一、睾丸生殖细胞研究进展（论文文献综述）
任发[1]（2021）在《奶山羊精子发生关键分子挖掘与性控精液研究》文中研究表明奶山羊产业是我国奶业发展的重要组成部分,而目前我国优质高产奶山羊存栏量不足,良种问题成为奶山羊种业发展面临的重大挑战。在生产中充分发挥优秀种公羊的繁殖力,对于奶山羊群体的遗传改良具有显着作用。雄性动物繁殖力依赖于精子发生,且在睾丸曲细精管中进行,包含精原细胞有丝分裂、精母细胞减数分裂以及圆形精子细胞变形等过程,受到极其严格且精密的分子调控。当前高通量测序技术的发展使得人们进一步认识到精子发生中成千上万的分子变化,而这些关键分子的精确表达对于维持精子发生至关重要。然而,目前关于奶山羊精子发生的关键分子特征尚不清楚。此外,利用性控精液进行人工授精是快速扩繁高产奶山羊的有效途径,但性控精液在奶山羊方面仍有待进一步研究。因此,本研究以关中奶山羊为试验对象,利用免疫组织化学染色和组织观察法解析了奶山羊雄性生殖细胞与支持细胞的发育规律,并通过转录组学测序技术对精子发生潜在关键分子进行挖掘,在此基础上初步建立了一种奶山羊性控精液分选方法。本研究主要获得以下结果:1.采集8组不同日龄（15 d、30 d、45 d、60 d、75 d、90 d、180 d和240 d）的奶山羊睾丸组织,利用免疫组织化学染色和组织形态学观察,对雄性生殖细胞和支持细胞发育规律进行探究。结果表明:（1）奶山羊曲细精管直径随着睾丸发育而持续增加,且在75～90 d增长速度最快,在90 d时初次出现曲细精管管腔、圆形精子细胞和少量精子,提示奶山羊已经进入初情期。在180 d观察到大量精子,提示奶山羊已经进入性成熟阶段;（2）性原细胞在75 d前彻底转化为未分化精原细胞,未分化精原细胞在30 d启动分化,而在75～90 d未分化精原细胞增殖状态较为活跃,提示生精过程被激活;（3）SOX9和AMH均可作为奶山羊睾丸支持细胞的分子标记物,且AMH仅在未成熟的支持细胞中表达。支持细胞的增殖状态在45 d较为活跃,90 d后发育成熟。2.利用RNA-seq技术对奶山羊性成熟前（45 d）和性成熟后（240 d）的曲细精管组织进行转录组测序,挖掘并分析精子发生的关键lnc RNA和m RNA。结果表明:（1）在曲细精管组织中鉴定到11612个lnc RNA和18217个m RNA,其中性成熟前后差异表达lnc RNA和m RNA分别为7594和11986个;（2）挖掘出229个潜在精子发生关键m RNA,在性成熟后曲细精管样本中挖掘出KIT、DMRT1和SOX9等42个下调基因,DDX4、SYCP1和SYCP3等187个上调基因,发现PI3K/Akt、MAPK、AMPK、Ras和Rap1等信号通路可能调控精子发生;（3）在lnc RNA-m RNA互作网络发现TCONS＿00029023、TCONS＿00035144、TCONS＿00017872、TCONS＿00051085和TCONS＿00033882及其靶基因GSKIP、KAT8、MBD3L1、NANOS3和PRM3等关键分子可能参与调控奶山羊精子发生。3.采用单细胞转录组测序（single cell RNA sequencing,sc RNA-seq）技术对出生后45 d、90 d和180 d的奶山羊曲细精管单细胞悬液进行测序,从单细胞水平系统解析精子发生的关键分子特征。结果表明:（1）捕获了来自3个不同日龄曲细精管的25373个细胞,成功鉴定精子发生过程所包含的精原细胞、精母细胞、圆形精子细胞、支持细胞、间质细胞、巨噬细胞、内皮细胞等细胞类型及其在不同日龄的细胞数量占比;（2）挖掘出一批潜在的睾丸生殖细胞及体细胞标记基因,例如在精原细胞高表达SOHLH1、PAGE4和DMRT1,精母细胞高表达YBX2、HSPB9和LYPD4,圆形精子细胞高表达PRM2、SPEM1和PRSS37,支持细胞高表达AMH、INHA和EGR1,间质细胞高表达INSL3、ACTA2和STAR等,解析了睾丸体细胞与生殖细胞相互作用的关键信号通路（睾酮、维甲酸、PDGF、FGF和WNT通路等）及其分子特征;（3）通过Monocles算法对9个生殖细胞亚群进行拟时序分化轨迹分析,揭示了生殖细胞分化过程中精原细胞、精母细胞以及圆形精子细胞的关键分子特征,例如DMRT1、TOP2A和TNP1等,成功构建了奶山羊精子发生单细胞转录图谱。4.利用RNA-seq数据对奶山羊性染色体编码基因进行注释,挖掘性染色体关键分子并进行性控精液研究。结果表明:（1）在奶山羊性染色体上鉴定出ABCB7、ABCD1和ACE2等500个X染色体编码基因,以及SRY、USP9Y和UTY等9个Y染色体编码基因,挖掘出TLR7和TLR8等19个X染色体编码受体基因;（2）通过免疫组织化学染色发现TLR7/8蛋白在睾丸圆形精子细胞、附睾精子和成熟精子中均有表达,且TLR7/8阳性精子占比接近50%;（3）TLR7/8蛋白在奶山羊X精子尾部特异表达,激活TLR7/8信号通路后可通过GSK3α/β-己糖激酶途径降低X精子的线粒体活性和ATP水平,最终导致X精子运动能力下降;（4）利用分选所得X精子进行体外受精,获得雌性胚胎比例为80.52%±6.75%,雄性胚胎比例为19.48%±6.75%。综上所述,本研究在从组织学层面解析奶山羊雄性生殖细胞与支持细胞发育规律的基础上,利用RNA-seq和sc RNA-seq技术对奶山羊精子发生关键分子进行挖掘与分析,明确了雄性生殖细胞与支持细胞发育的关键时间节点,筛选出一批精子发生潜在关键基因和lnc RNA,鉴定了睾丸曲细精管的主要细胞类型并解析其关键分子特征,成功构建了奶山羊精子发生的单细胞转录图谱。此外,利用RNA-seq测序数据注释出X染色体和Y染色体编码的关键基因,并在此基础上初步建立了一种奶山羊性控精液分选方法。本研究将为奶山羊的分子育种和性控精液研究提供新的科学依据,同时为哺乳动物精子发生和雄性不育等相关研究提供理论参考。
范小瑞[2]（2021）在《猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究》文中研究表明目的:自发性单侧隐睾公猪是一侧睾丸位于腹部或腹股沟管,这使得睾丸接近或位于体温环境。不同品种的仔猪中,单侧隐睾的发病率为2%。猪隐睾症主要关注的问题是,腹部异常高温导致隐睾睾丸正常精子发生中断。生殖细胞的建立和维持是保证一个物种生存的关键,受多种因素的影响,其中温度是最主要的因素。雄性生殖细胞（精子）是由精子发生的复杂过程产生的。精子发生是在低于核心体温2-8°C的阴囊温度下进行。睾丸暴露在体温环境导致精子发生阻滞,但具体的分子机制尚不清楚。自发性单侧隐睾是研究体温对精子发生影响的良好动物模型。方法:本研究以断奶前仔猪（20d,15Kg左右,4头）、隐睾和对侧阴囊公猪睾丸（7-9月龄,140-150Kg,4头）为研究对象,手术摘取两侧睾丸,部分置于液氮,用于提取总mRNA和蛋白,以及进行RNA-seq和i TARQ检测;部分置于Bouin氏固定液中,用于TUNEL、HE染色和免疫组织化学分析。雄性健康SD大鼠（30d,90～100g,6只）,手术诱导单侧隐睾,隐睾30d,3只手术摘取两侧睾丸,置于Bouin氏固定液中,用于免疫组织化学分析;3只用生物素示踪法检测两侧睾丸血睾屏障通透性变化。结果:1.自发单侧隐睾公猪睾丸支持细胞和生殖细胞数量的变化HE染色结果显示,与对侧阴囊睾丸相比,隐睾睾丸只含有支持细胞和少量精原细胞,未见减数分裂后的生殖细胞。形态计量学研究结果显示,与对侧阴囊睾丸相比,隐睾睾丸生殖细胞总数显着减少,支持细胞总数无显着变化;较断奶前仔猪睾丸,隐睾睾丸生殖细胞和支持细胞总数均显着增加。2.自发单侧隐睾对公猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达与定位的影响TUNEL结果显示,精原细胞凋亡信号明显减少。qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中PCNA和Bax的蛋白和mRNA水平显着降低;细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达升高。免疫组织化学结果显示,PCNA表达于精原细胞的细胞核。隐睾导致Bax在精原细胞的重新分配,从细胞质转移至细胞核表达。Bcl-2在各实验组中优先表达于近管腔部位生殖细胞的细胞质和细胞核。与对侧阴囊组相比,隐睾组PCNA阳性细胞和TUNEL阳性细胞减少。3.自发单侧隐睾对公猪睾丸自噬相关蛋白表达与定位的影响qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中LC3和Beclin1的蛋白和mRNA水平显着降低;p62的表达显着升高。免疫组织化学结果显示,LC3表达于精原细胞的细胞质。与对侧阴囊组相比,隐睾组LC3阳性细胞减少。4.自发单侧隐睾对公猪睾丸血睾屏障紧密连接分子表达与定位的影响qRT-PCR和Western Blot结果显示,隐睾组中Claudin-11的蛋白和mRNA水平显着升高;Occludin和ZO-1蛋白和mRNA水平显着降低。免疫组织化学结果显示,隐睾导致Claudin-11、Occludin和ZO-1的异位表达:由细胞膜转移至细胞质表达。5.单侧隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响免疫组织化学结果显示,隐睾导致Claudin-11和ZO-1的异位表达:由细胞膜转移至细胞质表达。生物素示踪结果显示,生物素进入隐睾睾丸管腔。6.转录组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸基因表达的影响RNA-seq结果显示,断奶前仔猪和隐睾睾丸组织比较,共有6901个差异表达基因,其中4603个上调,2298个下调。隐睾和对侧阴囊睾丸组织比较,共有13873个差异基因,其中8216个上调,5657个下调。GO富集分析显示,隐睾睾丸和断奶前仔猪睾丸相比,较多差异基因的功能与细胞黏附、细胞发展和精子发生等有关;隐睾和对侧阴囊睾丸组相比,较多差异基因的功能与精子发生、细胞分化和细胞迁移等有关。KEGG Pathway富集分析显示,断奶前仔猪与隐睾睾丸相比,差异基因较多富集于代谢、ECM受体相互作用和细胞黏附等信号通路。隐睾睾丸与对侧阴囊睾丸相比,差异基因较多富集于物质代谢、细胞黏附分子（CAMs）和信号转导相关通路（凋亡、吞噬、Ras和MAPK通路）等,且CAMs通路相关基因大多上调表达,包括CLDN11（Claudin-11）。下调基因中Nectin-3在细胞黏附、迁移和极化中发挥作用。7.蛋白质组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸蛋白表达的影响结果显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,1459个差异蛋白:773个上调,686个下调;隐睾组和对侧阴囊组相比,1424个差异蛋白:656个上调,768个下调。GO富集分析显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,较多差异蛋白的功能与细胞黏附、代谢和胞外基质等有关;隐睾组和对侧阴囊组相比,较多差异蛋白的功能与精子发生、繁殖和能量代谢有关。KEGG Pathway富集分析显示,隐睾组和断奶前仔猪相比,差异蛋白主要富集在黏着斑信号、DNA复制和视黄醇代谢通路。隐睾组和对侧阴囊组相比,差异蛋白主要富集在DNA复制、蛋白酶体、缝隙连接和黏着连接通路。SDR5A1和CYP11A等的下调表达,提示睾酮合成和代谢受阻。结论:隐睾导致猪睾丸生殖细胞增殖不足,过度凋亡和自噬;支持细胞结构和功能受损,血睾屏障（BTB）通透性增加,支持细胞供能不足,最终导致猪睾丸生精障碍。
冯天雨[3]（2021）在《白藜芦醇对奶山羊精原干细胞冷冻保存效果的影响》文中指出精原干细胞（SSCs）位于雄性动物睾丸曲细精管的基底膜,是唯一能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。SSCs既能自我更新以维持干细胞池的稳定,又能分化参与精子发生,因而SSCs的研究对于了解雄性生殖细胞的分化机制具有重要意义,并且在转基因动物生产和男性不育症治疗方面具有临床应用价值。细胞的冷冻保存能够保持细胞的生物学特性并保障细胞的长期供应,而SSCs冷冻保存是保存优质未成熟雄性奶山羊生殖能力的重要方法。但是,冷冻-解冻过程会增加细胞内活性氧（ROS）的产生,引起SSCs氧化应激,并导致细胞凋亡,降低冻后细胞活力,因而SSCs冷冻保存过程中所受的氧化损伤是一个亟待解决的问题。白藜芦醇是一种天然植物多酚类化合物,具有广泛的生物和药理活性,包括抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、神经保护、心血管疾病防治等作用。目前对于家畜SSCs冷冻保存的研究较少,且尚未有白藜芦醇对SSCs冷冻保存效果方面的研究报道。因此,本研究首先对不同年龄奶山羊的睾丸进行切片观察和蛋白检测,以确定SSCs的表达情况,再通过两步酶消化和差速贴壁从奶山羊睾丸分离和纯化SSCs;其次用含有不同浓度白藜芦醇的冷冻保存液重悬SSCs并利用液氮进行超低温冷冻保存,解冻后检测SSCs活力,筛选最适白藜芦醇浓度;最后通过试剂盒检测、流式细胞术、Western blot、透射电镜等方法探究冷冻-解冻细胞的抗氧化、抗凋亡以及AMPK激活情况,初步揭示白藜芦醇对奶山羊SSCs冷冻保存的保护机制。本试验主要研究结果如下:1.通过不同月龄（15日龄、1月龄、3月龄、6月龄、10月龄）奶山羊睾丸的苏木精-伊红（HE）染色和PGP9.5免疫组织化学染色观察发现,随着奶山羊年龄的增长,曲细精管直径变大,睾丸细胞种类增加,精原细胞总量增多但所占比例下降。Western blot检测不同日龄（15、30、45、60、75、90、180日龄）奶山羊睾丸中PGP9.5和THY1的蛋白表达量显示,60日龄前的奶山羊睾丸中精原细胞含量显着高于75日龄后（P<0.05）,适合用于提取SSCs。2.通过机械分离和两步酶消化分离睾丸细胞,再经差速贴壁纯化收集奶山羊SSCs。利用免疫荧光染色对细胞进行鉴定显示,纯化后的细胞高表达分子标记GFRα1、PLZF、PGP9.5和THY1,表示本研究方法可获得纯度较高的SSCs。3.在冷冻保存液中添加不同浓度（0、0.1、1、10、100μmol/L）白藜芦醇,使用缓慢冷冻法保存奶山羊SSCs,37℃解冻后对细胞的活力和抗氧化能力进行测定。利用CCK-8和台盼蓝染色检测SSCs活力,结果显示当白藜芦醇浓度为10μmol/L时冻后细胞活力显着高于对照组和其他试验组（P<0.05）。与对照组相比较,冷冻保存液中添加白藜芦醇显着提高了冷冻-解冻后SSCs的总抗氧化能力（T-AOC）、线粒体膜电位和抗氧化酶（SOD、CAT和GSH-Px）活性（P<0.05）,同时显着降低了细胞内ROS水平和丙二醛（MDA）含量（P<0.05）,其中10μmol/L白藜芦醇组SSCs的抗氧化效果显着优于其他试验组（P<0.05）,而ROS水平和MDA含量与100μmol/L组差异不显着（P>0.05）。4.选取对照组和10μmol/L白藜芦醇处理组进一步探究白藜芦醇在冷冻-解冻过程中保护SSCs的机制。Annexin V-FITC流式细胞检测结果表明,白藜芦醇组中SSCs的凋亡比例显着低于对照组（P<0.05）。白藜芦醇可极显着抑制促凋亡蛋白Bax的表达并促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（P<0.01）;抑制细胞色素C从线粒体释放至细胞质,从而减少caspase 3和caspase 9的表达（P<0.05）。此外,白藜芦醇可激活细胞AMPK磷酸化,且此种作用可被AMPK抑制剂Compound C部分抵消。透射电镜对细胞超微结构的观察结果显示,冷冻保存液中白藜芦醇的添加显着降低了冷冻-解冻后SSCs的线粒体肿胀空泡化、膜起泡以及核变的比例（P<0.05）。以上研究结果表明,冷冻保存液中添加白藜芦醇能够有效提高冷冻-解冻后奶山羊SSCs的质量,且其最适浓度为10μmol/L。白藜芦醇通过提高细胞抗氧化能力,抑制线粒体途径凋亡,并且激活生物能量代谢调节关键因子AMPK磷酸化,从而在冷冻-解冻过程中减少损伤,发挥保护SSCs的作用。
李讨讨[4]（2021）在《基于转录组学的藏绵羊睾丸功能基因鉴定及其表达调控》文中认为绵羊睾丸发育和精子发生直接决定着公羊的繁殖力。藏绵羊作为我国青藏高原及其毗邻地区最重要的家畜品种之一,具有繁殖力低、性成熟晚等生殖特点。因此,研究其睾丸发育和精子发生的调控机理对绵羊生殖生物学研究具有重要意义。然而目前在绵羊（尤其藏绵羊）上有关睾丸功能维持的分子生物学认识仍然非常欠缺。本研究以3月龄（性成熟前）、1岁龄（性成熟后）、3岁龄（成年）藏绵羊睾丸组织作为研究材料,进行如下研究:1)借助RNA-seq技术及生物信息学分析对3个发育阶段睾丸组织中的m RNA、circ RNA和mi RNA表达谱进行分析,并进行差异表达分析和功能富集分析;2)根据“ce RNA假说”及circ RNAs、mi RNAs和m RNAs的表达变化趋势,构建ce RNA调控网络;3)基于3月龄和1岁龄组的睾丸转录组数据,对潜在的免疫稳态维持相关候选基因进行鉴定,并对这些基因所富集的mi RNA-m RNA模块及circ RNA-mi RNA-m RNA调控网络进行分析;4)原代分离培养绵羊睾丸支持细胞,以研究精子发生关键基因及相关的circ RNA-mi RNA-m RNA轴在绵羊睾丸细胞中的生物学作用。研究的主要结果如下:1.在3月龄vs 1岁龄、1岁龄vs 3岁龄、3月龄vs 3岁龄睾丸中,分别鉴定到26084（10247个上调,15837个下调）、57个（27个上调,30个下调）、25535个（10017个上调,15518个下调）差异表达m RNAs;分别鉴定到3982（2079个上调,1903个下调）、414（201个上调,213个下调）和4060个（2107个上调,1953个下调）差异表达circ RNAs;分别鉴定到715个（561个上调,154个下调）、57个（46个上调,11个下调）、790个（628个上调,162个下调）差异表达mi RNAs。随机选择的10个m RNAs、10个circ RNAs和12个mi RNAs的RT-q PCR验证结果表明RNA-seq获得的转录组数据是可靠的。差异表达m RNAs、差异表达circ RNAs来源基因、及二者共享基因的GO和KEGG分析结果均显示,它们主要参与生长、发育、生殖、免疫、代谢等相关生物学过程;显着富集在m TOR、TGFβ等生殖相关,以及紧密连接、减数分裂等细胞连接或细胞发育密切相关的信号通路上。2.基于circ RNAs、mi RNAs和m RNAs共表达ce RNA网络分析发现,差异表达circ RNAs的靶基因主要涉及细胞发育、生殖等生物学过程以及粘附连接、局部粘附、ECM-受体相互作用、肌动蛋白细胞骨架调节、MAPK、Wnt、TGFβ等信号通路。在此基础上,构建了睾丸功能（如精子发生、生殖细胞发育、细胞周期、减数分裂、血-睾屏障等）密切相关基因的ce RNA调控网络;通过RT-q PCR、Western blot、免疫荧光染色和双荧光素酶分析发现,BOLL基因主要表达于减数分裂后的圆形和长形精子细胞中,并且其表达受到circ＿029155/mi R-760-3p信号轴的调控。3.基于性成熟前、后藏绵羊睾丸的转录组测序和功能富集数据,共筛选出1118个免疫相关差异表达m RNAs（包括873个下调和245个上调的m RNAs）。GO和KEGG富集分析结果显示,它们主要富集在免疫系统发育、细胞粘附/连接、刺激反应调节、免疫反应调节等生物学过程,以及细胞粘附、T细胞和B细胞受体信号通路、白细胞跨内皮迁移、趋化因子、NF-κB、PI3K/Akt等信号通路上。在此基础上,构建了与睾丸免疫稳态维持相关候选基因的潜在mi RNA-m RNA网络和circ RNA-m RNA-m RNA网络。此外,双荧光素酶分析证实了ITGB1/circ＿013761/circ＿014236与mi R-29b以及ITGB1/circ＿001254与mi R-1185-3p间存在靶向关系。4.由构建的ce RNA网络可知,IGF1基因受到oar-mi R-29b和circ＿026259的潜在调控。RT-PCR、RT-q PCR、荧光原位杂交和免疫荧光分析显示,它们在发育的藏绵羊睾丸中具有相似的RNA分布模式:广泛分布于生殖细胞、间质细胞和支持细胞中。随后,采用两步酶消化法成功分离获得了绵羊睾丸支持细胞。RNase R酶消化法、PCR和Sanger测序证实了circ＿026259的环化特征,即由绵羊KLHL5基因第2-5个外显子产生,且由第2和第5个外显子反向剪接形成环化结构（将circ＿026259命名为circ KLHL5）。通过一系列双荧光素酶、过表达、敲低、CCK-8、Ed U染色、细胞流式分析发现,circ KLHL5可通过靶向oar-mi R-29b促进支持细胞中IGF1基因的表达,进而诱导支持细胞的增殖并抑制其凋亡。综上所述,转录组测序结合相关分子生物学方法揭示了许多差异表达基因在发育的藏绵羊以年龄依赖的表达模式参与生殖细胞发育、减数分裂、血-睾屏障、免疫稳态等生物学过程,并且这些基因中的大多数表达可能受到mi RNAs和/或circ RNAs的调控,以响应不断发育的睾丸内环境及持续的精子发生过程。同时,鉴定到一个由绵羊KLHL5基因产生的新的环状RNA circ KLHL5,并证实其通过靶向oar-mi R-29b调节IGF1基因的表达和睾丸支持细胞的发育。这些发现填补了有关绵羊睾丸组织circ RNAs认识的空白,丰富了现有的绵羊转录组信息,并为进一步理解绵羊及其他高原哺乳动物睾丸发育和精子发生机制提供了理论依据。
张飞[5]（2021）在《长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析》文中提出睾丸发育、精子生成过程涉及生殖细胞、间质细胞和支持细胞在内的多种细胞协同作用,该过程受到极其复杂和严格的分子时空调控,人们对其理解仍十分有限。环状RNA作为一类新的长链非编码RNA存在于人和牛等动物的睾丸及精清中,可能参与调控睾丸发育及精子发生过程。然而,公猪睾丸组织发育成熟过程中环状RNA的表达谱及其潜在生物学功能尚不清楚。N6-甲基腺苷（m6A）修饰是存在于RNA内部最常见的一类修饰,参与调控细胞分化、个体发育等多种生理病理进程,但关于m6A与睾丸发育、精子发生之间的关系目前仍知之甚少。因此,本文选取性成熟前后两个不同发育阶段的长白公猪睾丸组织,利用高通量测序技术和生物信息学等手段,揭示不同阶段睾丸中的环状RNA和m6A表达特征并比较分析其表达差异,预测和解析差异表达的环状RNA、m6A修饰在睾丸发育和精子发生事件中的潜在生物学功能,为增进了解环状RNA、m6A修饰参与公猪精子发生、睾丸发育调控等提供新的线索。本论文得到研究结果如下:本研究对未成年（30日龄,D30）和性成熟（210日龄,D210）长白公猪睾丸进行组织形态学观察。H&E染色结果显示,30日龄长白公猪睾丸曲细精管尚未发育完整,睾丸内未见明显管腔,处于性成熟前阶段;210日龄长白公猪睾丸体积显着增大,曲细精管发育完全,内含大量不同类型的生殖细胞并产生大量圆形精子及长形精子,已达到性成熟后阶段。使用去除核糖体RNA及线性RNA的总RNA-Seq来检测D30和D210长白公猪睾丸组织中环状RNA的表达谱。高通量测序显示睾丸组织中含有丰富的环状RNA,性成熟前后睾丸中分别鉴定出34521与31803个环状RNA。生物信息学分析发现这些环状RNA广泛分布于常染色体和性染色体上,长度主要位于100～10000 nt之间（58.97%）,主要来源于源头基因的外显子区域,大部分环状RNA由1-7个外显子形成（86.54%）,并且部分源头基因可以产生多个环状RNA。在公猪睾丸成熟过程中共发现来源于1526个源头基因的2326个差异表达的环状RNA,其中1003个D210公猪睾丸组织中上调,1323个下调。此外,差异表达的环状RNA源头基因GO功能分析显示这些环状RNA主要与精子发生、激素生物合成过程的正调控、生殖细胞发育、雄性减数分裂等生物过程有关。KEGG通路富集分析发现他们分别参与了干细胞多能性调节、紧密连接、粘附连接、cAMP等信号通路。因此,以上结果表明性成熟前后公猪睾丸表达大量的环状RNA,这些环状RNA呈现发育阶段特异性的动态表达模式,且主要与睾丸发育、精子发生等生物学过程密切相关。这些结果将有望为鉴定种公猪睾丸发育状态及筛选优秀种公猪提供一种潜在的分子标记物。同时为了研究睾丸发育成熟过程中m6A甲基化修饰的动态变化,本研究绘制了长白猪性成熟前后睾丸转录组范围信使RNA m6A甲基化图谱。本研究描述了m6A甲基化修饰在睾丸发育过程中的广泛分布模式,并分析了基因表达与m6A甲基化修饰的关系,同时广泛地鉴定了性成熟前后m6A甲基化修饰差异基因,这些基因可能与睾丸的生物学功能的密切相关。这些结果为确定睾丸中mRNA m6A甲基化的存在及其图谱提供了依据,并扩展了对m6A在哺乳动物器官发育和生长中作用的认识。
王霞[6]（2021）在《藏绵羊睾酮合成相关基因在睾丸和附睾中的表达特征及生物学功能》文中提出哺乳动物的睾酮合成受很多基因的共同调控,其中某些基因的表达量减少或者缺失都将影响睾酮合成的水平,睾酮缺乏会对生精过程会产生不利影响。研究发现STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1、HSD17B3和GLOD4在雄性动物睾丸中表达,与雄性动物睾酮合成过程以及睾丸功能维持密切相关,但是其在不同物种中的表达特征及发挥的生物学作用存在差异。因此,本研究利用q RT-PCR和Western Blot方法检测STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1、HSD17B3和GLOD4在3月龄（性成熟前）、1岁龄（性成熟）、3岁龄（成年）3个关键发育阶段藏绵羊睾丸和附睾组织中的表达特征,并运用免疫荧光技术对其蛋白的阳性信号分布特征进行检测。此外,采用q RT-PCR和双荧光素酶报告系统对oar-miR-190-3p和oar-miR-363-3p的表达特征与HSD17B3的靶向关系进行验证。主要研究结果如下:1.与3月龄相比,1岁龄和3岁龄藏绵羊睾丸中STAR、HSD3B1、CYP17A1和HSD17B3 mRNA的表达量显着下调（P<0.01）,而其蛋白的表达量显着上调（P<0.01）,1岁龄和3岁龄睾丸中CYP11A1和GLOD4 mRNA和蛋白的表达量均显着上调（P<0.01）。免疫荧光染色结果发现,STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1、HSD17B3和GLOD4蛋白主要分布在性成熟后（1岁龄和3岁龄）藏绵羊的睾丸间质细胞中,在整个发育阶段的生殖细胞中也有少量分布。研究结果表明,睾酮合成相关基因可能通过维持睾丸间质细胞的功能及调控藏绵羊间质细胞睾酮的分泌及来参与精子发生。2.STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1和HSD17B3 mRNA和蛋白在不同发育阶段藏绵羊附睾头、体和尾中均有表达。STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1和HSD17B3mRNA在不同发育阶段附睾（头、体和尾）中差异表达,而其蛋白的表达均显着上调（P<0.01）。免疫荧光结果显示,STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1和HSD17B3蛋白主要存在于不同发育阶段藏绵羊附睾上皮细胞中,并且随着年龄的增加信号强度逐渐增强。此外,在性成熟后（1岁龄和3岁龄）藏绵羊附睾（头、体和尾）管腔的精子中也存在中等强度的阳性信号分布。研究结果表明,STAR、CYP11A1、HSD3B1、CYP17A1和HSD17B3在不同发育阶段藏绵羊附睾中主要通过调控附睾上皮细胞的分泌和吸收功能进而参与附睾发育以及精子成熟。3.随着年龄的增加,oar-miR-190-3p和oar-miR-363-3p在睾丸中表达显着上调（P<0.01）,在不同发育阶段附睾中呈区段性差异表达。双荧光素酶报告系统检测结果发现oar-miR-190-3p和oar-miR-363-3p模拟物均明显降低了HSD17B3 3′UTR野生型的荧光素酶活性（P<0.05）。这些结果表明,oar-miR-190-3p和oar-miR-363-3p可以靶向调控绵羊HSD17B3基因的表达。
雷佩佩[7]（2021）在《基于单细胞测序解析猪精原细胞的异质性》文中研究说明在哺乳动物睾丸中,精子发生起始于精原细胞,经一系列增殖分化过程最终形成精子。精原细胞依据其分化状态又可划分为未分化精原细胞和分化精原细胞两类。对小鼠精原细胞的分化与分子标记物已经进行比较深入的研究,但是猪精原细胞的异质性尚不清楚。因此,本研究基于单细胞测序手段,解析猪精原细胞的异质性,并进一步分析研究猪精原细胞亚群的分类及其差异基因的表达,旨在筛选未分化精原细胞和分化精原细胞的表面分子标记物,并通过免疫荧光染色手段对猪精原细胞的表面分子标记物进行鉴定。主要结果如下:（1）150日龄猪睾丸细胞的单细胞测序结果分析,通过降维聚类将所有细胞分为20个细胞类群,通过不同细胞的标记基因将20个细胞群分为6个主要的细胞类型,包括管周肌样细胞、间质细胞、支持细胞、精原细胞、精母细胞及精细胞,并对这些细胞类型进行功能富集分析。接着对生殖细胞的发育轨迹进行分析并进一步将生殖细胞类群细分为未分化精原细胞、分化精原细胞、细线期/偶线期精母细胞、粗线期精母细胞、双线期精母细胞、MII期精母细胞、圆形精细胞、延长型精细胞以及成熟精子。随后对未分化精原细胞和分化精原细胞又细分为Un-diff、Diff-1、Diff-2及Diff-3四个类群,并从中筛选出CDH1和CD99为未分化精原细胞的潜在分子标记,PODXL2为分化精原细胞的潜在分子标记。（2）为了进一步验证钙粘蛋白（Cadherin-1,CDH1）是否可以作为猪未分化精原细胞的标志物,分别从RNA水平、免疫组织化学及免疫双荧光验证,发现在青春期前的睾丸组织中,CDH1+与DBA+（性原细胞的标志物）重合率高达约80%;随着睾丸发育的逐步成熟,CDH1+与UCHL1+（未分化精原细胞）重合率高达约90%。同时CDH1与PCNA和TUNEL的共定位结果揭示了,CDH1+未分化精原细胞随着睾丸发育其增殖能力也在提高,几乎没有凋亡现象。（3）CD99的免疫组化和荧光的定位结果显示:在不同日龄猪睾丸组织中CD99与UCHL1有着相似的定位和变化趋势,且CD99+和UCHL1+的重合率高达90%,揭示了CD99阳性细胞就是未分化精原细胞群体中的一类,且与UCHL1+未分化精原细胞群体具有较高的重合度。（4）PODXL2在不同日龄猪睾丸中的定位结果,发现PODXL2虽然和UCHL1（未分化精原细胞的标志物）存在共定位,但是表达PODXL2的阳性细胞中UCHL1的着色均为“弱着色”,且这种“弱着色”UCHL1+有研究表明就是c-KIT+;另外PODXL2+与c-KIT+（分化精原细胞的标志物）存在更高的重合率,且同样都是在90日龄开始表达,具有相似的发育趋势,由此证实了PODXL2为猪分化精原细胞的标志物。综上,本研究揭示了猪精原细胞的异质性,从多方面证实了CDH1和CD99为猪未分化精原细胞的分子标记物,PODXL2为分化猪精原细胞的分子标记物。为深入探究猪精原细胞分化和精子发生提供理论基础。
高源[8]（2021）在《安格斯牛睾丸组织非编码RNA鉴定及单细胞转录图谱绘制》文中提出安格斯牛是肉牛生产的主要品种之一,具有性成熟早、易产、初生重小、生长速度快、肉质好、适应力强等优点。安格斯牛作为肉质好的代表品种被大量引进用来改良地方牛品种,在优质高档牛肉的生产方面取得了显着成效。公牛是种牛群的重要组成部分,在肉牛群体遗传性能改良过程中发挥着重要作用。种公牛为肉牛的生产提供大量优质的精液,以便优良遗传性状得以稳定遗传,因此理想的繁殖性能对种公牛至关重要。睾丸是精子发生的重要器官,正常的睾丸发育是种公牛优良繁殖性能的基础,因此探究公牛睾丸发育及精子发生的遗传机理和分子调控机制,对选育高产优质种公牛具有重要意义。睾丸发育和精子生成依赖于转录、转录后水平相关基因精确的调控,而非编码RNA被证实在转录或转录后水平调控中扮演着极其重要的角色。因此,本研究选用安格斯牛为研究对象,在转录组水平进行ncRNA（lncRNA、miRNA、circRNA）的鉴定分析及功能验证,意在寻找安格斯牛性成熟过程中睾丸发育与精子生成相关的ncRNA,从而从ncRNA的角度解析牛睾丸发育的遗传基础。同时,借助单细胞转录组测序技术进行公牛睾丸发育的细胞图谱绘制和标记基因鉴定,为探索公牛精子生成、睾丸体细胞发育的分子调控及转录调节机制提供了基础数据。本研究的主要结果如下:（1）通过对安格斯牛不同发育时期的睾丸lncRNA进行测序分析,共鉴定出23,735个lncRNA;其中,540个lncRNA（P<0.05）和3,525个mRNA（P-adj<0.05）差异表达;GO和KEGG富集分析表明差异表达的lncRNA靶基因和mRNA大多富集在与精子发生相关的过程中富集;通过lncRNA-mRNA互作分析,构建了与睾丸发育相关的15个DE lncRNA和12个顺式作用靶基因的互作网络,其中lncRNA的靶基因（SPATA16、TCF21、ZPBP、PACRG、ATP8B3、COMP、ACE和OSBP2）与牛睾丸发育和性成熟有关。（2）通过对安格斯牛不同发育时期的睾丸miRNA进行测序分析,共鉴定出566个已知的miRNA,以及86个新miRNA;差异表达分析表明,性成熟期与初生期相比共有223个差异表达的miRNA（202个已知和21个新的miRNA）;相较于初生期组,性成熟期睾丸中有112个miRNA表达上调（92个已知的和20个新的miRNA）和111个表达下调的miRNA（110个已知的和20个新的miRNA）（P-adj<0.05,|log2fold-change|>1）;根据KEGG富集分析发现,差异表达的miRNA靶基因富集到与睾丸发育、精子生成相关的通路中。（3）通过对安格斯牛不同发育时期的睾丸circRNA进行测序分析,共鉴定出28,065个候选的circRNA,其中7,458个circRNA在初生期和性成熟期牛睾丸中共同存在;初生期和性成熟期牛睾丸中存在987个circRNAs差异表达（P<0.05）,以初生期为对照,性成熟期表达上调的有710个circRNAs,下调的有277个circRNAs。GO和KEGG功能富集分析发现差异circRNA的宿主基因显着富集在了36个GO项以及8条通路。（4）根据circRNA测序数据筛选出差异表达的circ SMC1B,并验证发现circ SMC1B在性成熟期高表达,且在牛雄性生殖干细胞中高表达。通过过表达circ SMC1B且利用CCK-8、Ed U、流式细胞、RT-q PCR等实验发现circ SMC1B促进牛m GSCs的增殖和凋亡;RNAhybrid软件预测及双荧光素酶报告实验证明circ SMC1B竞争性结合let-7i;通过CCK-8、Ed U、流式细胞、RT-q PCR等实验发现let-7i靶向HMGA1和NR6A1抑制牛m GSCs的增殖和凋亡;且发现circ SMC1B可竞争性结合let-7i调节靶基因HMGA1和NR6A1表达,促进m GSCs增殖凋亡。（5）利用scRNA-seq技术对性成熟前后牛睾丸细胞进行转录组测序,通过聚类分析将睾丸细胞分为12个类群,其中包括9种体细胞和3种生殖细胞;并鉴定出一些牛睾丸不同类群细胞的特异标记基因,如ARSE、CLEC12B、GAS1、KRT8、LOC101908015、HIGD1B、CCL21、ESX1、MEIOB、SPATA19等;通过聚类分析将睾丸生殖细胞分为13个类群,分别在其中鉴定了特异表达的基因,这为解释牛睾丸发育和精子生成的机制提供了理论依据。本研究通过RNA-seq和scRNA-seq对公牛睾丸组织编码基因和ncRNA表达进行综合分析,发现公牛睾丸组织中存在大量与睾丸发育和精子发生相关的差异表达ncRNA和mRNA,且鉴定出公牛睾丸组织中不同细胞类群的特异标记基因,这为丰富公牛睾丸发育和精子生成转录调节机制提供了宝贵资源,为利用分子辅助选育技术筛选优良种公牛,建立公牛良种繁育体系提供了可靠的理论指导和技术支撑。
李富远[9]（2021）在《SSEA4作为猪精原干细胞膜分子标记物鉴定》文中研究指明哺乳动物体内,精原干细胞（Spermatogonial stem cells,SSCs）是唯一一种可以将父系遗传信息传递给后代的成体干细胞。因此,SSCs在动物遗传育种与繁殖等方面有着重要的应用前景。将基因编辑技术与SSCs移植技术相结合,可以制作转基因动物,提高动物的生产性能。同时,SSCs也是阐明干细胞自我更新与分化机制的良好模型。由于睾丸内SSCs的数目稀少,需要分离和富集SSCs才能开展相关研究。在啮齿类动物和灵长类动物,已经鉴定到若干有效的SSCs分子标记物。虽然已鉴定了几个猪未分化精原细胞的分子标记物,但是,仍然缺乏富集猪SSCs的表面分子标记物。据报道,阶段特异性胚胎抗原4（stage-specific embryonic antigen 4,SSEA4）在人和非人灵长类动物的精原干细胞外膜表面表达。因此,本研究旨在探究SSEA4在猪睾丸组织中的表达与分布,鉴定SSEA4对猪精原干细胞分离与富集的有效性。主要结果如下:（1）采集7日龄、90日龄和150日龄的猪睾丸组织,制作组织切片。苏木精-伊红染色及组织免疫荧光染色结果表明所采集的猪睾丸发育正常,SSEA4阳性细胞为生精小管基底膜处的精原细胞;统计分析显示,随着日龄的增加,平均每个生精小管内VASA阳性和UCHL-1阳性细胞数目表现为递增趋势,而SSEA4阳性细胞表现为递减趋势。这表明SSEA4可能是猪精原干细胞的表面分子标记物。（2）借助组织免疫荧光双染色鉴定表达SSEA4的细胞类型。结果表明SSEA4阳性细胞与已知的未分化精原细胞分子标记物DBA、PLZF共定位;且随着日龄增加,SSEA4阳性细胞占DBA、PLZF阳性细胞的比例逐渐下降,而不与SSEA4阳性细胞共定位的DBA、PLZF阳性细胞逐渐增加。因此,SSEA4阳性细胞是未分化精原细胞的一个小亚群。（3）采用流式细胞分选法分离SSEA4阳性精原细胞并借助免疫荧光染色、Western blot对其进行鉴定。结果表明以SSEA4为膜表面标记物,利用流式细胞分选法可高效富集SSEA4阳性精原细胞,富集效率在90%以上。细胞免疫荧光染色发现,SSEA4阳性精原细胞高度富集了未分化精原细胞。（4）借助转录组测序与分析,发现SSEA4阳性细胞高表达精原干细胞的标记基因ID4、PAX7、PIWIL4、EGR4、MSL3、TCF3等,而精原细胞（SPG）主要表达GFRA1、LIN28A、UCHL-1等生精细胞祖细胞基因以及STRA8、c-KIT和SYCE3等分化精原细胞的标记基因。GO分析表明,SSEA4阳性细胞上调的基因参与细胞黏附、干细胞群体维持和胚胎器官发生等干细胞相关功能;下调的基因则主要参与生殖细胞发育、细胞代谢过程和细胞内物质转运等生物学过程。（5）借助细胞异种移植鉴定SSEA4阳性细胞的生物学功能。异种移植结果显示,SSEA4阳性细胞生成的细胞克隆数目是未分化精原细胞（SPG）的2.5倍,是SSEA4阴性细胞的21倍,表明SSEA4阳性细胞是精原干细胞。综上所述,本研究表明SSEA4是猪精原干细胞的表面分子标记物。基于SSEA4利用流式分选法能够高效分离与富集猪精原干细胞。猪既是重要的肉用家畜,也是理想的医学模式动物。本研究结果为猪精原干细胞的体外培养及研究利用提供了条件和基础,并为其它家畜精原干细胞的分离与富集提供参考。
李学亮[10]（2021）在《组蛋白甲基转移酶SETDB1对精原干细胞增殖与分化的调控作用及其机制研究》文中研究表明精子发生过程包括三个阶段,即精原干细胞的自我更新与分化、精母细胞的减数分裂和单倍体圆形精细胞的变形。这一过程受到基因表达的精密调控。条件性敲除胚胎期生殖细胞内的H3K9me2去甲基化酶基因Jmjd1a和Jmjd1b导致基因表达紊乱和精子发生受损。因此,探究组蛋白甲基化修饰对精原干细胞增殖与分化的调控作用机制,对于雄性不育的诊治具有一定的指导意义。组蛋白甲基转移酶SETDB1能够催化组蛋白H3K9甲基化,在干细胞多能性维持,神经细胞分化等过程中发挥重要作用。然而,SETDB1调控精原干细胞增殖与分化的确切机制仍不清楚。因此,本研究利用细胞免疫荧光,染色质免疫共沉淀,RNA-seq,ATAC-seq和Ch IP-seq等方法探究SETDB1对精原干细胞增殖与分化的调控作用机制。主要结果如下:（1）Ed U和细胞流式检测结果显示Setdb1-KD导致小鼠精原干细胞增殖速率降低,细胞周期阻滞在S期。细胞免疫荧光与TUNEL检测结果表明,Setdb1敲低诱导细胞DNA断裂和凋亡水平升高。这表明Setdb1-KD阻碍了精原干细胞增殖,导致细胞凋亡。（2）Setdb1-KD导致精原干细胞NADPH氧化酶4（NOX4）及其配体P22PHOX表达量上升,活性氧水平升高。挽救试验发现,相对于Setdb1敲低组,Setdb1和Nox4同时敲低组的细胞内活性氧含量较低,细胞凋亡增加和增殖速率减慢的表型得到部分挽救。此外,使用活性氧清除剂褪黑色素直接清除细胞内的活性氧,也可以在一定程度上抑制Setdb1-KD诱导的细胞凋亡。这表明NOX4上调介导的活性氧水平升高参与到Setdb1敲低诱导的细胞凋亡和增殖速率减慢。（3）Setdb1-KD导致细胞内p-P38和p-JNK水平升高、FOXO4活化,这表明Setdb1-KD激活了细胞内活性氧下游p38/JNK-FOXO4信号通路。（4）SETDB1-Ch IP-qPCR和H3K9me3-Ch IP-qPCR结果显示,Nox4基因启动子区域几乎没有SETDB1和H3K9me3的富集,说明SETDB1对Nox4的调控不是直接的,有可能是由于Setdb1-KD导致Nox4基因临近处的转座子激活,从而使得NOX4表达量升高。（5）在小鼠精原细胞内,Ythdf2-KO导致SETDB1与H3K9me3修饰水平降低。蛋白质免疫共沉淀结果表明,SETDB1与γH2AX之间相互作用。当发生DNA损伤时,Setdb1-sh RNA介导的Setdb1-KD导致精原细胞的克隆形成能力降低,细胞凋亡增加,γH2AX阳性细胞数增加。同时,当发生DNA损伤时,Ythdf2-KO的精原细胞出现了与Setdb1-KD类似的表型。而且体内试验结果发现,当用DNA损伤药物etoposide诱导发生DNA损伤时,Ythdf2 c KO小鼠(Stra8-Cre,Ythdf2loxp/loxp)睾丸组织平均每个曲细精管内的γH2AX阳性细胞数和c PARP阳性细胞数均高于对照组。这表明在小鼠精原细胞,YTHDF2能够调控Setdb1的表达,且它们均参与DNA损伤应答反应。（6）挽救试验发现,当发生DNA损伤时,在Ythdf2-KO的精原细胞过表达Setdb1,部分挽救了Ythdf2-KO介导的细胞克隆形成能力降低的表型。此外,RNA-seq分析表明,在DNA损伤条件下,SETDB1过表达使得Ythdf2-KO组中部分促凋亡基因转录水平降低。这表明Ythdf2-KO诱导的精原细胞DNA损伤敏感性增加部分是由于SETDB1下调导致的。（7）借助流式细胞术和STA-PUT分选猪精原干细胞和分化精原细胞,结合ATAC-seq,Ch IP-seq和RNA-seq解析猪精原干细胞分化过程中SETDB1,H3K9me3修饰以及染色质可及性变化。RNA-seq分析结果表明,精原干细胞分化过程中有684个基因表达上调,702个基因表达下调。而且,在分化过程中,促分化相关基因c-Kit启动子处的SETDB1和H3K9me3修饰富集水平降低,染色质可及性升高。因此,推测SETDB1可能通过H3K9me3修饰调控促分化相关基因表达,从而调控精原干细胞分化。综上所述,本研究发现SETDB1通过调控NADPH氧化酶NOX4的表达和细胞内的活性氧水平,调控小鼠精原干细胞的存活;Ythdf2-KO导致SETDB1下调,从而诱导DNA损伤敏感性增加;SETDB1通过H3K9me3修饰调控猪精原干细胞分化过程中染色质可及性,引起分化相关基因表达变化,从而调控精原干细胞的分化。本研究为组蛋白甲基化修饰对雄性精子发生的调控机制提供理论参考。
二、睾丸生殖细胞研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、睾丸生殖细胞研究进展（论文提纲范文）
（1）奶山羊精子发生关键分子挖掘与性控精液研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 哺乳动物精子发生 |
| 1.1.1 精原干细胞自我更新与分化 |
| 1.1.2 精母细胞与减数分裂 |
| 1.1.3 圆形精子细胞变形及调控 |
| 1.1.4 睾丸发育与精子发生 |
| 1.2 精子发生相关lncRNA及其功能 |
| 1.2.1 LncRNA的形成和作用机制 |
| 1.2.2 LncRNA预测和分析数据库 |
| 1.2.3 LncRNA在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.3 单细胞转录组测序技术在精子发生中的应用 |
| 1.3.1 scRNA-seq技术发展概述 |
| 1.3.2 scRNA-seq技术在精子发生的研究进展 |
| 1.3.3 scRNA-seq技术在睾丸体细胞的研究进展 |
| 1.4 性控精液研究及应用概述 |
| 1.4.1 流式细胞仪分离X、Y精子研究进展 |
| 1.4.2 流式分选技术在牛性控精液的应用 |
| 1.4.3 流式分选技术在山羊性控精液的应用 |
| 1.4.4 基于基因/蛋白表达差异分离X、Y精子研究进展 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 奶山羊雄性生殖细胞与支持细胞发育规律研究 |
| 引言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要设备及试剂 |
| 2.1.3 睾丸石蜡包埋及组织切片 |
| 2.1.4 睾丸切片HE染色 |
| 2.1.5 免疫组织化学染色 |
| 2.1.6 数据分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 奶山羊睾丸曲细精管发育规律 |
| 2.2.2 奶山羊未分化精原细胞发育规律 |
| 2.2.3 奶山羊未分化精原细胞的分化进程 |
| 2.2.4 奶山羊未分化精原细胞增殖规律 |
| 2.2.5 奶山羊曲细精管精母细胞发育规律 |
| 2.2.6 奶山羊曲细精管精子发育规律 |
| 2.2.7 奶山羊曲细精管支持细胞发育规律 |
| 2.2.8 奶山羊曲细精管支持细胞的增殖状态 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 奶山羊睾丸曲细精管组织发育规律分析 |
| 2.3.2 奶山羊曲细精管性原细胞的迁移进程 |
| 2.3.3 奶山羊曲细精管精原细胞的发育规律 |
| 2.3.4 奶山羊曲细精管支持细胞的发育规律 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 奶山羊精子发生关键lncRNA和 mRNA挖掘 |
| 引言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要设备及试剂 |
| 3.1.3 奶山羊睾丸曲细精管分离 |
| 3.1.4 奶山羊睾丸曲细精管组织RNA提取 |
| 3.1.5 RNA质检与建库 |
| 3.1.6 数据分析 |
| 3.1.7 qPCR验证 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 奶山羊性成熟前和性成熟后睾丸组织学差异 |
| 3.2.2 RNA-seq及数据质控 |
| 3.2.3 奶山羊基因组特征比对分析 |
| 3.2.4 奶山羊曲细精管长链非编码RNA的鉴定 |
| 3.2.5 奶山羊曲细精管长链非编码RNA和 mRNA特征分析 |
| 3.2.6 奶山羊性成熟前后长链非编码RNA和 mRNA差异表达分析 |
| 3.2.7 奶山羊精子发生相关mRNA的 GO和 KEGG分析 |
| 3.2.8 奶山羊精子发生相关lncRNA的 GO与 KEGG分析 |
| 3.2.9 奶山羊精子发生关键mRNA挖掘 |
| 3.2.10 奶山羊精子发生相关lncRNA-mRNA共表达分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 曲细精管组织样本为RNA-seq数据分析奠定良好基础 |
| 3.3.2 奶山羊曲细精管lncRNA特征分析 |
| 3.3.3 奶山羊精子发生关键分子挖掘 |
| 3.3.4 奶山羊精子发生关键重要信号通路挖掘 |
| 3.3.5 奶山羊精子发生关键lncRNA-mRNA挖掘 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 奶山羊精子发生单细胞转录图谱构建及关键分子挖掘 |
| 引言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 主要设备及试剂 |
| 4.1.3 主要数据库及数据分析软件 |
| 4.1.4 奶山羊睾丸曲细精管单细胞悬液制备 |
| 4.1.5 单细胞RNA-seq文库的制备和测序 |
| 4.1.6 单细胞RNA-seq数据分析 |
| 4.1.7 奶山羊雄性生殖细胞分化谱系构建 |
| 4.1.8 差异表达基因及功能富集分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 奶山羊曲细精管单细胞数据质控 |
| 4.2.2 奶山羊曲细精管主要细胞类型鉴定 |
| 4.2.3 奶山羊精子发生过程中主要细胞类型的分子特征 |
| 4.2.4 奶山羊精子发生与睾丸体细胞关键基因表达分析 |
| 4.2.5 奶山羊生殖细胞分化谱系构建及关键基因表达模式 |
| 4.2.6 奶山羊精子发生过程中涉及的细胞周期变化 |
| 4.2.7 奶山羊精原细胞关键基因挖掘与功能富集分析 |
| 4.2.8 scRNA-seq与RNA-seq精子发生关键mRNA比较分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 奶山羊曲细精管中主要细胞类型鉴定 |
| 4.3.2 奶山羊精子发生及睾丸体细胞关键基因挖掘 |
| 4.3.3 雄性生殖细胞与睾丸体细胞相互作用的关键分子特征 |
| 4.3.4 奶山羊雄性生殖细胞分化轨迹及精原细胞差异基因功能富集 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 奶山羊性染色体关键分子挖掘与性控精液研究 |
| 引言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 主要设备及试剂 |
| 5.1.3 奶山羊性染色体编码基因鉴定 |
| 5.1.4 免疫组织化学染色 |
| 5.1.5 奶山羊精液采集 |
| 5.1.6 精液处理及精子浮游分选 |
| 5.1.7 奶山羊精子运动特征检测 |
| 5.1.8 奶山羊精子顶体完整率检测 |
| 5.1.9 奶山羊精子质膜完整率检测 |
| 5.1.10 奶山羊精子线粒体活性检测 |
| 5.1.11 奶山羊精子ATP水平检测 |
| 5.1.12 奶山羊精卵体外受精试验 |
| 5.1.13 奶山羊胚胎性别鉴定 |
| 5.1.14 Western Blotting检测奶山羊精子蛋白的表达变化 |
| 5.1.15 数据分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 奶山羊性染色体编码基因注释与编码受体基因鉴定 |
| 5.2.2 TLR7和TLR8在奶山羊睾丸、附睾和精子中的表达及定位 |
| 5.2.3 TLR7/8激活剂对奶山羊精子运动性能的影响 |
| 5.2.4 TLR7/8激活剂抑制X精子的运动能力 |
| 5.2.5 TLR7/8激活剂降低X精子ATP水平和线粒体活性 |
| 5.2.6 体外受精所得胚胎的性别鉴定 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 奶山羊性染色体关键基因挖掘 |
| 5.3.2 TLR7和TLR8在奶山羊X精子的尾部特异表达 |
| 5.3.3 TLR7/8信号通路激活抑制X精子的运动性能 |
| 5.3.4 TLR7/8信号通过GSK3α/β-己糖激酶途径影响X精子运动能力 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与创新点 |
| 6.1 研究结论 |
| 6.2 研究创新点 |
| 6.3 下一步研究计划 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 隐睾症及其激素调节机制的研究进展 |
| 1.1 隐睾症 |
| 1.2 隐睾症流行病学研究 |
| 1.3 隐睾症激素调节机制的研究 |
| 2 隐睾影响哺乳动物精子发生的研究进展 |
| 2.1 哺乳动物精子发生 |
| 2.2 隐睾影响精子发生的研究 |
| 3 隐睾睾丸形态计量学研究进展 |
| 3.1 隐睾睾丸细胞计数的研究 |
| 3.2 隐睾睾丸生殖细胞和支持细胞的研究 |
| 4 隐睾睾丸细胞增殖研究进展 |
| 4.1 增殖相关蛋白的研究 |
| 4.2 睾丸细胞增殖的研究 |
| 4.3 隐睾影响睾丸细胞增殖的研究 |
| 5 隐睾睾丸细胞凋亡的研究进展 |
| 5.1 凋亡的概念及分子机制的研究 |
| 5.2 凋亡调节哺乳动物精子发生的研究 |
| 5.3 隐睾影响精子发生的凋亡信号研究 |
| 6 隐睾睾丸自噬的研究进展 |
| 6.1 自噬的概念及作用机制的研究 |
| 6.2 自噬调节精子发生的研究 |
| 6.3 隐睾睾丸自噬的分子机制研究 |
| 7 隐睾睾丸支持细胞间血睾屏障研究进展 |
| 7.1 血睾屏障紧密连接分子组成的研究 |
| 7.2 隐睾影响血睾屏障紧密连接分子的研究 |
| 8 转录组测序技术在隐睾睾丸的研究进展 |
| 8.1 转录组与转录组测序技术 |
| 8.2 转录组测序技术在睾丸基因表达差异的研究 |
| 8.3 转录组测序技术在隐睾睾丸基因表达差异的研究 |
| 9 蛋白质组学技术在隐睾睾丸的研究进展 |
| 9.1 蛋白质组学与蛋白质组学技术 |
| 9.2 蛋白质组学技术在睾丸蛋白表达差异的研究 |
| 9.3 蛋白质组学技术在隐睾睾丸蛋白表达差异的研究 |
| 10 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 自发单侧隐睾公猪睾丸支持细胞和生殖细胞数量的变化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 制作石蜡切片 |
| 2.2 HE染色 |
| 2.3 睾丸的形态计量学 |
| 2.4 睾丸细胞计数 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 猪睾丸组织形态学变化 |
| 3.2 猪睾丸组织形态计量学变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 自发单侧隐睾对公猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达与定位的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 TUNEL法检测细胞凋亡 |
| 2.2 总RNA提取和qRT-PCR |
| 2.2.1 总RNA提取 |
| 2.2.2 cDNA合成 |
| 2.2.3 引物设计 |
| 2.2.4 qRT-PCR |
| 2.3 总蛋白提取和Western Blot |
| 2.3.1 总蛋白提取 |
| 2.3.2 Western Blot |
| 2.4 免疫荧光化学 |
| 2.5 免疫组织化学 |
| 2.6 数据统计与分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 隐睾对生殖细胞凋亡的影响 |
| 3.2 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关基因mRNA表达水平的影响 |
| 3.3 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白表达量的影响 |
| 3.4 隐睾对猪睾丸增殖和凋亡相关蛋白定位的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 隐睾对猪睾丸生殖细胞和支持细胞增殖的影响 |
| 4.2 隐睾对猪睾丸生殖细胞和支持细胞凋亡的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 自发单侧隐睾对公猪睾丸自噬相关蛋白表达与定位的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 总RNA提取和qRT-PCR |
| 2.2 总蛋白提取和Western Blot |
| 2.3 免疫组织化学 |
| 2.4 数据统计与分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 隐睾对猪睾丸自噬相关基因LC3、p62和Beclin1 mRNA表达水平的影响 |
| 3.2 隐睾对猪睾丸自噬相关蛋白LC3、p62和Beclin1表达水平的影响 |
| 3.3 隐睾对猪睾丸自噬蛋白LC3定位的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 自发单侧隐睾对公猪睾丸血睾屏障紧密连接分子表达与定位的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 总RNA提取和qRT-PCR |
| 2.2 总蛋白提取和Western Blot |
| 2.3 免疫组织化学 |
| 2.4 数据统计与分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关基因Claudin-11、Occludin和ZO-1mRNA表达水平的影响 |
| 3.2 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11、Occludin和ZO-1表达水平的影响 |
| 3.3 隐睾对猪睾丸支持细胞标记蛋白GATA-4 定位的影响 |
| 3.4 隐睾对猪睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11、Occludin和ZO-1定位的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第六章 单侧隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠隐睾模型的建立 |
| 2.2 免疫组织化学 |
| 2.3 血睾屏障通透性检测 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 隐睾对大鼠睾丸血睾屏障紧密连接相关蛋白Claudin-11和ZO-1定位的影响 |
| 3.2 隐睾对大鼠睾丸血睾屏障通透性的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第七章 转录组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸基因表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 断奶前仔猪、隐睾和对侧阴囊睾丸的转录组学分析 |
| 3.2 差异基因GO分析 |
| 3.3 差异基因KEGG分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 隐睾对精原细胞分化的影响 |
| 4.2 隐睾对生殖细胞减数分裂的影响 |
| 4.3 隐睾对细胞间连接的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第八章 蛋白组学分析自发单侧隐睾对公猪睾丸蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和样品采集 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 蛋白的鉴定 |
| 3.2 蛋白定量和差异蛋白筛选 |
| 3.3 差异表达蛋白GO分析 |
| 3.4 差异表达蛋白KEGG分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 隐睾对睾酮产生的影响 |
| 4.2 隐睾对细胞周期的影响 |
| 4.3 隐睾对细胞连结的影响 |
| 4.4 隐睾对代谢的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| Abstract |
| 英文缩写对照表 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）白藜芦醇对奶山羊精原干细胞冷冻保存效果的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 精原干细胞概述 |
| 1.1.1 精原干细胞与精子发生 |
| 1.1.2 精原干细胞的分离与纯化 |
| 1.1.3 精原干细胞的标记物 |
| 1.1.4 精原干细胞微环境 |
| 1.1.5 精原干细胞的体外培养 |
| 1.2 精原干细胞的冷冻保存 |
| 1.2.1 冷冻保存原理 |
| 1.2.2 冷冻及解冻方法 |
| 1.2.3 冷冻保护剂 |
| 1.2.4 冷冻保存与氧化应激 |
| 1.2.5 冷冻保存与细胞凋亡 |
| 1.2.6 冷冻保存与细胞自噬 |
| 1.3 白藜芦醇的研究进展 |
| 1.3.1 白藜芦醇的主要信号通路 |
| 1.3.2 白藜芦醇的抗氧化作用 |
| 1.3.3 白藜芦醇的抗凋亡作用 |
| 1.3.4 白藜芦醇与细胞自噬 |
| 1.3.5 白藜芦醇与AMPK |
| 1.3.6 白藜芦醇对细胞冷冻保存的研究 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 试验研究 |
| 第二章 奶山羊精原干细胞的分离与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.2.3 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 奶山羊睾丸的HE染色 |
| 2.3.2 奶山羊睾丸的PGP9.5 免疫组织化学染色 |
| 2.3.3 不同日龄奶山羊睾丸中PGP9.5和THY1 蛋白的表达 |
| 2.3.4 奶山羊SSCs的分离与纯化 |
| 2.3.5 SSCs的免疫荧光染色鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 白藜芦醇对冷冻保存奶山羊精原干细胞活力及抗氧化能力的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.2.3 数据分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 白藜芦醇对冷冻保存SSCs活性的影响 |
| 3.3.2 白藜芦醇对冷冻保存SSCs活率的影响 |
| 3.3.3 白藜芦醇对冷冻保存SSCs T-AOC的影响 |
| 3.3.4 白藜芦醇对冷冻保存SSCs内 ROS水平的影响 |
| 3.3.5 白藜芦醇对冷冻保存SSCs MDA含量的影响 |
| 3.3.6 白藜芦醇对冷冻保存SSCs线粒体膜电位的影响 |
| 3.3.7 白藜芦醇对冷冻保存SSCs抗氧化酶活性的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 白藜芦醇保护冷冻保存奶山羊精原干细胞机制的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验方法 |
| 4.2.3 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 流式细胞术检测SSCs凋亡 |
| 4.3.2 SSCs凋亡相关蛋白的表达 |
| 4.3.3 SSCs自噬相关蛋白的表达 |
| 4.3.4 SSCs的 AMPK磷酸化水平 |
| 4.3.5 SSCs的超微结构观察 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于转录组学的藏绵羊睾丸功能基因鉴定及其表达调控（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| Summary |
| 第一章 文献综述 |
| 1 睾丸的生物学功能概述 |
| 1.1 精子发生 |
| 1.2 睾丸支持细胞的生物学功能 |
| 1.3 免疫豁免特性 |
| 1.3.1 血-睾屏障 |
| 1.3.2 免疫抑制 |
| 2 非编码RNAs及其在雄性动物生殖系统中的研究进展 |
| 2.1 miRNAs及其在哺乳动物睾丸中的研究进展 |
| 2.2 CircRNAs及其在雄性动物生殖系统中的研究进展 |
| 3 转录组测序技术在哺乳动物生殖系统中的应用研究进展 |
| 4 研究目的及意义 |
| 第二章 不同发育期藏绵羊睾丸circRNA/miRNA/mRNA表达谱特征分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及样品收集 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.2.1 试验仪器 |
| 1.2.2 试验试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 组织形态学分析 |
| 1.3.2 总RNA提取及质检 |
| 1.3.3 cDNA文库和小RNA文库的构建及测序 |
| 1.3.4 数据质控及mRNA、circRNA、miRNA的鉴定 |
| 1.3.5 差异表达分析 |
| 1.3.6 功能富集分析 |
| 1.3.7 RT-qPCR验证 |
| 1.3.8 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同发育阶段藏绵羊睾丸组织形态学特征比较分析 |
| 2.2 mRNA、circRNA和miRNA测序数据概述 |
| 2.3 差异表达分析 |
| 2.3.1 差异表达mRNA分析 |
| 2.3.2 CircRNA表征及差异表达分析 |
| 2.3.3 差异表达miRNA分析 |
| 2.4 测序结果验证 |
| 2.4.1 mRNA测序结果验证 |
| 2.4.2 CircRNA测序结果验证 |
| 2.4.3 miRNA测序结果验证 |
| 2.5 功能注释与富集分析 |
| 2.5.1 差异表达mRNAs功能注释与富集分析 |
| 2.5.2 差异circRNAs来源基因功能注释与富集分析 |
| 2.5.3 差异circRNAs来源基因与差异mRNAs共享基因的功能富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 CircRNA-miRNA-mRNA整合分析及睾丸功能维持相关基因的ceRNA调控网络鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及样品 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.2.1 主要试验仪器 |
| 1.2.2 试验试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 CircRNA-miRNA-mRNA关联性分析 |
| 1.3.2 功能注释与富集分析 |
| 1.3.3 荧光素酶报告基因载体构建及鉴定 |
| 1.3.4 细胞转染及双荧光素酶活性检测 |
| 1.3.5 RT-qPCR检测 |
| 1.3.6 Western blot分析 |
| 1.3.7 组织免疫荧光染色(间接法) |
| 1.3.8 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 CircRNA/miRNA/mRNA关联性分析 |
| 2.2 ceRNA网络中mRNAs的功能富集分析 |
| 2.3 CircRNA-miRNA-mRNA网络构建 |
| 2.4 Circ_015256/circ_029155-miR-760-3p-BOLL靶向关系验证 |
| 2.5 Circ_029155/miR-760-3p/BOLL在睾丸中的表达特征 |
| 2.6 BOLL蛋白在绵羊睾丸中的表达与分布特征 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 睾丸免疫特权维持相关基因的鉴定及其ceRNA调控网络研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及样品 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.2.1 主要试验仪器 |
| 1.2.2 试验试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 免疫相关差异表达基因鉴定与筛选 |
| 1.3.2 免疫相关miRNA-mRNA对及ceRNA共表达网络构建 |
| 1.3.3 RT-qPCR分析 |
| 1.3.4 Western blot分析 |
| 1.3.5 免疫荧光染色 |
| 1.3.6 双荧光素酶报告试验 |
| 1.3.7 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 性成熟前、后睾丸差异基因功能分类 |
| 2.2 免疫相关基因鉴定及表达特征分析 |
| 2.3 免疫相关差异基因的RT-qPCR验证 |
| 2.4 免疫相关基因编码蛋白的表达与定位 |
| 2.5 免疫相关基因功能注释分析 |
| 2.6 免疫相关基因的miRNA-mRNA调控网络分析 |
| 2.7 免疫相关差异miRNAs的RT-qPCR验证 |
| 2.8 免疫相关基因的circRNA-miRNA-mRNA互作网络分析 |
| 2.9 免疫相关差异表达circRNAs的RT-qPCR验证 |
| 2.10 靶向关系验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 CircKLHL5靶向miR-29b/IGF1信号轴对绵羊睾丸支持细胞发育的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及样品采集 |
| 1.2 试验仪器与试剂 |
| 1.2.1 试验仪器 |
| 1.2.2 试验试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 藏绵羊睾丸支持细胞的体外分离与纯化 |
| 1.3.2 支持细胞纯度鉴定 |
| 1.3.3 载体构建、细胞培养与转染 |
| 1.3.4 支持细胞核质分离 |
| 1.3.5 CircHLHL5成环鉴定 |
| 1.3.6 CCK-8分析 |
| 1.3.7 EdU染色 |
| 1.3.8 RT-qPCR |
| 1.3.9 Western blot |
| 1.3.10 细胞免疫荧光染色(间接法) |
| 1.3.11 酪胺信号放大-荧光原位杂交(TSA-FISH) |
| 1.3.12 流式检测细胞凋亡 |
| 1.3.13 双荧光素报告基因检测 |
| 1.3.14 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Circ_026259/miR-29b/IGF1轴的组织表达特征 |
| 2.2 绵羊睾丸支持细胞形态及免疫荧光鉴定 |
| 2.3 睾丸支持细胞中circKLHL5的鉴定 |
| 2.4 CircKLHL5转染效率检测 |
| 2.5 CircKLHL5可促进绵羊睾丸支持细胞增殖并抑制其凋亡 |
| 2.6 CircKLHL5与miR-29b靶向关系验证 |
| 2.7 Oar-miR-29b对睾丸支持细胞增殖和凋亡的影响 |
| 2.8 Oar-miR-29b与IGF1基因间靶向关系验证 |
| 2.9 IGF1转染效率检测 |
| 2.10 IGF1基因对支持细胞增殖和凋亡的影响 |
| 2.11 Oar-miR-29b可逆转circKLHL5对支持细胞表型的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（5）长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析（论文提纲范文）
| 本项研究受下列基金资助 |
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩写与符号清单 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪睾丸发育过程及其表观遗传调控 |
| 1.1.1 公猪的性成熟 |
| 1.1.2 猪睾丸发育过程 |
| 1.1.3 间质细胞在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.1.4 睾丸发育与精子发生的表观遗传调控 |
| 1.2 环状RNA在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.2.1 环状RNA的生物起源、特性及功能 |
| 1.2.2 环状RNA的数据发掘、分析及研究方法 |
| 1.2.3 环状RNA在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.2.4 结论和展望 |
| 1.3 m6A修饰在睾丸发育与精子发生中的作用 |
| 1.3.1 m6A修饰概述 |
| 1.3.2 m6A修饰的检测 |
| 1.3.3 m6A修饰的生物学功能 |
| 1.3.4 哺乳动物精子发生过程中m6A修饰的动态调节 |
| 1.3.5 结论与展望 |
| 第二章 性成熟前后长白种公猪睾丸组织学观察与分析 |
| 引言 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 睾丸大小 |
| 2.2.2 性成熟前后长白种公猪睾丸组织学特征 |
| 2.2.3 睾丸组织显微观察结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 石蜡切片及H&E染色 |
| 2.3.2 性成熟前后长白种公猪睾丸发育情况 |
| 2.3.3 性成熟前后长白种公猪睾丸组织结构观察 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 性成熟前后公猪睾丸文库构建及环状RNA的鉴定与基本特征 |
| 引言 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 睾丸组织样本RNA提取及质检结果 |
| 3.2.2 RNA文库构建及高通量测序数据质量分析 |
| 3.2.3 环状RNA的鉴定 |
| 3.2.4 性成熟前后长白种公猪睾丸组织中环状RNA的基本特征 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 性成熟前后长白种公猪睾丸环状RNA的差异表达及生物信息学分析 |
| 引言 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 性成熟前后公猪睾丸组织中显着差异表达环状RNA的鉴定与分析 |
| 4.2.2 性成熟前后公猪睾丸组织环状RNA测序结果的试验验证 |
| 4.2.3 差异环状RNA的GO分析 |
| 4.2.4 差异环状RNA的 KEGG信号通路富集分析 |
| 4.2.5 环状RNA靶miRNA预测 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 性成熟前后长白种公猪睾丸转录组信使RNA甲基化图谱的建立 |
| 引言 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 数据质控与序列统计 |
| 5.2.2 参考基因组比对 |
| 5.2.3 全基因组m6A Peak扫描分析 |
| 5.2.4 差异Peak分析 |
| 5.2.5 m6A Motif分析 |
| 5.2.6 RNA-seq基因/转录本差异结果分析 |
| 5.2.7 RNA-seq中差异基因GO富集分析 |
| 5.2.8 RNA-seq中差异基因KEGG富集分析 |
| 5.2.9 MeRIP-seq中差异m6A Peak GO富集分析 |
| 5.2.10 MeRIP-seq中差异m6A Peak KEGG富集分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（6）藏绵羊睾酮合成相关基因在睾丸和附睾中的表达特征及生物学功能（论文提纲范文）
| 缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Summary |
| 第一章 绪论 |
| 1 睾丸与附睾 |
| 2 间质细胞发育及睾酮生成调控机制 |
| 3 睾酮合成相关基因研究进展 |
| 3.1 STAR基因 |
| 3.2 CYP11A1和CYP17A1 基因 |
| 3.2.1 CYP11A1 基因 |
| 3.2.2 CYP17A1 基因 |
| 3.3 HSD3B1和HSD17B3 基因 |
| 3.3.1 HSD3B1 基因 |
| 3.3.2 HSD17B3 基因 |
| 3.4 GLOD4 基因 |
| 4 研究目的与意义 |
| 第二章 睾酮合成相关基因在藏绵羊睾丸中的表达特征 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及组织样品收集 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 组织总RNA提取 |
| 1.4.2 cDNA合成 |
| 1.4.3 引物设计与合成 |
| 1.4.4 qRT-PCR |
| 1.4.5 总蛋白提取 |
| 1.4.6 蛋白浓度测定与变性 |
| 1.4.7 WesternBlot |
| 1.4.8 免疫荧光染色定位蛋白分布 |
| 1.5 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 睾酮合成相关基因mRNA在藏绵羊睾丸组织中的表达模式 |
| 2.2 藏绵羊睾丸组织中睾酮合成相关基因蛋白的表达 |
| 2.3 藏绵羊睾丸组织中睾酮合成相关基因蛋白的免疫定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 睾酮合成相关基因在藏绵羊附睾中的表达特征 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及组织样品收集 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 藏绵羊附睾组织中睾酮合成相关基因mRNA的表达 |
| 2.1.1 藏绵羊附睾头中睾酮合成相关基因mRNA的表达 |
| 2.1.2 藏绵羊附睾体组织中睾酮合成相关基因mRNA的表达 |
| 2.1.3 藏绵羊附睾尾组织中睾酮合成相关基因mRNA的表达 |
| 2.2 藏绵羊附睾组织中睾酮合成相关基因蛋白的表达 |
| 2.2.1 藏绵羊附睾头中睾酮合成相关基因蛋白的表达 |
| 2.2.2 藏绵羊附睾体中睾酮合成相关基因蛋白的表达 |
| 2.2.3 藏绵羊附睾尾中睾酮合成相关基因蛋白的表达 |
| 2.3 藏绵羊附睾组织中睾酮合成相关基因蛋白的定位 |
| 2.3.1 藏绵羊附睾头中睾酮合成相关基因蛋白的定位 |
| 2.3.2 藏绵羊附睾体组织中睾酮合成相关基因蛋白的定位 |
| 2.3.3 藏绵羊附睾尾中睾酮合成相关基因蛋白的定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 miR-190-3p和 miR-363-3p与 HSD17B3 靶标关系验证 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要方法 |
| 1.3.1 组织总RNA提取 |
| 1.3.2 第一链c DNA合成 |
| 1.3.3 qRT-PCR |
| 1.3.4 HSD17B3 3'-UTR野生型及突变型序列的设计 |
| 1.3.5 HSD17B3 3′-UTR野生型(WT)和突变型(MUT)重组载体的构建和鉴定 |
| 1.3.6 miRNA模拟物化学合成 |
| 1.3.7 细胞转染 |
| 1.3.8 双荧光素酶活性检测 |
| 1.3.9 统计学分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 潜在调控HSD17B3的miRNAs在雄性生殖器官中的表达特征 |
| 2.1.1 oar-miR-190-3p在藏绵羊睾丸和附睾组织的表达情况 |
| 2.1.2 oar-miR-363-3p在藏绵羊睾丸和附睾组织的表达情况 |
| 2.1.3 HSD17B3与miRNAs在藏绵羊睾丸和附睾组织中表达的相关性分析 |
| 2.2 重组质粒的鉴定结果 |
| 2.3 双荧光素酶活性检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
| 导师简介 |
（7）基于单细胞测序解析猪精原细胞的异质性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 单细胞测序在生殖细胞上的研究进展 |
| 1.1 单细胞测序方法介绍 |
| 1.2 单细胞测序在生殖领域的应用 |
| 第二章 精原细胞及其分子标记物研究进展 |
| 2.1 精子发生简介 |
| 2.2 精原细胞的形成及其定义 |
| 2.3 分化精原细胞的研究进展 |
| 2.4 精原干细胞和分化精原细胞的分子标记物 |
| 2.5 CDH1、PODXL2、CD99 的研究进展 |
| 2.5.1 CDH1 的研究进展 |
| 2.5.2 CD99研究进展 |
| 2.5.3 PODXL2 的研究进展 |
| 2.6 研究目的及意义 |
| 试验研究 |
| 第三章 猪睾丸生殖细胞的单细胞测序 |
| 3.1 主要材料及试剂 |
| 3.2 测序方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 猪睾丸单细胞测序细胞类群分析 |
| 3.3.2 猪生殖细胞的发育轨迹分析及类群划分 |
| 3.3.3 精原细胞亚细胞群体分类 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 CDH1作为猪未分化精原细胞的分子标记物鉴定 |
| 4.1 材料与试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 猪睾丸组织消化 |
| 4.2.2 重力沉降法(STA-PUT)分选猪精原细胞 |
| 4.2.3 RNA提取及RNA反转录 |
| 4.2.4 qRT-PCR检测猪精原细胞特异性表达基因的水平 |
| 4.2.5 猪睾丸组织石蜡包埋 |
| 4.2.6 组织切片及冰冻切片制作 |
| 4.2.7 免疫组织化学染色 |
| 4.2.8 免疫荧光染色 |
| 4.2.9 冷冻切片的免疫荧光染色 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 CDH1 在猪精原细胞和睾丸组织中的表达及定位 |
| 4.3.2 CDH1 与已知猪精原细胞标志物的共定位情况 |
| 4.3.3 不同日龄猪睾丸组织中CDH1 阳性细胞的增殖与凋亡 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 CD99作为猪未分化精原细胞的分子标记物鉴定 |
| 5.1 材料与试剂 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 CD99 在猪睾丸组织中的表达及定位 |
| 5.3.2 CD99 在不同发育阶段猪睾丸中与猪精原细胞的共定位 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 PODXL2作为猪分化精原细胞的分子标记物鉴定 |
| 6.1 材料与试剂 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 PODXL2 在不同发育阶段猪睾丸组织中的定位情况 |
| 6.3.2 PODXL2 在不同发育阶段猪睾丸中与猪精原细胞的共定位 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论及创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）安格斯牛睾丸组织非编码RNA鉴定及单细胞转录图谱绘制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 牛睾丸发育 |
| 1.1.1 出生后牛睾丸生长发育 |
| 1.1.2 牛的精子发生 |
| 1.1.3 牛睾丸间质细胞和支持细胞发育 |
| 1.2 非编码RNA与睾丸发育 |
| 1.2.1 miRNA与睾丸发育 |
| 1.2.2 lncRNA与睾丸发育 |
| 1.2.3 circRNA与睾丸发育 |
| 1.2.4 ceRNA调控与睾丸发育 |
| 1.3 单细胞测序技术与睾丸发育 |
| 1.3.1 单细胞测序技术 |
| 1.3.2 单细胞测序技术在睾丸发育中的研究进展 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 安格斯牛睾丸组织不同时期lncRNA鉴定 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 切片制备和HE染色 |
| 2.2.2 总RNA提取 |
| 2.2.3 文库构建及测序 |
| 2.2.4 转录组测序数据分析 |
| 2.2.5 睾丸细胞的分离和RT-qPCR验证 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 睾丸组织的形态学检测 |
| 2.3.2 牛睾丸中lncRNA和 mRNA的测序信息 |
| 2.3.3 lncRNAs和 mRNA的基因组特征和表达谱分析 |
| 2.3.4 差异表达的mRNA富集分析 |
| 2.3.5 差异lncRNA靶基因富集分析 |
| 2.3.6 差异 lncRNA 及 mRNA 的表达谱验证 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 安格斯牛睾丸组织不同时期miRNA鉴定 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 总RNA提取 |
| 3.2.2 文库构建、测序及分析 |
| 3.2.3 RT-qPCR验证 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 牛睾丸小RNA测序文库质控分析 |
| 3.3.2 牛睾丸已知和新miRNA的鉴定和特征分析 |
| 3.3.3 性成熟前后睾丸差异表达的miRNA |
| 3.3.4 差异表达的miRNA靶基因预测 |
| 3.3.5 差异表达的miRNA靶基因富集分析 |
| 3.3.6 差异表达的miRNA RT-qPCR验证 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 安格斯牛睾丸组织不同时期circRNA鉴定 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 总RNA提取 |
| 4.2.2 文库构建及测序 |
| 4.2.3 测序结果分析 |
| 4.2.4 RT-qPCR验证 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 牛睾丸circRNA鉴定 |
| 4.3.2 初生期和性成熟期睾丸circRNA差异表达 |
| 4.3.3 差异表达circRNA宿主基因的富集分析 |
| 4.3.4 差异表达的circRNA RT-qPCR验证 |
| 4.3.5 circRNA-miRNA-mRNA网络的构建 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 circSMC1B通过靶向let-7i调控公牛生殖干细胞的增殖及凋亡 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 试验样品 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 circSMC1B全长扩增及载体构建 |
| 5.2.2 细胞增殖实验 |
| 5.2.3 细胞凋亡实验 |
| 5.2.4 RNA提取及cDNA合成及RT-qPCR实验 |
| 5.2.5 双荧光素酶报告系统载体构建 |
| 5.2.6 数据统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 circSMC1B鉴定 |
| 5.3.2 circSMC1B促进mGSCs细胞增殖 |
| 5.3.3 circSMC1B促进mGSCs细胞凋亡 |
| 5.3.4 circSMC1B竞争性结合let-7i |
| 5.3.5 let-7i抑制mGSCs细胞增殖 |
| 5.3.6 let-7i抑制mGSCs细胞凋亡 |
| 5.3.7 let-7i靶向HMGA1、NR6A1 调控mGSCs细胞增殖凋亡 |
| 5.3.8 circSMC1B竞争性结合let-7i促进mGSCs增殖凋亡 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 牛睾丸组织发育的单细胞转录图谱绘制 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 试验样品 |
| 6.1.2 主要试剂及仪器 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 睾丸单细胞悬液制备 |
| 6.2.2 单细胞测序基本流程 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 睾丸样本的HE染色 |
| 6.3.2 单细胞数据的质控和细胞类型鉴定 |
| 6.3.3 牛睾丸不同细胞群特异表达基因的鉴定分析 |
| 6.3.4 牛睾丸生殖细胞类型鉴定及分化过程 |
| 6.3.5 牛精原细胞基因动态表达 |
| 6.3.6 牛精母细胞基因动态表达 |
| 6.3.7 牛精子细胞基因动态表达 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）SSEA4作为猪精原干细胞膜分子标记物鉴定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 精子发生与精原干细胞 |
| 1.1 精子发生 |
| 1.2 精原干细胞 |
| 1.2.1 精原干细胞的起源 |
| 1.1.2 精原干细胞巢 |
| 1.2.3 精原干细胞的增殖 |
| 1.2.4 精原干细胞的分化 |
| 1.2.5 精原干细胞的鉴定方法 |
| 1.2.6 精原干细胞的分离与富集 |
| 1.2.7 精原干细胞的表面分子标记物 |
| 1.3 SSEA4 研究进展 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 试验部分 |
| 第二章 SSEA4 作为猪精原干细胞膜分子标记物鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物及组织准备 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 猪睾丸组织石蜡包埋 |
| 2.2.2 猪睾丸组织的冷冻组织包埋 |
| 2.2.3 组织切片苏木精-伊红染色 |
| 2.2.4 组织切片免疫荧光染色 |
| 2.2.5 睾丸细胞的分离 |
| 2.2.6 流式细胞分选(FACS) |
| 2.2.7 细胞总RNA的提取 |
| 2.2.8 Western blot |
| 2.2.9 细胞免疫荧光 |
| 2.2.10 转录组数据分析 |
| 2.2.11 猪精原干细胞的异种移植 |
| 2.2.12 异种移植后细胞克隆数的计数 |
| 2.2.13 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 猪睾丸的组织学分析 |
| 2.3.2 SSEA4 阳性细胞的定位分析 |
| 2.3.3 免疫荧光染色鉴定猪睾丸组织中表达SSEA4 的细胞类型 |
| 2.3.4 FACS分离的SSEA4 阳性细胞富集猪未分化精原细胞 |
| 2.3.5 SSEA4 阳性精原细胞的转录组分析 |
| 2.3.6 SSEA4 阳性细胞的生物学功能分析 |
| 2.4 讨论 |
| 结论及创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）组蛋白甲基转移酶SETDB1对精原干细胞增殖与分化的调控作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 精子发生与精原干细胞 |
| 1.1 精子发生 |
| 1.2 精原干细胞 |
| 1.3 精原干细胞增殖调控 |
| 1.3.1 GDNF对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.2 ETV5 对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.3 BCL6B对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.4 ID4 对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.5 PLZF对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.6 POU5F1 对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.7 FOXO1 对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.3.8 活性氧对精原干细胞增殖的调控 |
| 1.4 精原干细胞分化调控 |
| 1.4.1 SOX3 对精原干细胞分化的调控 |
| 1.4.2 STAT3 对精原干细胞分化的调控 |
| 1.4.3 NGN3 对精原干细胞分化的调控 |
| 1.4.4 SOHLH1和SOHLH2 对精原干细胞分化的调控 |
| 1.4.5 DMRT1 对精原干细胞分化的调控 |
| 第二章 表观修饰与SETDB1 的研究进展 |
| 2.1 组蛋白甲基化 |
| 2.2 H3K9me3 修饰 |
| 2.2.1 H3K9me3 与异染色质形成 |
| 2.2.2 H3K9me3 与细胞命运决定 |
| 2.3 组蛋白甲基化修饰与DNA损伤应答 |
| 2.3.1 H3K4 甲基化修饰与DNA损伤应答 |
| 2.3.2 H3K9 甲基化修饰与DNA损伤应答 |
| 2.3.3 H3K27 甲基化修饰与DNA损伤应答 |
| 2.3.4 H3K36 甲基化修饰与DNA损伤应答 |
| 2.3.5 H3K9 甲基化和DNA甲基化对转座子的调控 |
| 2.4 组蛋白甲基化对精原干细胞增殖与分化的调控 |
| 2.5 m~6A修饰对精原干细胞增殖与分化的调控 |
| 2.6 SETDB1 的结构 |
| 2.7 SETDB1 的亚细胞定位 |
| 2.8 SETDB1 对转座子的调控 |
| 2.9 SETDB1 在雄性生殖细胞中的功能 |
| 2.10 研究目的与意义 |
| 试验部分 |
| 第三章 SETDB1 对小鼠精原干细胞存活的调控作用 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 细胞系 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.1.4 试验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 Setdb1 si RNA干扰效率检测 |
| 3.2.2 Setdb1-KD对小鼠精原干细胞内活性氧水平的影响 |
| 3.2.3 Setdb1-KD对小鼠精原干细胞存活的影响 |
| 3.2.4 Setdb1-KD对小鼠精原干细胞增殖速率的影响 |
| 3.2.5 Setdb1-KD诱导活性氧上调的分子机制 |
| 3.2.6 Setdb1-KD通过调节细胞内活性氧水平调控精原干细胞存活 |
| 3.2.7 Setdb1-KD激活活性氧下游信号通路 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 SETDB1在Ythdf2-KO诱导的DNA损伤敏感性增加过程中的功能 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 细胞系 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.1.4 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 Ythdf2-KO导致小鼠精原细胞DNA损伤敏感性增加 |
| 4.2.2 Ythdf2-KO影响DNA损伤修复 |
| 4.2.3 体内试验说明Ythdf2 cKO影响DNA损伤修复 |
| 4.2.4 Ythdf2-KO对 H3K9me3 修饰的影响 |
| 4.2.5 Ythdf2-KO诱导的DNA损伤敏感性增加的分子机制 |
| 4.2.6 SETDB1与γH2AX具有相互作用 |
| 4.2.7 Setdb1-KD导致精原细胞DNA损伤敏感性增加 |
| 4.2.8 Setdb1-KD影响DNA损伤修复 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 SETDB1 对猪精原干细胞分化的调控 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 猪精原干细胞的分离纯化及其鉴定 |
| 5.2.2 猪分化精原细胞的分离纯化及其鉴定 |
| 5.2.3 猪精原干细胞分化过程中的基因表达分析 |
| 5.2.4 猪精原干细胞分化过程中染色质可及性变化 |
| 5.2.5 SETDB1 介导的H3K9me3 修饰与染色质可及性之间的关系 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 后续研究工作 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、睾丸生殖细胞研究进展（论文参考文献）
- [1]奶山羊精子发生关键分子挖掘与性控精液研究[D]. 任发. 西北农林科技大学, 2021
- [2]猪隐睾睾丸精子发生障碍的分子机制研究[D]. 范小瑞. 山西农业大学, 2021(02)
- [3]白藜芦醇对奶山羊精原干细胞冷冻保存效果的影响[D]. 冯天雨. 西北农林科技大学, 2021
- [4]基于转录组学的藏绵羊睾丸功能基因鉴定及其表达调控[D]. 李讨讨. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [5]长白公猪性成熟前后睾丸组织环状RNA、信使RNA N6-腺苷甲基化修饰的发掘鉴定及差异表达分析[D]. 张飞. 安徽农业大学, 2021
- [6]藏绵羊睾酮合成相关基因在睾丸和附睾中的表达特征及生物学功能[D]. 王霞. 甘肃农业大学, 2021
- [7]基于单细胞测序解析猪精原细胞的异质性[D]. 雷佩佩. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [8]安格斯牛睾丸组织非编码RNA鉴定及单细胞转录图谱绘制[D]. 高源. 西北农林科技大学, 2021
- [9]SSEA4作为猪精原干细胞膜分子标记物鉴定[D]. 李富远. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [10]组蛋白甲基转移酶SETDB1对精原干细胞增殖与分化的调控作用及其机制研究[D]. 李学亮. 西北农林科技大学, 2021(01)