在移植肾慢性排斥受体体内能下调移植肾组织TGF-β1的表达；移植肾组织TGF-β1表达的下调可能是MSCs通过其他免疫抑制途径以及其他机制对慢性排斥移植肾产生保护作用后的结果而非原因。5、大鼠慢性排斥移植肾组织可同时高表达Thl类和Th2类细胞因子。供者骨髓MSCs可使Thl/Th2细胞因子在一个高表达水平情况下向Th2方向偏移,可能是其减轻移植肾慢性排斥组织学损害,诱导移植肾免疫耐受的机制之一。
李富新[10]（2010）在《受体源骨髓间充质干细胞对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响》文中指出第一部分大鼠小肠移植慢性排斥反应模型的建立及病理学比较目的采用F344→Lewis大鼠组合初步建立大鼠小肠移植慢性排斥反应模型,观测小肠组织慢性排斥病理表现。方法利用显微外科技术构建异系异位和异系原位大鼠小肠移植模型,术后0-14天给予皮下注射环孢素。术后90天进行移植物活检,常规病理学检测。乳果糖／甘露醇比值、D-木糖吸收实验检测移植肠功能。结果（1）异位和原位小肠移植大鼠均能长期存活,大部分超过90天。（2）异位小肠移植在术后90天出现典型的慢性排斥反应的病理学特征,包括粘膜结构改变、间质纤维化、白细胞浸润和动脉内膜增殖。（3）术后90天的原位移植小肠组织学形态相对正常。原位小肠移植大鼠在术后150天左右具有慢性排斥的病理组织学特征,但病变程度轻于术后90天的异位移植小肠。（4）大部分原位小肠移植大鼠在术后150天出现持续的体重下降,且不能被环孢素逆转。当体重下降超过30%时,乳果糖／甘露醇比值和D-木糖吸收实验结果证实移植肠功能下降。结论（1）异位小肠移植在术后90天出现典型的慢性排斥反应的病理学改变,而原位小肠移植在该时间点无慢性排斥反应改变。（2）原位小肠移植于术后150天左右出现慢性排斥改变,以持续性体重下降为临床表现,并伴随肠道吸收功能以及屏障功能的下降。（3）F344→Lewis异位小肠移植手术操作相对简单,经练习后手术成功率可达85%以上。（4）由于异位小肠移植可以出现典型的慢性排斥反应的组织病理学特征,故后继实验采用F344→Lewis异位小肠移植模型,并根据组织病理学检查结果确定术后90天为观察终点。第二部分大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的研究目的建立大鼠异位小肠移植模型并研究相关慢性排斥反应机理。方法利用显微外科技术构建同系和异系大鼠小肠移植模型,分为3组：同系移植组、异系移植组、异系治疗组（给予环孢素）。分别在术后7天、14天、30天、60天、90天进行移植物活检,常规病理学检测,建立小肠移植排斥反应组织学评分标准。应用Real time-PCR技术检测移植物内TGFβ1、PDGF、PDGF-C mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法检测CD68、TGFβ1、PDGF-C表达情况。结果（1）异系对照组全部大鼠均在术后15天内死亡。（2）异系治疗组自术后14天开始炎细胞浸润程度病理评分显着高于同期同系对照组,术后30天粘膜结构变化以及纤维化程度病理评分显着高于同期对照组,术后60天动脉内膜增殖开始有显着差异（3）CD68检测提示在慢性排斥反应全程CD68的表达持续升高,术后60天达最高水平。（4）异系治疗组的TGF-β1及PDGF-C mRNA转录水平和蛋白表达水平在第60天较同期的同系移植组显着升高,免疫组化可见TGF-β1在间质高表达,PDGF-C主要由组织细胞高表达于胞浆及胞膜。结论（1）术后第60天环孢素组的单核巨噬细胞浸润严重,同时伴TGFβ1、PDGF-C的高表达。（2）异系治疗组术后60天即可出现慢性排斥反应表现,并同时伴有CD68、TGFβ1、PDGF-C分子的显着高表达,提示CD68、TGFβ1、PDGF-C对于判定慢性排斥反应具有指导意义。第三部分大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养与鉴定目的建立稳定的大鼠间充质干细胞的体外分离、培养、鉴定方法,为进一步开展研究MSCs对小肠移植慢性排斥反应的影响提供细胞来源。方法选用1月龄清洁级Lewis大鼠,处死消毒后取其长骨,用PBS缓冲液冲洗骨髓腔,收集冲洗液,采用密度梯度离心法分离获取细胞,培养后取贴壁细胞进行传代培养。取第3代生长状态良好的细胞,0.25%胰蛋白酶-EDTA消化制成细胞悬液计数并记录生长曲线。取第3、4、5代生长状态良好细胞,以流式细胞术鉴定细胞表型。取第3代MSCs定向诱导分化成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色、茜素红染色进行成骨细胞鉴定。CFSE标记第3代MSCs并观察标记效率。结果（1）体外培养的原代MSCs72小时可见贴壁细胞,3周左右可达到90%的融合,2代后即可得到较为纯化的MSC成纤维样细胞。（2）流式细胞仪检测第3代MSCs表面标记物CD29、CD90的阳性率可达96%以上,CD34、CD45的阳性率低于3%。（3）碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果证实成骨细胞诱导成功。（4）用CFSE进行细胞标记后,荧光显微镜下见几乎所有MSCs均已被标记绿色荧光,流式细胞仪检测结果显示标记比例达100%,提示CFSE标记效率高。结论（1）MSCs是一类增殖能力旺盛,具有多向分化潜能的干细胞。（2）密度梯度离心联合贴壁培养法是一种简便易行的培养MSCs方法,操作简单,成功率高,可以作为培养大鼠骨髓MSCs的常规方法。（3）CFSE标记可作为标记MSCs的一种有效手段。第四部分大鼠骨髓间充质干细胞体外免疫抑制功能的实验研究目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）在混合淋巴细胞培养反应中对同种异体脾细胞免疫应答反应的影响,并初步探讨其作用机制。方法建立MSCs和同种异体脾细胞共培养体系,反应体系总量300ul,以刀豆蛋白A为刺激因素,CFSE标记部分反应细胞。共分4组：①脾细胞,②脾细胞+conA,③脾细胞+MSCs,④脾细胞+MSCs+conA,每组6复孔,每孔脾细胞数5×105个,MSCs为105个,ConA终浓度为10ug/ml。混合培养72小时后,于倒置荧光显微镜下观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析荧光强度以及CD4、CD8比例。结果MSCs和脾细胞共培养组未见明显的增殖子峰,其中CD4、CD8阳性细胞表达明显下降,而CD4/CD8比值无明显变化。结论骨髓MSCs体外能够抑制刀豆蛋白A引起的淋巴细胞增殖反应,对CD4 T细胞、CD8 T细胞均有抑制作用。第五部分受体源骨髓间充质干细胞对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响目的研究静脉输注受体骨髓间充质干细胞（MSCs）对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响及其机制。方法利用显微外科技术构建异系小肠移植模型16只,随机分为2组：对照组和MSCs输注组。小肠移植后24小时,确定手术成功后,MSCs组自阴茎背静脉输注骨髓间充质干细胞107个（溶液为2ml生理盐水）,对照组给予同体积的生理盐水,术后0-14天两组均给予环孢素处理。观察两组移植大鼠术后生存状态,于术后第60天全部剖杀获取移植小肠。常规病理学检测,进行慢性排斥反应病理评分。应用Realtime-PCR技术检测移植物内TGFβ1、PDGF-C mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法检测CD68、PDGF-C表达情况。另外再建立两只大鼠异位小肠移植模型,给予环孢素处理,术后24小时给予阴茎背静脉输注标记了荧光CFSE的骨髓MSCs,术后7天剖杀获取移植小肠以及自体其他组织器官备冰冻切片检查以观察MSCs在受体内的定位。结果（1）输注的骨髓MSCs可特异的定向迁移至移植小肠。（2）术后60天MSCs组小肠标本的粘膜结构、炎细胞浸润、纤维化程度和动脉内膜增殖程度的评分与环孢素组均有统计学差异。（3）术后60天MSCs组小肠标本表达CD68、TGFβ1、PDGF-C分子水平均低于环孢素组。结论MSCs在一定程度上能移抑制慢性排斥的进程,其作用机制可能是MSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用,减少了巨噬细胞浸润以及TGFβ1、PDGF-C分子的表达。
二、肾移植后慢性排斥反应研究进展—Ⅰ.临床、病理和发病机制（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肾移植后慢性排斥反应研究进展—Ⅰ.临床、病理和发病机制（论文提纲范文）
（1）移植胰腺病理学诊断标准及其进展（论文提纲范文）
| 1 移植胰腺活检的方法及其相关的研究进展 |
| 1.1 移植胰腺活检的方法 |
| 1.1.1 经皮穿刺活检移植胰腺经皮穿刺活检（percutaneous biopsy）包括超声引导下移植胰腺活检（ultrasound-guided percutaneous pancreatic allograft biopsy) |
| 1.1.2 膀胱镜活检 |
| 1.1.3 腹腔镜活检 |
| 1.1.4 内窥镜活检 |
| 1.1.5 开放式活检 |
| 1.2 移植胰腺活检的相关问题 |
| 1.2.1 急性排斥反应对移植胰腺存活的影响 |
| 1.2.2 关于胰腺活检中标本的获取率 |
| 1.2.3 关于胰肾联合移植的活检及其急性排斥反应的协同性问题 |
| 2 移植胰腺活检排斥反应诊断标准及其进展 |
| 3 移植胰腺主要的并发症及其病理学表现 |
| 3.1 移植胰腺血栓栓塞 |
| 3.2 移植胰腺的排斥反应 |
| 3.2.1 急性T细胞介导的排斥反应 |
| 3.2.1. 1 移植胰腺急性T细胞介导的排斥反应的腺泡及胰腺导管炎病变 |
| 3.2.1. 2 移植胰腺急性T细胞介导的排斥反应的血管病变 |
| 3.2.1. 3 移植胰腺急性T细胞介导的排斥反应的分级 |
| 3.2.2 抗体介导的排斥反应 |
| 3.2.2. 1 急性抗体介导的排斥反应 |
| 3.2.2. 2 急性抗体介导的排斥反应的分级 |
| 3.2.2. 3 移植胰腺急性抗体介导的排斥反应中C4d阳性的判定 |
| 3.2.2. 4 移植胰腺急性抗体介导的排斥反应的病理学报告模式 |
| 3.2.3 慢性排斥反应 |
| 3.3 移植胰腺的胰腺炎 |
| 3.3.1 移植胰腺急性胰腺炎 |
| 3.3.2 移植胰腺慢性胰腺炎 |
| 3.4 移植胰腺胰岛炎与糖尿病复发 |
| 3.5 移植胰腺巨细胞病毒感染 |
| 3.6 移植后淋巴组织增生性疾病 |
| 3.7 免疫抑制剂对移植胰腺的影响 |
| 4 小结 |
（2）缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 缺血损伤导致新生表位的产生 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 缺血损伤相关的新生表位在器官移植中的作用及机制 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第三部分 新生表位诱导的移植术后体液性排斥反应的防治探讨 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第四部分 褪黑素对肾缺血再灌注损伤的作用及机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 抗体介导的排斥反应在器官移植中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（3）花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 内容摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第一部分 移植动脉HE染色及新生内膜增厚情况 |
| 第二部分 移植动脉免疫组织化学染色ICAM-1、TNF-α、PCNA、SMA-α,TGF-β1和NF-κB/P65 的表达情况 |
| 讨论 |
| 第一部分 CAV相关进展 |
| 第二部分 CAV大鼠模型建立 |
| 第三部分 花椒毒酚在CAV中的防治作用 |
| 第四部分 本实验的不足之处及展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 CAV 概述及相关进展 |
| 参考文献 |
| 后记 |
| 附录:攻读硕士学位期间发表的部分学术论着 |
（4）沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分: 改良的供体小膀耽瓣-受体膀胱双层缝合建立大鼠肾移植模型 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分: 沙利度胺对大鼠肾移植急性排斥反应的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分: 沙利度胺对大鼠肾移植慢性排斥反应的作用及其免疫调节机制的初步研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分: 沙利度胺对异体反应性淋巴细胞的调控作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（5）肝移植后糖蛋白130多态性与新发糖尿病风险分析（论文提纲范文）
| Acknowledgement |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| Abbreviation |
| 1 Introduction |
| 2 Materials and methods |
| 2.1 Experimental materials |
| 2.2 Experimental method |
| 2.3 statistical analysis |
| 2.4 Diagnostic criteria |
| 3 Results |
| 3.1 Clinical manifestations of NODAT group and Non-NODAT |
| 3.2 Association between gene polymorphism and NODAT |
| 3.3 Risk factors of NODAT |
| 3.4 Establishment of risk factors model for NODAT |
| 3.5 Comparison of curative effect after liver transplantation |
| 3.6 Comparison of overall survival rates and survival rates of liver graft after livertransplantation |
| 4 Discussion |
| 4.1 Metabolic syndrome after liver transplantation |
| 4.2 New onset diabetes mellitus after liver transplantation |
| 4.3 GP130 and diabetes mellitus |
| 4.4 Hepatitis virus and NODAT |
| 4.5 Probable mechanisms of B-cell damage after HCV and CMV leading toNODAT |
| 4.6 Analysis of the incidence of new-onset diabetes mellitus after livertransplantation |
| 4.7 Immunosuppresive Therapy |
| 4.8 Treatment for NODAT |
| 4.9 Significance of this research |
| 5 Conclusion |
| Reference |
| 论文中文版 |
| 1 介绍 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| Review |
| Reference |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（6）改进SD-Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的造模方法（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1材料和方法Materials and methods |
| 2结果Results |
| 3讨论Discussion |
（7）Treg/Th17/Th1细胞及其细胞因子在肾移植排斥反应中的机制研究及临床意义（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 免疫学在器官移植方面的研究进展 |
| 1.1.1 同种异体肾移植 |
| 1.1.1.1 器官移植基础的发展历史 |
| 1.1.2 同种异体肾脏移植术 |
| 1.1.2.1 术前准备 |
| 1.1.2.2 肾移植外科技术 |
| 1.1.2.3 术后处理 |
| 1.1.3 现状及研究进展 |
| 1.2 移植免疫学 |
| 1.2.1 移植免疫基础 |
| 1.2.2 移植物排斥反应 |
| 1.2.3 配型试验 |
| 1.3 免疫耐受 |
| 1.3.1 概述 |
| 1.3.2 免疫耐受基本理论 |
| 1.3.3 免疫耐受建立的机制 |
| 1.3.4 移植免疫耐受相关研究进展 |
| 1.4 调节性 T 细胞在肾移植排斥反应中的作用 |
| 1.4.1 肾移植排斥反应 |
| 1.4.2 调节性 T 细胞的功能 |
| 第2章 调节性 T 细胞亚群及其功能在肾移植排斥反应中作用的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 临床指标 |
| 2.2.3 标本采集 |
| 2.2.4 主要试剂和仪器 |
| 2.2.5 Foxp3+调节性 T 细胞（Rregulatory T cell，Treg）水平测定 |
| 2.2.5.1 样本的采集与处理 |
| 2.2.5.2 操作步骤 |
| 2.2.5.3 细胞计数 |
| 2.2.6 酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清 IL-10 水平 |
| 2.2.7 研究方法 |
| 2.2.8 观察指标 |
| 2.2.10 统计学处理 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 入选患者的一般信息和临床特点 |
| 2.3.2 肾衰竭患者流式试验的结果分析 |
| 2.3.3 肾衰竭患者移植后临床分析 |
| 2.3.4 肾衰竭患者移植前后流式试验的结果分析 |
| 2.3.5 肾衰竭患者血清中 IL-10 的表达 |
| 2.3.6 肾衰竭患者移植前后血清中 IL-10 的表达 |
| 2.3.7 肾衰竭患者调节性 T 细胞和临床指标间的相关性 |
| 2.3.8 肾衰竭患者血清中 IL-10 和临床指标间的相关性 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 CD4+ T 细胞亚群及其功能在肾移植排斥反应中作用的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 研究对象 |
| 3.2.2 临床指标 |
| 3.2.3 标本采集 |
| 3.2.4 主要试剂和仪器 |
| 3.2.5 Foxp3+ 调节性 T 细胞（Rregulatory T cell，Treg）水平测定 |
| 3.2.6 流式细胞仪对外周血辅助性 T 细胞的检测 |
| 3.2.6.1 外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMC）分离 |
| 3.2.6.2 细胞计数 |
| 3.2.6.3 操作步骤 |
| 3.2.7 微量样本多指标流式蛋白定量技术（CBA）对 Th1/Th2 细胞因子检测 |
| 3.2.8 研究方法 |
| 3.2.9 观察指标 |
| 3.2.10 统计学处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 入选患者的一般信息和临床特点 |
| 3.3.2 肾衰竭患者流式试验的结果分析 |
| 3.3.3 肾衰竭患者移植后临床分析 |
| 3.3.4 肾衰竭患者移植前后流式试验的结果分析 |
| 3.3.5 肾衰竭患者血清中 Th1/Th2/Th17 型细胞因子的表达 |
| 3.3.6 肾衰竭患者移植前后血清中 Th1/Th2/Th17 型细胞因子的表达 |
| 3.3.7 肾衰竭患者调节性 T 细胞和辅助性 T 细胞及其细胞因子之间的相关性 |
| 3.3.8 肾衰竭患者 CD4+T 细胞和临床指标间的相关性 |
| 3.3.9 肾衰竭患者血清中 Th1/Th2/Th17 型细胞因子的水平和临床指标间的相关性 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）大鼠肾移植慢性排斥模型中外周血清间α胰蛋白酶抑制剂水平的意义探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 大鼠肾移植模型的建立 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 大鼠肾移植慢性排斥反应组织病理及Treg细胞检测 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 ITI的检测及初步探讨其在大鼠肾移植慢性排斥反应中的意义 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 本研究的不足之处 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（9）供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥的作用及其免疫调节机制的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 SD-Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的建立和改进 |
| 引言 |
| 1、材料和方法 |
| 2、结果 |
| 3、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离、培养和鉴定 |
| 1、材料与方法 |
| 2、结果 |
| 3、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥移植肾组织病理学的影响 |
| 引言 |
| 1、材料与方法 |
| 2、结果 |
| 3、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥移植肾组织TGF-β_1表达的影响 |
| 引言 |
| 1、材料与方法 |
| 2、结果 |
| 3、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 供者骨髓间充质干细胞对肾移植慢性排斥大鼠Th1/Th2细胞因子的影响 |
| 引言 |
| 1、材料与方法 |
| 2、结果 |
| 3、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 文献综述 骨髓间充质干细胞的免疫特性及其在器官移植的应用研究现状 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文名词缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
| 统计学审稿证明 |
（10）受体源骨髓间充质干细胞对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、大鼠小肠移植慢性排斥反应模型建立及病理学变化研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 模型的建立 |
| 1.1.2 移植物的组织病理学观察 |
| 1.1.3 小肠移植慢性排斥病理学诊断标准 |
| 1.1.4 D-木糖吸收实验 |
| 1.1.5 高效液相色谱法测定尿中乳果糖/甘露醇比值 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 受体大鼠生存状态的观察 |
| 1.2.2 移植小肠标本的组织病理学检查 |
| 1.2.3 血清D-木糖浓度的测定检测移植小肠吸收功能的变化 |
| 1.2.4 乳果糖/甘露醇(L/M)比值的测定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 小肠移植慢性排斥实验动物模型 |
| 1.3.2 大鼠异位小肠移植和原位小肠移植术后状况 |
| 1.3.3 异位和原位小肠移植慢性排斥反应组织病理学确认 |
| 1.3.4 异位和原位小肠移植术后肠功能变化 |
| 1.4 小结 |
| 二、大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 动物模型的建立 |
| 2.1.2 小肠移植标本排斥反应组织病理学评分 |
| 2.1.3 移植物的病理组织学检测 |
| 2.1.4 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测移植物TGFβ1、PDGF、PDGF-CmRNA转录水平 |
| 2.1.5 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 受体大鼠生存状态的观察 |
| 2.2.2 移植物活检标本的病理组织学检查 |
| 2.2.3 CD68分子的表达情况 |
| 2.2.4 TGFβ1的分子表达水平 |
| 2.2.5 PDGF、PDGF-C的分子表达水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 小肠移植与慢性排斥反应 |
| 2.3.2 小肠移植慢性排斥反应的临床表现及病理学诊断标准 |
| 2.3.3 小肠移植慢性排斥反应的发病机理 |
| 2.3.4 分子生物学检测在小肠移植慢性排斥反应中的意义 |
| 2.4 小结 |
| 三、大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离培养与鉴定 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要耗材 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 |
| 3.1.5 主要器械 |
| 3.1.6 动物 |
| 3.1.7 骨髓间充质干细胞的获取 |
| 3.1.8 骨髓间充质干细胞原代培养 |
| 3.1.9 骨髓间充质干细胞的传代扩增 |
| 3.1.10 生长曲线的绘制 |
| 3.1.11 细胞计数与存活测试 |
| 3.1.12 流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞纯度 |
| 3.1.13 骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 骨髓间充质干细胞体外培养情况及其形态学特征 |
| 3.2.2 骨髓间充质干细胞生长曲线 |
| 3.2.3 骨髓间充质干细胞诱导分化为成骨细胞 |
| 3.2.4 骨髓间充质干细胞表型鉴定 |
| 3.2.5 CFSE标记骨髓间充质干细胞结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、大鼠骨髓间充质干细胞体外免疫抑制功能的实验研究 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 主要仪器 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要耗材 |
| 4.1.4 主要溶液的配制 |
| 4.1.5 主要器械 |
| 4.1.6 动物 |
| 4.1.7 反应细胞的制备 |
| 4.1.8 骨髓间充质干细胞悬液的制备 |
| 4.1.9 混合淋巴细胞培养检测MSCs对脾细胞增殖的影响 |
| 4.1.10 统计学方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 混合淋巴细胞增殖实验结果 |
| 4.2.2 混合淋巴细胞培养后CD4、CD8检测结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 骨髓间充质干细胞的低免疫原性 |
| 4.3.2 骨髓间充质干细胞与免疫细胞的相互作用 |
| 4.4 小结 |
| 五、受体骨髓间充质干细胞对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响 |
| 5.1 对象和方法 |
| 5.1.1 大鼠骨髓间充质干细胞的制备以及荧光标记 |
| 5.1.2 大鼠异位小肠移植慢性排斥反应模型的建立 |
| 5.1.3 冰冻切片观察CFSE标记的骨髓MSCs在受者体内的定位 |
| 5.1.4 移植物的病理组织学检测 |
| 5.1.5 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测移植物TGFβ1、PDGF-C mRNA转录水平 |
| 5.1.6 统计学方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 骨髓MSCs在小肠移植大鼠体内的定位 |
| 5.2.2 受体大鼠生存状态的观察 |
| 5.2.3 移植小肠标本的病理组织学检查 |
| 5.2.4 CD68分子表达 |
| 5.2.5 TGFβ1的分子表达水平 |
| 5.2.6 PDGF-C的分子表达水平 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 小肠移植慢性排斥研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
四、肾移植后慢性排斥反应研究进展—Ⅰ.临床、病理和发病机制（论文参考文献）
- [1]移植胰腺病理学诊断标准及其进展[J]. 郭晖,明长生,陈实. 器官移植, 2022(02)
- [2]缺血损伤相关的新生表位在器官移植术后体液性排斥中的作用及机制研究[D]. 刘浩. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [3]花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究[D]. 张鹏. 三峡大学, 2020(06)
- [4]沙利度胺对大鼠肾移植模型慢性排斥反应的保护作用及机制研究[D]. 张岩. 山东大学, 2019(02)
- [5]肝移植后糖蛋白130多态性与新发糖尿病风险分析[D]. Edoo Muhammad Ibrahim Alhadi. 浙江大学, 2019(03)
- [6]改进SD-Wistar大鼠肾移植慢性排斥模型的造模方法[J]. 余鹏程,刘永光,郭颖,李民,肖宗宇,胡孔和,黄进军,辛军,吴志强,赵明. 中国组织工程研究, 2015(40)
- [7]Treg/Th17/Th1细胞及其细胞因子在肾移植排斥反应中的机制研究及临床意义[D]. 胡克邦. 吉林大学, 2014(03)
- [8]大鼠肾移植慢性排斥模型中外周血清间α胰蛋白酶抑制剂水平的意义探讨[D]. 张建强. 南方医科大学, 2012(04)
- [9]供者骨髓间充质干细胞对大鼠肾移植慢性排斥的作用及其免疫调节机制的初步研究[D]. 余鹏程. 南方医科大学, 2011(04)
- [10]受体源骨髓间充质干细胞对大鼠异位小肠移植慢性排斥反应的影响[D]. 李富新. 天津医科大学, 2010(12)