一、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在内耳中的研究进展（论文文献综述）
郭长权[1]（2020）在《细胞因子bFGF和LIF对雏鸡原始卵泡发育的调节作用及其机理的研究》文中研究说明家禽卵巢中早期卵泡的发育与卵母细胞及颗粒细胞之间的物质传递和信息通讯密切相关,而细胞因子在其中扮演了重要的媒介作用。细胞因子能促进细胞的增殖和生长,而且还可以调节细胞的迁移、分化和有丝分裂。细胞因子包含很多种类,各种细胞因子经由旁分泌或自分泌以及卵母细胞和颗粒细胞间的物质运输、信号通讯对卵泡形成发育产生作用:调控颗粒细胞的增殖分化、激素分泌和其他细胞因子生成等。而细胞因子参与家禽早期卵泡生长发育相关的研究很少。同时家禽的繁殖性能是畜牧业上比较关注的问题,而早期卵泡发育对于最终的繁殖性能是有决定性影响的。所以对细胞因子在早期卵泡发育中的调控作用开展深入研究是有意义的。本实验以雏鸡为研究对象,检测雏鸡卵泡发育中基因的表达量变化以及利用已经建立的体外培养的卵巢模型来研究两种细胞因子,即碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,bFGF）和白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）在雏鸡早期卵泡发育中的调控作用和其中的机理,为家禽产蛋性能的后续研究提供理论依据。1.雏鸡卵巢早期卵泡发育中miRNA表达的变化雏鸡早期卵泡的形成和发育涉及许多基因表达的变化。本实验以不同日龄的雏鸡卵巢作为实验样品,利用RNA-seq的实验技术来研究早期雏鸡卵巢中miRNA的表达。取D0、D4、D7的雏鸡卵巢各三个,用于RNA-seq分析。在RNA-seq建库结果中对miRNA进行质检,筛选出有显着差异表达的基因来进行RT-qPCR的验证,验证结果是趋势一致,RNA-seq结果可信。结果显示,与D0卵巢组织相比较,D4卵巢组织共有10种表达显着差异的miRNA,包括8条上调基因,2条下调基因;与D0卵巢组织相比较,D7卵巢组织共有50种表达显着差异的miRNA,包括35条上调基因,15条下调基因;与D4卵巢组织相比较,D7卵巢组织共有18种表达显着差异的miRNA,包括12条上调基因,6条下调基因。对差异表达miRNA的靶基因做汇总,结果显示,D4vs D0中,靶基因与细胞的抗凋亡和细胞因子作用相关;D7vs D0中,靶基因与细胞抗凋亡、细胞因子作用和激素合成相关;D7vs D4中,靶基因与缝隙连接、细胞因子作用、MAPK信号通路相关,其中涉及的靶基因有GJA5、HLF、MAP3K14等。上述结果表明,miRNA可通过缝隙连接、细胞抗凋亡、卵巢发育信号相关通路和细胞因子作用等方面来影响雏鸡卵泡的发育。2.雏鸡卵巢早期卵泡发育中lncRNA表达的变化本实验以不同日龄的雏鸡卵巢作为实验材料,用RNA-seq来分析雏鸡卵巢中lncRNA水平随时间的变化。并像上一章一样筛选出有显着差异表达的基因并用RT-qPCR来进行验证,使用GO数据库把有表达差异的lncRNA靶基因做富集处理分析,使用KEGG数据库给表达差异的lncRNA靶基因做通路注释。结果显示,与D0卵巢组织相比较,D4卵巢组织共有106种表达显着差异的基因,包括65条上调基因,41条下调基因;与D0卵巢组织相比较,D7卵巢组织共有305种表达显着差异的基因,包括214条上调基因,91条下调基因;与D4卵巢组织相比较,D7卵巢组织共有109种表达显着差异的基因,包括52条上调基因,57条下调基因。RT-qPCR的验证实验证实了 RNA-seq结果的可靠性。GO数据库的结果表明差异表达的lncRNA靶基因大多富集于抗原受体介导的信号通路、细胞因子的合成和非膜跨蛋白酪氨酸激酶活性等生理活动,KEGG数据库结果显示差异的表达lncRNA靶基因大多与细胞因子-细胞因子受体间的相互作用、细胞黏附分子和卵泡发育相关的信号通路有关。其中D7 vs D4结果显示,不少靶基因为细胞因子或细胞因子受体的lncRNA表达明显增加,其中包括了FGF2,IL6R以及GDF9等。上述结果表明,lncRNA可通过细胞因子、细胞连接以及卵泡生长相关的信号通路等方面促进早期雏鸡卵泡的形成和发育,其中相关的细胞因子有FGF2,LIF和GDF9等。3.bFGF对雏鸡原始卵泡发育的调控作用许多细胞因子在雌性原始卵泡激活的过程中发挥重要的促进作用。而RNA-seq结果显示,D4雏鸡卵巢发育到D7的过程中表达明显增加的lncRNA的靶基因中有FGF2。同时先前也有研究报道,FGF2在大鼠中可以促进原始卵泡的激活。FGF2在禽类调节原始卵泡激活的作用研究很少。本实验检测了细胞因子bFGF和FSH对原始卵泡发育的相互刺激作用及其可能的信号机制,包括蛋白激酶B（AKT）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路。对4日龄雏鸡卵巢进行3天的bFGF和FSH处理,观察bFGF和FSH对卵泡发育的影响。本研究采用HE染色、免疫组化、实时定量PCR（qRT-PCR）、Western blot、免疫荧光等方法。在鸡早期卵巢中发现,bFGF受体（FGFR1）mRNA表达和原始卵泡激活的时间进程之间有变化的相关性。bFGF与FSH的相互刺激作用在原始卵泡的激活过程中表现为促进颗粒细胞的增殖、减少细胞的凋亡。FGFR1的抑制剂SU5402减弱了 bFGF的促进作用,降低了生长卵泡的比例。AKT和ERK信号通路介导了 bFGF和FSH促进原始卵泡激活的作用。上述研究结果表明,细胞因子bFGF和FSH通过PI3K-AKT和ERK信号通路对鸡早期卵巢颗粒细胞的增殖和抗凋亡产生相互刺激作用,促进原始卵泡激活。4.LIF对雏鸡原始卵泡发育的调控作用RNA-seq结果显示,D4雏鸡卵巢发育到D7的过程中表达明显增加的lncRNA的靶基因也有IL6R,IL6R与LIF的受体组成有关。LIF对雏鸡原始卵泡激活的作用研究较少。本实验检测了细胞因子LIF和bFGF在原始卵泡发育过程中的作用和相互之间的关联,以及涉及到的信号通路,包括了 AKT、ERK和Wnt/β-catenin信号通路。对出雏后4天的雏鸡进行卵巢组织的取材,并用LIF和bFGF单独或者联合处理3天,观察卵泡发育情况的变化。本研究采用HE染色、免疫组化、Western blot、透射电镜、免疫荧光等实验方法。结果显示,LIF以及其受体（LIFR）蛋白表达的变化与早期卵泡的发育过程之间有一定的时间相关性。LIF和bFGF的对于促进原始卵泡的激活有一定的协同作用,而具体的表现是促进卵泡细胞的增殖、同时减少卵泡细胞的凋亡。而LIFR的抑制剂SC144能够抑制LIF的这种促进原始卵泡激活的作用。同时AKT和ERK信号通路也参与了 LIF和bFGF这两者促增殖抑凋亡的过程,而Wnt/β-catenin信号通路在其中也有一定的介导作用。上述研究结果表明,LIF和bFGF可通过促进雏鸡卵泡细胞的增殖和抑制其凋亡,并产生协同作用从而促进原始卵泡的激活,这一过程中会涉及到AKT,ERK和Wnt/β-catenin信号通路。本实验利用RNA-seq来检测雏鸡卵巢卵泡发育过程中基因表达量的变化,将有显着表达差异的lncRNA与miRNA汇总并进行对比补充,发现在雏鸡原始卵泡激活阶段,靶基因与FGF2和LIF有关的lncRNA表达显着增加;利用已建立的卵巢组织体外培养模型,研究bFGF和LIF在雏鸡卵巢中原始卵泡激活的调控作用,发现FSH与bFGF发挥协同作用,可通过PI3K-AKT和ERK信号通路对雏鸡早期卵巢中颗粒细胞的增殖和抗凋亡的刺激作用从而促进卵泡激活;而LIF和bFGF可通过协同作用促进卵泡细胞增殖并抑制其凋亡,再通过AKT、ERK和Wnt/β-catenin信号通路促进卵泡激活。这些结果将为后续深入研究家禽卵泡发育的调控机制以及提高家禽产蛋性能奠定一定的理论基础。
买冰洁[2]（2020）在《光动力抗菌化学疗法在烧伤感染治疗中的研究与应用》文中认为研究背景和目的:烧伤是由物理和化学因素作用于体表所造成的皮肤、皮下以及深层组织的损伤,是日常生活、战争中常见的外伤性疾病。感染、休克和多脏器功能衰竭是烧伤的三大并发症,其中感染致死的比率最高。根据世界卫生组织的最新报告,每年约有265000人死于烧伤。有效地预防伤口感染和改善患者愈合效率对烧伤感染的治疗至关重要,烧伤创面临床常见的治疗方法是皮肤移植联合抗生素治疗。近年来,抗生素的过度使用导致细菌多药耐药性（Multidrug resistance-MDR）的出现,这些菌株通常会形成特殊的生物膜,用以保护细菌免受抗菌药物和吞噬作用的侵害。因此,探索新的治疗策略控制和克服多药耐药细菌是目前烧伤外科临床抗感染亟待解决的重大课题。本论文在烧伤感染治疗中采用的光动力抗微生物化学疗法（Photodynamic antimicrobial chemotherapy,PACT）是一种新型微创策略,光敏剂（Photosensitizer,PS）通过光化学反应产生活性氧（ROS）,导致创伤部位细菌不可逆的损伤和死亡。华卟啉钠（DVDMS）是我国具有自主知识产权的光敏剂,本课题在前期的研究中发现DVDMS在具有很好地声光活性的同时,还兼有良好地水溶性、较低地暗毒性与较高地单线态氧产率等优势,预示着DVDMS将在PACT中有较大的发挥空间。PACT的应用优势是在合适的外用药物制剂中采用特定的结合方式加入一定剂量的PS,然后利用光动力激活PS获得光化学抑菌效果。外用药物制剂有液体、半固体和固体,根据结构基质的不同,可分为乳剂、凝胶剂、脂质体和透皮贴剂。与常规药物载体相比,基于水凝胶的药物递送系统在PACT中具有显着地优势。首先,水凝胶基质通常由剂型不同的化合物组成,使其适合封装各种分子（光敏剂和其他功能性药物）和纳米制剂。其次,水凝胶基质流动性低,可以使PS长时间地停留在原位增加药物渗透作用,减少PACT的副作用。伤口愈合是一个复杂的生物学过程,涉及一系列动态事件,包括止血、炎症、细胞增殖和分化、新血管及肉芽组织形成、胶原蛋白合成、皮肤上皮化和伤口收缩等。大量研究证实碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）是动物和人类组织修复、血管生成中重要的生物大分子。在PACT治疗中引入外源性的生长因子可以在杀菌后刺激胶原蛋白的合成并减轻伤口愈合中瘢痕的形成。为了避免生长因子在水溶液或较高温度下变性,利用可生物降解的聚乳酸-乙酸共聚物（PLGA）,制备PLGA-bFGF纳米颗粒,以延长bFGF的持续释放时间和生物学活性。基于PACT研究相关的创新设想,本课题进行了 DVDMS介导PACT（DVDMS-PACT）对临床常见的传染性病原体金黄色葡萄球菌及其多药耐药株(Staphylococcus aureus/Multidrug resistance-Staphylococcus aureus,S,aureus/MDR-S aureus的体外抑菌的浓度筛选与损伤机制的探究;以小鼠深二度烧伤感染模型为研究对象,评估DVDMS-PACT对烧伤感染的治疗效果;构建共载DVDMS与PLGA-bFGF纳米颗粒的智能响应性水凝胶系统（CSDP水凝胶）,并对制备的CSDP水凝胶进行表征;通过毒理实验分析CSDP水凝胶介导PACT（CSDP水凝胶-PACT）处理之后对细菌细胞膜、细胞壁、生物膜的影响;通过皮肤细菌定植量、皮肤愈合情况、伤口炎症因子与生长因子的分布规律,研究CSDP水凝胶-PACT对烧伤感染的治疗优势,由此实现烧伤感染的局部可控、可重复、高效率的协同治疗新思路。主要内容涵盖以下五个部分:研究方法及结果:（1）DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的体外抑菌效果与机制探究使用电子自旋共振谱仪（Electron spin-resonance spectroscopy,ESR）检测 PS光照处理之后产生的自由基类型;通过碱性裂解法及荧光显微镜检测DVDMS在细菌内的富集规律,选择在药物最大富集的时间窗口进行PACT处理;利用平板计数法统计DVDMS-PACT处理之后的活细菌数量;SYTO 9/PI染色结合荧光显微镜与流式细胞仪检测细菌细胞膜通透性的改变;扫描电子显微镜,原子力显微镜观察细菌细胞壁,生物膜的损伤;H2-DCFH-DA染色结合流式细胞仪检测DVDMS-PACT处理后胞内活性氧水平的变化;通过转录组测序技术（RNA-seq）结合Real time-PCR技术对比DVDMS-PACT亚致死剂量下MDR-S.aureus与未处理组MDR-S.aureus的全部转录本信息,初步探究DVDMS-PACT损伤MDR-S.aureus的分子机制。研究发现:DVDMS光照处理后主要的活性氧类型是单线态氧;随着孵育时间的增加,细菌中的DVDMS相对荧光强度增加,并在75 min时达到峰值;与对照组相比,单独的DVDMS对细菌没有明显的杀伤作用,而DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus具有明显地杀伤,且杀伤效果与光照剂量、药物剂量呈正相关,5 μM的DVDMS联合50 J/cm2光照剂量可以清除99.99%的 S.aaureus 和 MDR-S.aaureus,其中,MDR-S.aureus的杀伤效率低于S.aureus;DVDMS-PACT处理之后细菌细胞膜、细胞壁和生物膜出现明显地破坏,并且在该过程中伴随大量活性氧的产生;RNA-seq结果分析共获得222个差异表达基因,其中111个基因表达上调,111个基因表达下调。在得到Real time-PCR验证的差异基因中,核糖体蛋白、肽聚糖和氨基酸合成相关途径下调,表明DVDMS-PACT可能通过影响蛋白质和细胞壁的形成来抑制细菌的增殖,这为以核糖体和细胞壁为靶点的抗生素耐药性地解决提供了新的思路。DVDMS-PACT处理后MDR-S.aureus的戊糖磷酸途径相关基因表达上调,戊糖磷酸途径通过产生NADPH增加细菌对氧化应激的耐受,表明DVDMS-PACT处理后MDR-S.aureus中氧化应激水平升高从而降低了其DVDMS-PACT杀伤效率。（2）DVDMS-PACT对烧伤感染的治疗研究通过控制不同的压力与温度建立小鼠深二度烧伤感染模型,研究DVDMS-PACT对烧伤感染处创面愈合、细菌定植与皮肤内生长因子水平的影响,评估DVDMS-PACT治疗烧伤感染的作用优势和生物安全性。研究发现:Balb/c小鼠于75℃联合500 g压力作用3 s后可形成深二度皮肤烧伤模型;与模型对照组相比,DVDMS-PACT处理后可快速地促进烧伤感染后的创面愈合,愈合速率与DVDMS浓度呈现剂量依赖效应;DVDMS-PACT治疗后小鼠皮肤组织内生长因子VEGF、bFGF、TGF-β1、Hyp含量升高,皮肤定植菌与炎症因子TNF-α、IL-6、MDA的含量降低。在DVDMS-PACT处理后,小鼠的体重与器官无明显的变化,表明该疗法具有一定的安全性。（3）共载DVDMS和PLGA-bFGF纳米颗粒的智能响应性纳米复合水凝胶（CSDP水凝胶）的构建与表征通过双重乳化法构建装载bFGF的PLGA纳米颗粒,利用扫描电镜、动态激光粒度分析仪、Zeta电位测定仪等表征纳米颗粒的基本属性;EDC/NHS一步法催化羧甲基壳聚糖（CMCS）和海藻酸钠（SA）形成羧甲基壳聚糖-海藻酸钠水凝胶（CS水凝胶）,在水凝胶形成过程中添加DVDMS与PLGA-bFGF纳米颗粒合成CSDP水凝胶,利用红外光谱、流变仪、万能拉伸机等技术表征水凝胶的基本性能,并研究了共载后的药物稳定性以及不同pH条件下的响应释药潜能;从细胞毒性、红细胞溶血现象和皮肤毒性评估CSDP水凝胶的安全性。研究发现:PLGA-bFGF呈现大小均一的球状颗粒,粒径在420 nm左右,可以促进小鼠成纤维细胞NIH-3T3的增殖与迁移,增加创伤皮肤组织内的胶原以及生长因子含量,有效地促进创伤的愈合;CSDP水凝胶包载DVDMS之后依旧保持其光谱特性,具有明显的pH响应释放能力,可在伤口处响应性地释放DVDMS;水凝胶固有的抗菌性、止血性能、力学性能、流变性能、粘附性则使其具有较好的伤口适应性;离体与载体的荧光成像结果显示,相比游离的DVDMS（Free DVDMS）,相同浓度的CSDP水凝胶具有更高的荧光强度与更长时间的稳定性;CSDP水凝胶联合光照处理之后的单线态氧产率是Free DVDMS的1.9倍;CSDP水凝胶体系对小鼠的红细胞,成纤维细胞和皮肤没有明显的毒副作用,证明CSDP水凝胶具有良好的安全性。（4）CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤效应研究以S.aureus/MDR-S.aureus为模型,通过菌落形成单位（CFU）分析CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤效率;利用SYTO 9/PI染色检测不同处理后细菌细胞膜通透性的改变;扫描电子显微镜、激光共聚焦显微镜观察细菌生物膜的结构变化,结晶紫染色与CFU实验对生物膜进行定量、计数分析;H2-DCFH-DA染色结合流式细胞仪检测CSDP水凝胶-PACT处理后细菌内活性氧含量。研究发现:CSDP水凝胶-PACT可以有效地杀伤S.aureus/MDR-S.aureus,相同条件下的杀伤效果优于Free DVDMS-PACT与临床常用的抗生素药物;SYTO 9/PI染色观察到细菌细胞膜通透性的改变,并且在该过程中伴随大量ROS的产生;扫描电子显微镜与激光共聚焦显微镜观察到细菌生物膜结构的破坏,结晶紫定量与平板计数实验证实CSDP水凝胶-PACT可以有效地破坏细菌生物膜的结构、降低生物膜中活细菌数量。（5）CSDP水凝胶-PACT对烧伤感染的治疗研究以皮肤伤口愈合率、皮肤定植菌以及皮肤组织内的相关因子、切片染色为指标来评估CSDP水凝胶-PACT对小鼠深二度烧伤感染的治疗效果。研究发现:相比Free DVDMS-PACT与单独包裹DVDMS的水凝胶（CSD水凝胶）-PACT,CSDP水凝胶-PACT可以更加有效地减少皮肤中定植菌含量,促进皮肤的快速愈合。皮肤H&E切片染色与ELISA结果显示CSDP水凝胶-PACT可在较短时间内促进伤口部位的收缩,增加皮肤组织内胶原、毛囊的含量,降低皮肤组织的炎症因子含量,有利于伤口的快速安全愈合;治疗过程中小鼠的体重未见明显的改变,治疗结束后小鼠的主要脏器无明显的病理学异常。研究结论:（1）DVDMS-PACT可有效地杀伤S.aureus/MDR-S.aureus,对细菌细胞膜、细胞壁与生物膜造成损伤,并且在该过程中伴随大量ROS的产生;RNA-seq结果显示DVDMS-PACT处理之后共检测到222个差异基因,MDR-S.aureus差异表达基因主要集中在代谢过程、分子功能和细胞组件等方面,DVDMS-PACT损伤细菌的作用机制与这些基因的表达变化相关。（2）DVDMS-PACT可通过降低皮肤创面的定植菌数量、炎症因子含量,增加皮肤组织的生长因子的水平,促进烧伤感染处的皮肤愈合。（3）设计合成的CSDP水凝胶具有良好的机械性能、粘附性、止血性能、生物相容性以及维持负载药物的稳定性,可用于烧伤感染创面的环境响应性释放DVDMS和PLGA-bFGF纳米颗粒。（4）CSDP水凝胶联合PACT处理对S.aureus./MDR-Saureus浮游菌株与生物膜具有明显的杀伤效果,并且该效果优于Free DVDMS联合PACT处理组。（5）CSDP水凝胶联合光照处理组可促进烧伤感染后皮肤的快速愈合,同时降低皮肤定植菌与炎症因子含量,提高皮肤组织中生长因子的水平;共载的水凝胶联合光照处理的治疗效果优于单独包载DVDMS联合光照处理组。
关东伟[3]（2019）在《肺内皮细胞靶向肽修饰的成纤维细胞生长因子对放射性肺损伤的修复》文中提出背景和目的:放射性肺损伤（Radiation-induced lung injury,RILI）是核事故幸存者的主要并发症,长期困扰着生存病人的生活质量。RILI也是胸部肿瘤放疗剂量的主要限制因素,影响肿瘤的控制效果。RILI的发生机制非常复杂,涉及到一系列细胞及分子的相互作用,病理上主要表现为炎症细胞的迁移与浸润、成纤维细胞的增生与分化、胶原蛋白的分泌与积聚、血管壁的增厚与闭塞、正常肺泡结构的破坏与重塑等。近年研究发现,在放射损伤后数个小时内发生的血管内皮细胞凋亡可能是导致上述病理表现的启动机制,阻断血管内皮细胞的凋亡可以缓解放射损伤的程度。成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）广泛参与胚胎发育、组织再生、血管生成等多种生物学过程,也在皮肤、骨、尿道、子宫、神经等组织器官的缺损或损伤模型中发挥促修复作用。研究发现,bFGF也在放射损伤中发挥保护作用,主要机制为抑制血管内皮细胞的凋亡。此外,微血管内皮细胞对辐照的敏感性明显高于大血管,可能与bFGF在微血管基底膜上的分布较少甚至缺乏有关。肺具有异常丰富的微血管系统,缺乏足够的bFGF提供保护可能是肺对射线较为敏感的原因之一,因此外源性给予bFGF可能是缓解与修复RILI的有效方法。但是,bFGF在应用中常面临着靶向性低、透膜能力差、半衰期短等问题,为了达到有效的治疗效应,需要提高bFGF的使用剂量,但是高剂量给药可能会对其他正常组织造成潜在危险。靶向给药是近年来的研究热点,可以提高病灶中的药物浓度,降低正常组织中的药物分布,从而在增强治疗效应的同时降低副作用。其中,靶向性多肽是一种具有良好应用前景的递送配体,具有渗透性好、合成方便、免疫原性低、成本低、易修饰等优点。CGSPGWVRC是通过噬菌体展示技术获得的肺血管内皮细胞靶向肽（Lung endothelial cell-targeted peptide,LET）,并经体外和体内实验证实了其较好的肺内皮细胞靶向能力。综上所述,我们准备用LET对bFGF进行修饰（LET-bFGF）,以提高bFGF重组蛋白对肺内皮细胞的靶向能力,从而增强bFGF对RILI的修复功能。方法:1.LET-bFGF的制备:在pET28a-bFGF质粒的基础上,将一段Linker序列（共15个氨基酸,即45个核苷酸）和LET序列（共9个氨基酸,即27个核苷酸）连接至bFGF的羧基端,通过PCR、酶切、连接、转化、筛选等方法构建pET28a-LET-bFGF质粒,然后通过大肠杆菌表达系统获得LET-bFGF重组蛋白,使用镍柱亲和层析法进行纯化,最后采用MTT试验检测生物学活性。2.LET-bFGF的肺靶向验证:27只SD大鼠随机分为3组:对照组、bFGF组、LET-bFGF组。bFGF组和LET-bFGF组分别尾静脉注射bFGF和LET-bFGF（25 nmol/kg）,对照组使用生理盐水作为对照。在注射后10 min、1 h和6 h时,Elisa检测肺组织和血清中bFGF的含量。24只SD大鼠随机分为4组:正常+bFGF组、放射+bFGF组、正常+LET-bFGF组、放射+LET-bFGF组。正常组使用正常大鼠,放射组使用RILI大鼠,bFGF组和LET-bFGF组在造模后分别尾静脉注射偶联了Cy7的bFGF（bFGF-Cy7）和偶联了Cy7的LET-bFGF（LET-bFGF-Cy7）（500μL,30μmol/L）。在注射后1 h时,小动物活体成像检测在体和离体器官的荧光强度。24只SD大鼠随机分为4组:正常+bFGF组、放射+bFGF组、正常+LET-bFGF组、放射+LET-bFGF组。正常组使用正常大鼠,放射组使用RILI大鼠,bFGF组和LET-bFGF组在造模后分别尾静脉注射bFGF和LET-bFGF（100 nmol/kg）。在注射后1h时,免疫荧光染色检测外源性bFGF在肺组织中的分布。3.LET-bFGF对RILI大鼠模型的修复作用:60只SD大鼠随机分为4组:对照组、放射组、放射+bFGF组、放射+LET-bFGF组。对照组使用正常大鼠,其余三组使用RILI大鼠,放射+bFGF组和放射+LET-bFGF组在造模后分别尾静脉注射bFGF和LET-bFGF（25 nmol/kg）,对照组和放射组使用生理盐水作为对照。在造模后早期（4 h）,取肺组织进行TUNEL与CD31的双重染色,以检测LET-bFGF对肺血管内皮细胞凋亡的保护作用;在造模后远期（2个月）,对大鼠进行肺部CT扫描,取肺组织进行HE染色、Masson染色和CD45的免疫组织化学染色,以检测LET-bFGF对肺炎和肺纤维化的治疗效应。结果:1.在pET28a-bFGF质粒的基础上,成功将一段45个核苷酸的Linker和27个核苷酸的LET序列连接于bFGF序列的羧基端,最终获得pET28a-LET-bFGF质粒,测序验证序列完全正确。2.通过大肠杆菌表达系统和镍柱亲和层析法获得纯化蛋白,经SDS-PAGE证实bFGF和LET-bFGF均符合理论分子量,分别为19.42 kD和21.50 kD,WB证实bFGF和LET-bFGF均可以与抗bFGF抗体特异性结合。3.bFGF与LET-bFGF均具有较好的生物学活性,而且LET靶向肽与Linker在bFGF羧基端的融合表达并未影响bFGF的生物学活性。4.LET-bFGF经尾静脉注射至大鼠体内后,可迅速表现出明显的肺靶向聚集效应,但是其体内代谢也较快,注射后6 h便恢复至肺组织本底水平,可能主要通过肾脏排泄。5.放射损伤对LET-bFGF具有一定的趋化作用,可以增强LET-bFGF的肺靶向能力。6.在辐照后4 h时,凋亡主要发生于肺血管内皮细胞,在辐照后2个月时,凋亡可广泛发生于各种类型的细胞中,包括血管内皮细胞、肺泡上皮细胞、间质细胞等,LET-bFGF可以抑制放射诱导的早期和远期肺血管内皮凋亡,其凋亡抑制效应优于bFGF。7.在辐照后2个月时,正常的肺泡结构被严重破坏,肺泡间隔明显增厚,大量的炎症细胞浸润,血管壁显着增厚,部分肺毛细血管可发生扩张和淤血,LET-bFGF可以降低肺血管壁的增生,缓解其他肺组织结构的紊乱,其保护效应优于bFGF。8.在辐照后2个月时,炎症细胞大量分布于肺间质与肺泡中,LET-bFGF可以降低放射诱导的肺部炎症,而bFGF则未观察到这种炎症抑制效应。9.在辐照后2个月时,肺部呈明显的纤维化,影像学表现为大量广泛分布的高密度影,肺平均密度显着升高,LET-bFGF可以减轻放射诱导的肺纤维化程度,而bFGF则未观察到这种纤维化抑制效应。结论:肺内皮细胞靶向肽LET修饰的bFGF具有较好的肺靶向能力,能够在RILI中发挥良好的修复作用。
王谦[4]（2019）在《运动康复对稳定性冠心病血管新生及内皮功能的影响》文中提出目的:本项目旨在观察运动康复前后稳定性冠心病（SCAD）患者一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）水平的变化,了解运动康复对稳定性冠心病患者血管新生及血管内皮功能的影响。方法:本研究选取2016年1月至2018年7月我院门诊体检及住院患者为研究对象,共85例。依各入选标准将其分为:对照组（A组）16例、危险因素组（B组）17例、稳定性冠心病组（52例）。又根据运动康复的情况将稳定性冠心病组分为:非康复运动组（C组）15例、亚康复运动组（D组）18例、康复运动组（E组）19例;收集所有研究对象的一般资料,包括年龄、性别、吸烟史、血压、身体质量指数（BMI）等;所有研究对象均测量血生化（包括空腹血糖、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、尿酸（UA）等）。入组时和6月后分别对所有对象进行NO、ET-1、VEGF、bFGF检测。所得数据进行相关统计学分析,比较运动前后组内和组间NO、ET-1、VEGF、bFGF水平变化,以了解运动康复对稳定性冠心病患者血管新生及血管内皮功能的影响。结果:1.基本资料比较:对照组吸烟率、收缩压、舒张压、空腹血糖、LDL小于其余四组（P<0.05）,余基本资料各组间均无差异（P>0.05）2.入组时,各组NO、ET-1、VEGF、bFGF 组间比较:（1）.同 A组相比,BCDE 组 NO 下降,ET-1上升（P<0.05）,VEGF和bFGF无明显差异（P>0.05）;（2）同B组相比,CDE组 NO 下降,ET-1 上升（P<0.05）,VEGF 和 bFGF 没有明显差异（P>0.05）（3）.C D E三组间比较,NO、ET-1、VEGF、bFGF均无明显差异（P>0.05）;3.各组间6月后NO、ET-1、VEGF、bFGF比较:（1）.与A组相比,BCD组仍NO下降,ET-1升高（P<0.05）,VEGF和bFGF仍无明显差异（P>0.05）;E组1NO、ET-1已无明显差异（P>0.05）,而VEGF、bFGF有升高（P<0.05）。（2）.与B组相比,C D组仍NO下降,ET-1升高（P<0.05）,VEGF和bFGF仍无明显差异（P>0.05）;E 组 NO 升高,ET-1 下降（P<0.05）,VEGF 和 bFGF 升高（P<0.05）;（3）.与 C组相比,D组NO、ET-1、VEGF、bFGF仍无明显差异（P>0.05）;E组1NO上升,ET-1 降低（P<0.05）,VEGF 和 bFGF 升高（P<0.05）;（4）.与 D 组相比,E 组NO 上升,ET-1 下降（P<0.05）,VEGF 和 bFGF 升高（P<0.05）;4.各组运动 6月前后NO、ET-1、VEGF、bFGF配对T检验:（1）.E组运动后,NO上升,ET-1下降,VEGF 和 bFGF 升高（P<0.05）（2）.A BCD 四组,运动前后 NO、ET-1、VEGF、bFGF均无明显改变（P>0.05）;结论:1.危险因素组与对照组相比NO下降,ET-1升高,冠心病危险因素可能引起血管内皮功能障碍。2稳定性冠心病各组与对照组比较,NO下降,ET-1升高,稳定性冠心病患者可能普遍存在血管内皮功能障碍情况。3.与非康复组比较,亚康复运动组NO、ET-1无明显差异,且运动前后亚康复运动组NO、ET-1无明显差异,未严格的康复运动不能改善血管内皮功能。4.与非康复运动组比较,亚康复运动组VEGF、bFGF无明显差异,且运动前后亚康复运动组VEGF、bFGF无明显差异,未严格的康复运动不能促进血管新生。5.与非康复运动组及亚康复运动组相比较,康复运动组NO升高,ET-1下降,且运动前后各组对比,康复运动组前后对照,运动后NO升高和ET-1下降,按运动处方进行严格康复运动可能改善冠心病患者血管内皮功能。6.与非康复运动组及亚康复运动组相比较,康复运动组VEGF和bFGF升高,运动前后各组对比,康复运动组前后对照,运动后VEGF和bFGF升高,按运动处方进行严格康复运动可能改善冠心病患者血管新生。
周远沛[5]（2014）在《碱性成纤维细胞生长因子对LASIK术后角膜神经修复和角膜知觉恢复的影响》文中进行了进一步梳理背景和目的准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK）拥有良好的安全性、有效性、可预测性和稳定性，现已成为角膜屈光手术的主流术式，被广泛应用于矫正近视、远视、散光、老视等。但是角膜瓣制作和激光消融损伤了完整的角膜神经纤维，角膜知觉的敏感性也随之下降，瞬目反应和泪液分泌减少，术后干眼发生率较高，影响患者术后视觉质量。因此，角膜神经的修复对术后干眼症状的缓解至关重要。角膜神经属于外周神经，损伤后具有再生能力，但恢复时间较长。有研究表明碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblastgrowth factor,bFGF）不仅能促进角膜上皮生长，促使增生的成纤维细胞和胶原纤维规则排列，利于角膜损伤后修复；还可剌激Schwann细胞增生和神经轴突再生，促进外周神经修复。目前关于bFGF对角膜神经修复作用的研究鲜有报道。本研究通过与玻璃酸钠滴眼液对比观察，评估bFGF在LASIK术后对角膜神经修复和角膜知觉恢复的作用。方法2013年1月7月在我院拟接受LASIK手术患者，随机选入试验组（treatmentgroup,TG）和对照组（control group,CG）进行临床对比观察，排除未严格执行术后随访观察者后，TG组20例（40眼），CG组18例（36眼）纳入统计。从术后第1日起，TG组应用bFGF滴眼液和眼用凝胶（贝复舒，珠海亿胜），给药方法为白天使用bFGF滴眼液2次，中午和晚上睡前各使用bFGF眼用凝胶1次，滴入结膜囊内；CG组应用玻璃酸钠滴眼液（爱丽，参天制药），4次天，滴入结膜囊内，两组均连续给药3个月。所有入选患者均在术前、术后1周、1个月、3个月、6个月进行裸眼视力（uncorrected visual acurity, UCVA）、电脑验光、主觉验光、最佳矫正视力（best corrected visual acuity，BSCVA）、角膜地形图、眼压、裂隙灯下眼前节检查、眼科A/B超、三面镜眼底检查、角膜知觉、共焦激光角膜显微镜等检查，对比两组术后各时间点UCVA、角膜中央知觉和角膜中央上皮下神经纤维恢复情况。结果所有入选患者两组间一般资料比较差异均无统计学意义（Pall>0.05）。UCVA：术前及术后各时间点两组间UCVA比较差异均无统计学意义（Pall>0.05），术后6个月时两组UCVA均≥5.0；角膜知觉：术前、术后1周、1个月、3个月、6个月时角膜知觉TG组为59.50±1.53、13.67±5.71、21.67±5.77、31.17±7.51、51.33±4.54， CG组为59.17±1.90、13.50±4.76、19.83±4.64、25.83±11.94、45.83±7.78，术前、术后1周和1个月时两组比较差异均无统计学意义（P=0.133、0.087、0.094），术后3个月、6个月时TG组优于CG组（P=0.005、0.018），术后6个月时TG组角膜知觉接近术前水平；角膜中央上皮下神经纤维密度：术前、术后1周、1个月、3个月、6个月时角膜神经密度TG组为（8508.27±2875.23）μm/mm2、（331.07±410.81）μm/mm2、（531.53±516.87）μm/mm2、（1924.73±1160.27）μm/mm2、（4284.07±2372.23）μm/mm2，CG组为（8269.60±2700.97）μm/mm2、（319.53±509.17）μm/mm2、（486.20±611.48）μm/mm2、（952.87±717.92）μm/mm2、（2062.87±2417.16） μm/mm2，术前、术后1周和1个月时两组比较差异均无统计学意义（P=0.260、0.801、0.072），术后3个月、6个月时TG组角膜神经密度高于CG组（P=0.033、0.000），术后6个月时两组角膜神经密度仍明显低于术前。结论1. bFGF和玻璃酸钠滴眼液对LASIK术后裸眼视力的恢复作用相似；2. bFGF对LASIK术后角膜神经修复和角膜知觉恢复具有促进作用；3. LASIK术后短期内应用低浓度、小剂量的bFGF安全有效。
葛静[6]（2013）在《bFGF在宫腔粘连患者子宫内膜中的表达及意义》文中进行了进一步梳理目的：研究碱性成纤维细胞因子（bFGF）蛋白及基因在宫腔粘连患者子宫内膜的表达情况,初步研究其在宫腔粘连中的作用。方法：采用免疫组织化学法（IHC）及半定量逆转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）,检测60例宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜及30例不孕症患者正常子宫内膜组织中bFGF蛋白及基因的表达,并对宫腔粘连患者bFGF蛋白及基因的表达情况与宫腔粘连程度进行统计学分析。结果：1.免疫组织化学检测结果：bFGF蛋白在子宫内膜腺体及间质均有表达,IUA组的表达高于非IUA组（P<0.05）；且bFGF蛋白在重度IUA组的表达高于中度IUA组,中度IUA组的表达高于轻度IUA组（P<0.05）。2.半定量逆转录-聚合酶链反应法检测结果：bFGF mRNA在IUA组的表达高于非IUA组（P<0.05）；且其在重度IUA组的表达高于中度IUA组,中度IUA组的表达高于轻度IUA（P<0.05）,与免疫组织化学检测结果相符。结论：bFGF在宫腔粘连患者子宫内膜中表达明显增强,提示bFGF可能与宫腔粘连的发生有关;bFGF随着宫腔粘连程度的加重,表达逐渐增加,提示bFGF可能与宫腔粘连的发展相关。
毛小荣[7]（2011）在《bFGF在肝纤维化中的研究进展》文中研究表明肝纤维化是慢性肝病共有的病理改变,肝星状细胞（HSC）激活分泌大量的细胞外基质（ECM）沉积在肝内引起肝纤维化。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是从牛脑垂体中分离纯化而来,能促进多种细胞产生ECM,导致肝纤维化形成。
林金杏[8]（2011）在《局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究》文中研究说明目前,人们的消费和市场走向迫使家禽业在蛋禽育种时,选留具有高繁殖性能的个体,而母禽的繁殖性能特别是产蛋率的高低主要取决于卵泡的发育状况。因此,家禽卵泡发育的研究成为了解禽类繁殖机能调控和提高家禽产蛋性能的理论基础。此外,家禽卵泡以其独特的特征优势成为研究卵巢和卵泡发育理想的生物学模型。大量的研究表明,家禽卵泡的生长发育和成熟是在一系列激素和生长因子的精确调控下进行。本实验以鸡为研究对象,一方面研究了鸡卵巢发育过程中一系列形态变化,另一方面研究了表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）、干细胞因子（stem cell factor, SCF）及Ghrelin对产蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞和膜细胞及18日胚龄鸡胚卵巢生殖细胞生长发育的调控及其机制,为提高家禽繁殖性能提供理论依据。1.产蛋鸡卵泡发育的组织学研究家禽卵泡发育是一个复杂的生理过程,伴随着形态结构的变化。组织结构决定其生理功能,因此,卵泡发育形态结构的研究有助于家禽卵泡发育调控机理的研究。本实验通过组织学方法研究鸡卵泡发生发育过程中的形态学变化。结果表明：孵化至第6天,原始生殖细胞已经迁移到生殖嵴,并与生殖嵴共同形成未分化的性腺；孵化至第9天,性腺已经分化,卵巢特征性结构开始出现,胚胎后期卵巢皮质内卵母细胞聚集成簇。原始卵泡的发育在出生以后开始启动,性成熟母鸡的卵泡呈等级发育,颗粒细胞和膜细胞在形态和增殖特性上具有等级阶段特异性。以上结果表明,家禽卵泡发育是一个以形态变化为特征的生长过程,由卵母细胞的成熟和卵泡细胞的生长发育两部分构成。2.表皮生长因子对鸡等级前卵泡发育的影响家禽卵巢卵泡的选择受内/自/旁分泌因子的影响,由复杂的循环激素和局部因子综合调控。促卵泡素（FSH）和EGF在家禽卵泡发育过程中起决定性作用,具有代表性意义,两者作用的机制及其互作方式值得深入研究。本实验旨在研究EGF对产蛋鸡等级前卵泡发育的调节作用。EGF及其受体（EGFR）mRNA在鸡等级前卵泡高度表达,包括大白卵泡（LWF）和小黄卵泡（SYF）,然后随着卵泡的发育逐渐降低。体外悬浮培养的全卵泡经EGF及FSH单独或联合处理24 h后,LWF和SYF的颗粒层和膜层厚度及颗粒细胞密度均显着增加（P<0.05）,且以EGF与FSH联合处理组最为显着。EGF和FSH的处理可以提高卵泡中颗粒细胞的有丝分裂率。体外培养的颗粒细胞经0.1～100 ng/ml的EGF或FSH单独处理24 h后出现增殖现象,且增殖强度与剂量正相关。EGF或FSH可以显着增加颗粒细胞核增殖抗原（PCNA）表达和抑制细胞凋亡（P<0.05）。EGF可以显着增加EGFR、FSH受体（FSHR）和细胞周期调控蛋白（CCND1/CDK6和CCNE1/CDK2） mRNA的表达（P<0.05）,却明显下调促黄体激素受体（LHR） mRNA的表达（P<0.05）。EGF或FSH引起的颗粒细胞数目和PCNA-LI升高及凋亡发生率降低等效应均被EGFR抑制剂AG1478所拮抗。以上研究结果表明,EGFIEGFR在鸡卵泡发育过程中表达具有阶段特异性；EGF通过促进细胞有丝分裂、抑制细胞凋亡、调控细胞周期及协同FSH而促进鸡等级前卵泡颗粒细胞的增殖,从而调节等级前卵泡的发育。3.碱性成纤维细胞生长因子对鸡胚卵巢和等级前卵泡发育的影响bFGF是一种局部自分泌或旁分泌的有丝裂原,参与调节组织发育和细胞功能的不同过程。本实验首先观察bFGF的受体（FGFR1）在鸡胚卵巢和成年产蛋鸡等级前小黄卵泡中的表达情况,然后观察bFGF对鸡胚卵巢生殖细胞和等级前卵泡颗粒细胞发育的影响。结果表明,FGFR1在]8日胚龄鸡卵巢的皮质和髓质的细胞中广泛表达,在鸡小黄卵泡的颗粒层中强表达。在体外,bFGF（0.1-100ng/ml）对鸡胚卵巢生殖细胞和小黄卵泡颗粒细胞呈剂量依赖方式增殖,但这种增殖作用被FGFR1抑制剂（SU5402）显着阻断；蛋白激酶C（PKC）激活剂佛波酯（PMA）能显着增强bFGF （10 ng/ml）的促上述细胞增殖作用（P<0.05）,PKC抑制剂H7却可以显着抑制此作用（P<0.05）；而蛋白激酶A （PKA）激活剂佛司可林（FRSK）和PKA抑制剂H89对此作用没有显着影响。此外,向鸡胚内注射bFGF后对细胞计数的结果进一步证实了bFGF可以促进鸡胚卵巢生殖细胞的增殖。经bFGF （10 ng/ml）处理后,鸡等级前小黄卵泡颗粒细胞细胞周期调控基因CCND1ICDK6和CCNE1ICDK2 mRNA丰度显着升高,而H7可显着抑制bFGF上调以上四种基因表达的作用。bFGF通过与细胞膜表面受体FGFR1结合,启动PKC信号转导途径,调控细胞周期,发挥促细胞增殖作用,从而调节鸡胚卵巢生殖细胞和等级前卵泡的发育。4.干细胞因子对鸡等级前卵泡膜细胞增殖的影响SCF是最早发现的促进卵泡募集的旁分泌因子,在卵巢中,主要由颗粒细胞表达,被誉为“膜细胞的组织者”,参与膜细胞的募集和分化。本文通过体外细胞培养和免疫组化方法探讨SCF对鸡等级前卵泡膜细胞增殖作用及参与的信号转导途径。鸡小黄卵泡膜细胞在体外预培养16h后,经SCF（0.1～100ng/ml）处理24 h后膜细胞显着增殖（P<0.05）,其凋亡发生率亦被显着抑制,上述效应呈现出一定的剂量依赖性。SCF处理可以增加膜细胞c-Kit的表达,同时SCF的促增殖作用被c-Kit抗体所抑制。向培养体系中添加PKC信号转导途径的激活剂PMA或抑制剂H7后,SCF促膜细胞增殖作用将分别被显着增强或抑制。PKA信号转导途径激活剂FRSK和抑制剂H89对SCF的促膜细胞增殖作用无明显影响。以上结果表明,SCF通过与细胞表面c-Kit结合,在PKC信号转导途径参与下,发挥其促小黄卵泡膜细胞增殖的作用,从而调节等级前卵泡的发育。5. Ghrelin对鸡等级前卵泡发育的影响Ghrelin是一种主要由胃肠道分泌产生的多肽,具有促进生长激素分泌、促进摄食、参与能量代谢等多种生理作用。近年来研究表明,Ghrelin及其受体（GHSR）在卵巢组织中的表达并在卵泡发育中起调节作用。本实验旨在研究Ghrelin对产蛋鸡等级前卵泡发育的调节作用。首先通过RT-PCR法检测卵泡GHSR的表达情况,然后利用全卵泡培养和颗粒细胞单独培养模型结合组织学和免疫组化方法探讨了Ghrelin对鸡等级前卵泡形态和颗粒细胞增殖的影响及相关机制。结果表明,GHSR mRNA在颗粒层和膜层上均有表达,其表达量随着卵泡的发育先而逐渐上升,至LWF和SYF阶段升至最高,随后逐渐降低。悬浮培养的卵泡经100 ng/ml的Ghrelin处理24 h后,LWF和SYF的颗粒层和膜层厚度及颗粒细胞密度均显着增加（P<0.05）。鸡小黄卵泡的颗粒细胞在体外预培养12h后,用1-1000 ng/ml的Ghrelin处理24 h,细胞增殖效应呈现出剂量依赖性。颗粒细胞经100 ng/ml的Ghrelin处理后,PKA和PKC阳性率显着上升（P<0.05）；H89及H7能够显着抑制Ghrelin的促颗粒细胞增殖作用,而FRSK及PMA作用正好与之相反。同时,体外培养的颗粒细胞和悬浮培养卵泡的颗粒细胞中层粘连蛋白（LN）和缝隙连接蛋白43（C×43）的标记率显着提高（P<0.05）。上述结果提示,Ghrelin可通过PKA和PKC信号转导途径和提高LN和Cx43的表达以增强颗粒细胞连接功能,促进鸡等级前卵泡颗粒细胞的增殖,从而调节卵泡发育。总之,本实验通过形态学和免疫组化方法研究了产蛋鸡卵巢发育过程中卵泡形态学变化特点；通过将局部生长因子（EGF、bFGF和SCF）及Ghrelin作用于全卵泡或不同卵泡细胞体外培养,发现他们分别与各自的受体结合并通过蛋白激酶信号途径促进细胞增殖,揭示了上述卵巢局部性促生长因子对卵泡发育的调控作用及其机理。这些结果必将为阐明家禽卵泡发育和优势卵泡选择的调控机理及提高家禽繁殖性能奠定一定的理论基础。
马雷[9]（2010）在《bFGF基因修饰的MSCs细胞复合β-磷酸三钙修复骨缺损实验研究》文中提出目的：骨缺损畸形是颌面外科、骨科、整形外科临床常见病。颌骨缺损的修复问题一直是口腔颌面外科较难解决的问题,现常规的修复方法很多,但各有其优缺点。组织工程化骨是利用生物组织工程技术将种子细胞与支架材料复合,形成具有与自体骨结构功能相似的骨组织,它弥补了多种单一植骨材料的缺陷,结合了它们各自的优点,具有组织相容性好、骨诱导能力强、取材方便、可快速修复缺损等特性。用组织工程方法构建种子细胞、支架材料和生长因子复合的生物活性人工骨被认为是未来进行骨缺损修复和骨再造最有效的方法之一。通过人碱性成纤维生长因子（basic fibroblant growth factor, bFGF）转染以增加组织细胞bFGF的分泌量,提高bFGF蛋白在生物体骨缺损局部组织中的浓度,达到促进骨愈合的目的。但是,如何提高质粒对于靶组织的转染效率、寻求一种高效、简便的转染手段,如何缩短鉴定转染是否成功的时间,以及在基因转染促进骨愈合的过程中,一直未得到很好的阐明。本研究目的包括以下几个方面：1)建立稳定的、基因序列正确的、检测方便的、和GFP-慢病毒载体,并检测转染293-FT细胞的效率及转染后的生物学活性；2)获得骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells, BMSCs）,bFGF-慢病毒载体转染诱导第3代的犬BMSCs,了解该质粒转染犬骨髓间充质干细胞的效率及转染后的生物学活性；3)体内观察对比bFGF基因修饰rMSCs细胞活性的影响以及诱导异位成骨的情况,为构建更优化的骨组织工程种子细胞和组织工程化骨提供重要的实验基础。方法：1)bFGF基因真核表达载体的构建设计人bFGF基因引物,用Trizol法提取胎盘组织总RNA,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的方法扩增bFGF基因,连接至ViraPowerTM慢病毒载体系统,经Xho-Ⅰ, BamH-Ⅰ双酶切和测序并与Genebank中序列进行比较分析。2)bFGF基因遗传修饰的犬骨髓间充质干细胞的建立：①结合Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁传代筛选法相,分离培养犬骨髓间充质干细胞。②在脂质体转染剂Lipofectamine2000的介导下,bFGF-pLenti6/V5-D-TOPO表达质粒同包装质粒pLP1、pLP2、包膜质粒pLP/VSVG共转染293FT细胞株,收集bFGF-慢病毒上清转染诱导后第3代的犬BMSCs, Blasticidin压力筛选稳定表达株。③设计GFP基因引物,以GFP-PMSLV-Plazmid为—1—模板,采用PCR的方法扩增GFP基因,连接至pLenti6/V5-D-TOPO（?）表达质粒,GFP-慢病毒载体的构建及转染BMSCs过程同bFGF-慢病毒。RT-PCR方法检测bFGF mRNA水平的表达。④RT-PCR检测转染组细胞中目的基因mRNA表达情况,Western blot,细胞免疫化学检测各转染组细胞胞浆中目的蛋白表达情况；ELISA检测各各转染组细胞培养上清中目的蛋白的分泌情况。3)bFGF基因转染的rMSCs成骨活性的体内实验研究实验共分为4组进行：A、对照组（空白组）；B、p-磷酸三钙组；C、MSCs细胞复合β-磷酸三钙组；D、bFGF基因修饰rMSCs+β-磷酸三钙组；①在体外分别将rMSCs和bFGF基因修饰rMSCs接种于多孔支架材料磷酸三钙上。②将不同组细胞／材料复合物植入犬牙槽骨内。③每组分别于植入3月后取材,石蜡包埋,组织病理学切片,HE染色分析新骨形成情况；④术后4、8和12周进行X光片、4、8周CT摄片观察骨缺损变化、骨皮质及β-磷酸三钙降解情况。结果：1)RT-PCR自脑组织cDNA库中扩增出bFGF基因；成功将bFGF基因克隆入真核表达载体,构建了bFGF-pLenti6/V5-D-TOPO表达质粒,DNA测序证明,所克隆目的基因序列与Genebank收录一致。2)bFGF真核表达质粒转染了犬骨髓间充质干细胞后,经抗生素Blasticidin压力筛选获得了具有抗性的细胞克隆；GFP真核表达质粒转染了犬骨髓间充质干细胞48小时后,倒置荧光显微镜下显示转染后的犬骨髓间充质干细胞内可见绿色荧光蛋白分布于整个细胞,呈胞浆分布。培养第八代,转染的细胞依然存活,绿色荧光蛋白持续表达；RT-PCR结果显示抗性细胞克隆中均有大量目的基因bFGFmRNA转录,ELISA检测培养上清中目的蛋白表达阳性,Western blot结果显示胞浆中有目的蛋白的表达。3)犬牙槽骨缺损异位诱导成骨实验显示：基因修饰MSCs组与单纯MSCs对照组相比,材料降解和替代的速度明显提高,有较多的新骨形成；实验动物牙槽骨骨缺损愈合过程的X线4周、8周、12周观察显示及4、12周的CT扫描,bFGF基因修饰rMSCs+β-磷酸三钙组骨缺损在骨皮质的连续性、p-磷酸三钙的降解速度及骨缺损愈合的大小优于MSCs细胞复合p-磷酸三钙组,p-磷酸三钙组明显优于对照组,bFGF修饰的MSCs组在各阶段均有比其他组更明显的材料替换速度。结论：1)成功构建了携带人bFGF和GFP基因的真核表达载体。2)含有人bFGF基因序列可以通过脂质体介导有效地导入犬MSCs中并得到表达。3)人bFGF基因对犬骨髓间充质干细胞修饰转染并能在骨髓间充质干细胞中翻译、表达产生bFGF基因。4)bFGF能够启动或诱导MSCs成骨方向分化和能够促进新生血管形成,对rMSCs进行修饰后,能够在犬牙槽骨内有效地促进异位骨的形成。
张庆[10]（2009）在《乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫颈癌浸润、转移及预后的关系》文中认为背景与目的子宫颈癌是严重威胁女性健康的妇科三大恶性肿瘤之一,流行病学调查显示其发生率有上升趋势,在发展中国家子宫颈癌的发病率列女性恶性肿瘤第一位。子宫颈癌的浸润、转移是临床评估宫颈癌预后的重要因素,除了应用临床手术病理分期对患者预后进行评估外,一些分子指标在子宫颈癌的发生及临床预后评估中起着越来越重要的作用。乙酰肝素酶（Hpa）是一种葡萄糖醛酸内切酶,能够裂解细胞外基质（ECM）和细胞基底膜（BM）中乙酰硫酸肝素盐蛋白聚糖（HS）,对肿瘤细胞的侵袭和转移具有重要作用。有研究发现乙酰肝素酶（HPa）可能参与了宫颈癌肿瘤血管生成和癌症浸润、转移。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质。它是多种细胞的强促有丝分裂因子,能促进细胞增殖和分化,促进DNA合成及血管形成。直接或间接参与多种生理病理反应,如伤口愈合、胚胎的早期发育、神经系统分化与维持、肿瘤的发生等。两者在妇科恶性肿瘤的浸润及转移机制上起重要作用,可作为患者预后评价指标。本研究拟用免疫组化技术观察HPa、bFGF在宫颈癌中的表达,探讨HPa、bFGF与子宫颈癌浸润、转移及预后的关系。评估其临床应用前景。材料与方法选择本院1993年1月-2003年1月行手术治疗并且有完整随访资料的子宫颈癌患者50例的石蜡包埋标本。根据国际妇产科联盟2000年（FIGO,2000）的临床分期标准：Ⅰ期30例Ⅱ期15例；ⅢA期5例；根据WHO病理分化程度分级,高分化21例,中低分化29例。因其他妇科疾病而手术切除的子宫颈标本25例作为对照组,其中正常子宫颈15例,宫颈上皮内瘤变10例。采用免疫组织化学染色方法检测50例临床随访资料完整的子宫颈癌标本中HPa、bFGF的表达情况,确定染色强度,计算阳性率。15例正常子宫颈和10例宫颈上皮内瘤变作为对照,用Kaplan-Meier曲线、F检验、t检验及Spearman秩相关进行分析。结果在正常宫颈鳞状上皮细胞中HPa免疫染色为阴性。而在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌癌组织中HPa免疫染色呈阳性,表达为黄色和棕黄色颗粒,部位主要在病变细胞的胞浆或胞膜,偶见间质着色。按照病变的程度,HPa在正常子宫颈、宫颈上皮内瘤变到子宫颈癌三种组织中的表达呈现逐渐增加的趋势,有统计学差异（PHPa=0.015, PbFGF=0.025,）。Hpa在子宫颈癌中的阳性表达率随临床分期的增加而增加。在有淋巴结转移、脉管浸润的病例中Hpa的阳性率显着高于无淋巴结转移组（P<0.05）。阳性患者生存率低于阴性者（P=0.0013）。Hpa在子宫颈癌中的阳性表达率与肿瘤细胞分化程度无相关性（P>0.05）。bFGF在各种子宫颈组织中主要免疫染色部位为细胞浆,偶有细胞膜着色,在正常子宫颈鳞状上皮细胞中bFGF表达呈阴性或弱阳性。在子宫颈癌组织中为强表达。bFGF在正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌癌组织中表达逐渐增加（P=0.025）,与临床分期、脉管浸润及淋巴转移显着相关,并且与子宫颈癌病理分化程度相关。阳性患者生存率低于阴性者（P=0.0053）。子宫颈癌标本中HPa阳性35例,bFGF阳性37例,其对应患者生存率均低于HPa bFGF表达阴性者（PHPa=0.0013, PbFGF=0.0053,）.HPa与bFGF表达呈正相关（相关系数r=0.408,P=0.003）；结论1.本项研究存证实了HPa、bFGF在子宫颈癌中的异常表达。2.HPa在正常子宫颈、宫颈上皮内瘤变到子宫颈癌三种组织中的表达呈现逐渐增加的趋势,Hpa在子宫颈癌中的阳性表达率随临床分期的增加而增加。在有淋巴结转移、脉管浸润的病例中Hpa的阳性率显着高于无淋巴结转移组（P<0.05）。阳性患者生存率低于阴性者（P=0.0013）。3. bFGF在正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌癌组织中表达逐渐增加（P=0.025）,与临床分期、脉管浸润及淋巴转移显着相关,并且与子宫颈癌病理分化程度相关。阳性患者生存率低于阴性者(P=0.005二者的相互作用促进了子宫颈癌的发生、浸润和转移。
二、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在内耳中的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在内耳中的研究进展（论文提纲范文）
（1）细胞因子bFGF和LIF对雏鸡原始卵泡发育的调节作用及其机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 禽类卵泡生长情况和概述 |
| 1.1.1 鸡胚卵巢发育概述 |
| 1.1.2 鸡原始卵泡发生概述 |
| 1.1.3 鸡原始卵泡发育激活概述 |
| 1.1.3.1 PTEN/PI3K/AKT/FOXO3信号通路 |
| 1.1.3.2 抗缪勒氏管激素 |
| 1.2 细胞因子对早期卵泡发育的调控 |
| 1.2.1 成纤维细胞生长因子家族 |
| 1.2.2 白血病抑制因子 |
| 1.2.3 血管内皮生长因子 |
| 1.2.4 骨形态发生蛋白家族 |
| 1.2.4.1 BMPs |
| 1.2.4.2 GDF9 |
| 1.2.5 胰岛素样生长因子家族 |
| 1.2.6 神经生长因子 |
| 1.2.7 激活素、抑制素和卵泡抑素 |
| 1.3 激素对早期卵泡发育的调控 |
| 1.3.1 性腺激素 |
| 1.3.2 促性腺激素 |
| 1.3.3 生长激素 |
| 1.4 miRNA在早期卵巢发育中的作用 |
| 1.4.1 miRNA的作用方式 |
| 1.4.2 miRNA对雌性生殖的作用 |
| 1.5 lncRNA在早期卵巢发育中的作用 |
| 1.5.1 lncRNA的作用方式 |
| 1.5.2 lncRNA对雌性生殖的作用 |
| 1.6 本研究的目的和内容 |
| 1.6.1 研究目的和意义 |
| 1.6.2 研究目标和内容 |
| 1.6.3 技术路线 |
| 第二章 雏鸡卵巢早期卵泡发育中miRNA表达的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要器材 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 卵巢的获取 |
| 2.2.5 RNA的提取 |
| 2.2.6 RNA质量及浓度的检测 |
| 2.2.7 文库的构建及质量的检测 |
| 2.2.8 cDNA的合成 |
| 2.2.9 qRT-PCR |
| 2.2.10 测序数据的处理分析 |
| 2.2.11 差异表达基因的筛选 |
| 2.2.12 差异表达基因的聚类分析及富集分析 |
| 2.2.13 差异表达基因的靶基因预测 |
| 2.2.14 数据的处理分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 检测结果总表 |
| 2.3.2 RNA质量的鉴定 |
| 2.3.3 测序数据的质量评估及过滤 |
| 2.3.4 sRNA长度的筛选 |
| 2.3.5 与参考序列的比较 |
| 2.3.6 差异表达miRNA的筛选 |
| 2.3.7 RNA-seq结果的验证 |
| 2.3.8 不同发育阶段卵巢中差异表达miRNA的比较 |
| 2.3.9 miRNA及其主要靶基因的时间表达变化 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 雏鸡卵巢早期卵泡发育中lncRNA表达的变化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要器材 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 卵巢的获取 |
| 3.2.5 RNA的提取 |
| 3.2.6 RNA质量及浓度的检测 |
| 3.2.7 文库的构建及质量的检测 |
| 3.2.8 cDNA的合成 |
| 3.2.9 qRT-PCR |
| 3.2.10 测序数据的处理分析 |
| 3.2.11 差异表达基因的筛选 |
| 3.2.12 差异表达基因的聚类分析及富集分析 |
| 3.2.13 差异表达基因的靶基因预测 |
| 3.2.14 数据的处理分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 测序数据的质量评估与比较 |
| 3.3.2 差异表达lncRNA的筛选 |
| 3.3.3 RNA-seq结果的验证 |
| 3.3.4 lncRNA共定位基因的富集分析 |
| 3.3.5 lncRNA共表达基因的富集分析 |
| 3.3.6 不同发育阶段卵巢中差异表达lncRNA的比较 |
| 3.3.7 相关mRNA的差异表达 |
| 3.3.8 lncRNA及其主要靶基因的时间表达变化 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 bFGF对雏鸡原始卵泡发育的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要器材 |
| 4.2.3 主要试剂及配制 |
| 4.2.4 卵巢的获取 |
| 4.2.5 卵巢组织的培养和药物处理 |
| 4.2.6 制片及HE染色 |
| 4.2.7 免疫组化 |
| 4.2.8 RNA的提取 |
| 4.2.9 cDNA的合成 |
| 4.2.10 普通PCR及qPCR |
| 4.2.11 BrdU实验 |
| 4.2.12 TUNEL染色 |
| 4.2.13 Westen blot分析 |
| 4.2.14 数据的处理分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 FGFR1在雏鸡卵巢中定位及其表达的变化 |
| 4.3.2 bFGF在雏鸡卵巢中的定位 |
| 4.3.3 bFGF体外处理剂量的筛选 |
| 4.3.4 bFGF对卵泡细胞增殖的影响 |
| 4.3.5 bFGF对卵泡细胞凋亡的影响 |
| 4.3.6 bFGF对原始卵泡激活相关基因表达的影响 |
| 4.3.7 bFGF对原始卵泡激活的影响 |
| 4.3.8 FSHR在雏鸡卵巢中的定位 |
| 4.3.9 bFGF和FSH联合处理对卵泡细胞增殖和凋亡的影响 |
| 4.3.10 FSHR特异性证明 |
| 4.3.11 bFGF和FSH联合处理对细胞增殖相关信号转导蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 LIF对雏鸡原始卵泡发育的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要器材 |
| 5.2.3 主要试剂及配制 |
| 5.2.4 卵巢的获取 |
| 5.2.5 卵巢组织的培养和药物处理 |
| 5.2.6 制片及HE染色 |
| 5.2.7 免疫组化 |
| 5.2.8 BrdU实验 |
| 5.2.9 TUNEL染色 |
| 5.2.10 Western blot分析 |
| 5.2.11 透射电镜和细胞超微结构的观察 |
| 5.2.12 数据的处理分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 LIF在雏鸡卵巢中定位及其表达的变化 |
| 5.3.2 LIFR在雏鸡卵巢中定位及其表达的变化 |
| 5.3.3 LIF体外处理剂量的筛选 |
| 5.3.4 LIF对卵泡细胞增殖的影响 |
| 5.3.5 LIF对卵泡细胞凋亡的影响 |
| 5.3.6 LIF对体外培养雏鸡卵巢的缝隙连接的影响 |
| 5.3.7 LIF对原始卵泡激活的影响 |
| 5.3.8 LIF和bFGF联合处理对卵泡细胞发育以及相关信号蛋白表达的影响 |
| 5.3.9 卵泡发育中LIF和Wnt/β-catenin信号通路的交互作用 |
| 5.3.10 卵泡发育中bFGF和Wnt/β-catenin信号通路的交互作用 |
| 5.3.11 LIF体内处理剂量的筛选及其对雏鸡卵巢中增殖相关蛋白表达的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 提示和创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）光动力抗菌化学疗法在烧伤感染治疗中的研究与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 光动力抗菌化学疗法研究进展 |
| 1.1.1 细菌感染现状 |
| 1.1.2 光动力抗菌化学疗法 |
| 1.1.3 PACT的作用机制与作用位点 |
| 1.1.4 PACT对革兰氏阴性菌与革兰氏阳性菌的杀伤 |
| 1.1.5 PACT损伤细菌生物膜 |
| 1.1.6 PACT在体治疗 |
| 1.1.7 PACT与细菌耐药性 |
| 1.1.8 PACT可能的副作用 |
| 1.2 基于生物材料的PACT |
| 1.2.1 PACT中PS的纳米修饰 |
| 1.2.2 PACT与水凝胶材料 |
| 1.3 小结与展望 |
| 1.4 本研究的理论依据、研究内容、目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二章 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus体外抗菌效果与机制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验仪器与试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 DVDMS光照处理后产生的自由基类型 |
| 2.3.2 细菌悬液制备 |
| 2.3.3 细菌浓度标准曲线 |
| 2.3.4 S.aureus/MDR-S.aureus对DVDMS的摄取 |
| 2.3.5 单独DVDMS与单独光照对S.aureus/MDR-S.aureus的毒性 |
| 2.3.6 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤 |
| 2.3.7 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞膜通透性的影响 |
| 2.3.8 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞壁的损伤 |
| 2.3.9 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus生物膜结构的损伤 |
| 2.3.10 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus胞内活性氧水平的影响 |
| 2.3.11 RNA-seq分析DVDMS-PACT处理MDR-S.aureus的分子机制 |
| 2.3.12 数据分析 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 DVDMS光照处理后的自由基类型 |
| 2.4.2 S.aureus/MDR-S.aureus细菌浓度标准曲线 |
| 2.4.3 S.aureus/MDR-S. aureus对DVDMS的摄取 |
| 2.4.4 单独DVDMS与单独光照对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤作用 |
| 2.4.5 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤效应研究 |
| 2.4.6 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞膜通透性的影响 |
| 2.4.7 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞壁的损伤 |
| 2.4.8 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus生物膜的损伤 |
| 2.4.9 DVDMS-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus胞内活性氧的影响 |
| 2.4.10 RNA-seq分析DVDMS-PACT杀伤MDR-S.aureus过程中相关差异基因 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 DVDMS-PACT对小鼠烧伤感染的治疗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验仪器与试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 深二度烧伤感染模型构建 |
| 3.3.2 DVDMS-PACT治疗烧伤感染处理方法 |
| 3.3.3 烧伤创面愈合情况 |
| 3.3.4 创面细菌检测 |
| 3.3.5 烧伤感染创面TNF-α、IL-6、MDA、bFGF、VEGF、TGF-β1、Hyp因子检测 |
| 3.3.6 安全性评估 |
| 3.3.7 数据分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 烧伤感染模型的构建 |
| 3.4.2 创面愈合率 |
| 3.4.3 皮肤组织细菌定植量 |
| 3.4.4 烧伤感染创面TNF-α、IL-6、MDA、bFGF、VEGF、TGF-β1、Hyp因子检测 |
| 3.4.5 安全性评估 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 智能响应性纳米复合水凝胶(CSDP)的构建与表征 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验仪器与试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞培养 |
| 4.3.2 PLGA-bFGF纳米颗粒的构建及其功能分析 |
| 4.3.3 CSDP水凝胶的构建及表征 |
| 4.3.4 CSDP水凝胶生物发光成像 |
| 4.3.5 CSDP水凝胶紫外-可见吸收光谱及荧光光谱 |
| 4.3.6 CSDP水凝胶单线态氧产率 |
| 4.3.7 数据分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 PLGA-bFGF纳米颗粒理化属性表征 |
| 4.4.2 CSDP水凝胶理化属性表征 |
| 4.4.3 CSDP水凝胶生物发光成像 |
| 4.4.4 CSDP水凝胶紫外-可见吸收光谱及荧光光谱 |
| 4.4.5 CSDP水凝胶单线态氧产率 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 CSDP水凝胶联合PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤效应研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验仪器与试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 细菌悬液制备 |
| 5.3.2 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤作用 |
| 5.3.3 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞膜通透性的影响 |
| 5.3.4 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus及其MDR-S.aureus生物膜的损伤 |
| 5.3.5 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus胞内活性氧水平的影响 |
| 5.3.6 数据分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus的杀伤 |
| 5.4.2 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus细胞膜通透性 |
| 5.4.3 CSDP水凝胶-PACT对S.aureus/MDR-S.aureus生物膜的破坏 |
| 5.4.4 活性氧在CSDP水凝胶-PACT杀伤S.aureus/MDR-S.aureus的作用 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 CSDP-PACT对小鼠烧伤感染的治疗研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验仪器与试剂 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 CSDP-PACT对烧伤感染的治疗 |
| 6.3.2 烧伤创面观察 |
| 6.3.3 烧伤感染创面TNF-α、IL-6、MDA、bFGF、VEGF、TGF-β1、Hyp因子检测 |
| 6.3.4 烧伤感染处皮肤切片 |
| 6.3.5 安全性评估 |
| 6.3.6 数据分析 |
| 6.4 结果与分析 |
| 6.4.1 伤口面积收缩率 |
| 6.4.2 皮肤组织细菌定植量 |
| 6.4.3 烧伤感染创面TNF-α、IL-6、MDA、bFGF、VEGF、TGF-β1、Hyp因子检测 |
| 6.4.4 烧伤感染处皮肤切片 |
| 6.4.5 安全性评估 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
（3）肺内皮细胞靶向肽修饰的成纤维细胞生长因子对放射性肺损伤的修复（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 LET-bFGF重组蛋白的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 实验讨论 |
| 2.6 结论 |
| 第三章 LET-bFGF重组蛋白的肺靶向验证 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 结论 |
| 第四章 LET-bFGF重组蛋白对放射性肺损伤大鼠模型的修复作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 实验讨论 |
| 4.6 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 放射性肺损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表论文与研究成果 |
| 致谢 |
（4）运动康复对稳定性冠心病血管新生及内皮功能的影响（论文提纲范文）
| 英文缩略语 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表论文 |
| 致谢 |
（5）碱性成纤维细胞生长因子对LASIK术后角膜神经修复和角膜知觉恢复的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 1 一般资料 |
| 2 方法 |
| 结果 |
| 1 术后一般情况 |
| 2 术前及术后各时间点裸眼视力 |
| 3 术前及术后各时间点角膜中央知觉 |
| 4 术前及术后各时间点角膜中央上皮下神经 |
| 讨论 |
| 视力 |
| 角膜神经和角膜知觉 |
| LASIK 术后角膜神经和角膜知觉的变化 |
| bFGF 对 LASIK 术后角膜修复的作用 |
| bFGF 的副作用 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 研究生期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）bFGF在宫腔粘连患者子宫内膜中的表达及意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 纳入标准 |
| 2.1.2 诊断标准 |
| 2.2 标本采集与处理 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.3.1 免疫组织化学所用主要仪器 |
| 2.3.2 RT-PCR所用主要仪器 |
| 2.4 主要试剂 |
| 2.4.1 免疫组化所用的主要试剂 |
| 2.4.2 RT-PCR所用主要试剂 |
| 2.5 试验方法与步骤 |
| 2.5.1 免疫组织化学法(IHC)检测bFGF蛋白的表达 |
| 2.5.2 半定量逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测bFGF mRNA的表达 |
| 2.6 结果判断 |
| 2.6.1 免疫组化染色结果判断 |
| 2.6.2 RT-PCT结果判断 |
| 2.7 结果分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 免疫组织化学染色结果 |
| 3.1.1 bFGF蛋白在宫腔粘连患者子宫内膜及正常子宫内膜的表达 |
| 3.1.2 bFGF蛋白在轻、中、重度宫腔粘连患者子宫内膜的表达 |
| 3.2 RT-PCR结果 |
| 3.2.1 bFGF mRNA在宫腔粘连患者子宫内膜及正常子宫内膜的表达 |
| 3.2.2 bFGF mRNA在轻、中、重度宫腔粘连患者子宫内膜的表达 |
| 附图 |
| 4、讨论 |
| 4.1 bFGF的生物特性 |
| 4.2 bFGF在纤维化疾病中的表达及意义 |
| 4.3 bFGF在宫腔粘连中的表达及意义 |
| 5 结论 |
| 6 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
| 致谢 |
（8）局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 家禽卵泡发育过程中形态学的变化 |
| 1.1 胚胎期家禽卵巢形态的特征 |
| 1.2 性成熟前家禽卵泡发育的形态学变化 |
| 1.3 性成熟家禽卵泡发育的形态结构 |
| 1.4 家禽闭锁卵泡的形态特征 |
| 1.5 禽蛋形成和产出 |
| 1.6 小结 |
| 第二节 卵泡内细胞在卵泡发育中的作用 |
| 2.1 卵母细胞通过卵泡细胞转运物质和能量 |
| 2.2 颗粒细胞在卵泡发育中的调控作用 |
| 2.3 膜细胞在卵泡发育中的调控作用 |
| 2.4 颗粒细胞对卵泡闭锁的影响 |
| 2.5 卵母细胞对卵泡细胞发育的调控作用 |
| 第三节 生长因子对家禽卵泡发育的调控作用 |
| 3.1 表皮生长因子家族 |
| 3.2 成纤维细胞生长因子家族 |
| 3.3 胰岛素样生长因子家族 |
| 3.4 白细胞介素家族 |
| 3.5 转移生长因子β家族 |
| 3.6 肿瘤坏死因子家族 |
| 第四节 Ghrelin在卵泡发育中的调控作用 |
| 4.1 Ghrelin及其受体的结构特征 |
| 4.2 Ghrelin在卵巢组织中的表达 |
| 4.3 Ghrelin在卵泡发育中的调节作用 |
| 第五节 本研究的目的和内容 |
| 5.1 研究的目的和意义 |
| 5.2 研究的目标和内容 |
| 第二章 产蛋鸡卵泡发育的组织学研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要器材 |
| 2.3 主要试剂及配制 |
| 2.4 样品采集 |
| 2.5 石蜡切片制作和形态学观察 |
| 2.6 SSEA-1免疫组织化学染色 |
| 2.7 c-Kit免疫组织化学染色 |
| 2.8 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 胚胎期鸡卵泡发育的形态学特征 |
| 3.2 出生后鸡卵泡发育的形态学特征 |
| 3.3 性成熟母鸡各级卵泡的形态学特征 |
| 3.4 鸡闭锁卵泡的形态学特征 |
| 4 讨论 |
| 第三章 表皮生长因子对鸡等级前卵泡发育的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要器材 |
| 2.3 主要试剂及配制 |
| 2.4 样品采集 |
| 2.5 RNA提取和RT-PCR |
| 2.6 鸡等级前卵泡培养和药物处理 |
| 2.7 卵泡形态学观察 |
| 2.8 Giemsa染色检测颗粒细胞的分裂指数 |
| 2.9 鸡等级前卵泡颗粒细胞的分离 |
| 2.10 鸡等级前卵泡颗粒细胞的培养和处理 |
| 2.11 PCNA免疫细胞化学染色 |
| 2.12 TUNEL检测凋亡细胞 |
| 2.13 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡卵泡发育中EGF和EGFR mRNA表达的变化 |
| 3.2 EGF处理后鸡等级前卵泡颗粒层和膜层形态的变化 |
| 3.3 EGF对鸡等级前卵泡颗粒细胞分裂指数的影响 |
| 3.4 EGF对体外鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响 |
| 3.5 EGF对细胞周期调控基因mRNA表达的影响 |
| 3.6 EGF对EGFR和促性腺激素受体表达的影响 |
| 3.7 EGF对FSH促鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响 |
| 3.8 AG1478对EGF和FSH促细胞增殖的抑制作用 |
| 4 讨论 |
| 第四章 碱性成纤维细胞生长因子对鸡胚卵巢和等级前卵泡发育的影响 |
| 第一节 碱性成纤维细胞生长因子对鸡胚卵巢发育的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要器材 |
| 2.3 主要试剂及配制 |
| 2.4 FGFR1原位杂交 |
| 2.5 鸡胚卵巢生殖细胞的分离 |
| 2.6 鸡胚卵巢生殖细胞培养和处理 |
| 2.7 c-Kit免疫细胞化学染色 |
| 2.8 bFGF胚胎内注射实验 |
| 2.9 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡胚卵巢中FGFR1的表达情况 |
| 3.2 体外bFGF对鸡胚卵巢细胞的促增殖作用 |
| 3.3 bFGF促鸡胚卵巢生殖细胞增殖的信号转导途径研究 |
| 3.4 胚内注射bFGF对鸡胚卵巢细胞增殖的影响 |
| 3.5 胚内注射bFGF对鸡胚生殖细胞减数分裂的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二节 碱性成纤维细胞生长因子对鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物和主要器材 |
| 2.2 主要试剂及配制 |
| 2.3 鸡等级前卵泡颗粒细胞的分离 |
| 2.4 鸡小黄卵泡石蜡切片FGFR1免疫组织化学染色 |
| 2.5 RNA提取和RT-PCR |
| 2.6 鸡等级前卵泡颗粒细胞的培养和处理 |
| 2.7 BrdU掺入鉴定颗粒细胞的增殖 |
| 2.8 TUNEL检测凋亡细胞 |
| 2.9 PKA和PKC免疫细胞化学染色 |
| 2.10 数据统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡小黄卵泡上FGFR1的表达 |
| 3.2 bFGF对鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响 |
| 3.3 bFGF/FGFR1信号系统在颗粒细胞增殖中的作用 |
| 3.4 PKA和PKC信号途径在bFGF促颗粒细胞增殖中的作用 |
| 3.5 bFGF对细胞周期调控基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第五章 干细胞因子对鸡等级前卵泡膜细胞增殖的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要器材 |
| 2.3 主要试剂及配制 |
| 2.4 鸡等级前卵泡膜细胞分离与培养 |
| 2.5 鸡等级前卵泡膜细胞的处理 |
| 2.6 c-Kit免疫细胞化学染色 |
| 2.7 PCNA免疫细胞化学染色 |
| 2.8 Hoechst染色检测细胞凋亡 |
| 2.9 数据的统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡等级前卵泡膜细胞形态观察 |
| 3.2 SCF对鸡等级前卵泡膜细胞增殖的影响 |
| 3.3 SCF/c-Kit信号系统在膜细胞增殖中的作用 #]00 |
| 3.4 PKA和PKC信号途径在SCF促膜细胞增殖中的作用 |
| 4 讨论 |
| 第六章 Ghrelin对鸡等级前卵泡发育的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物和主要器材 |
| 2.2 主要试剂及配制 |
| 2.3 RNA提取和RT-PCR |
| 2.4 鸡等级前卵泡培养和Ghrelin处理 |
| 2.5 卵泡形态学观察 |
| 2.6 LN和Cx43免疫组织化学染色 |
| 2.7 鸡小黄卵泡颗粒细胞分离培养与处理 |
| 2.8 BrdU掺入检测颗粒细胞的增殖 |
| 2.9 Hoechst染色检测细胞凋亡 |
| 2.10 LN和Cx43免疫细胞化学染色 |
| 2.11 PKA和PKC免疫细胞化学染色 |
| 2.12 数据的统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡卵泡发育中GHSR mRNA表达的变化 |
| 3.2 Ghrelin处理后鸡等级前卵泡颗粒层和膜层形态的变化 |
| 3.3 Ghrelin对鸡等级前卵泡中LN和Cx43表达的影响 |
| 3.4 Ghrelin对鸡等级前卵泡颗粒细胞增殖的影响 |
| 3.5 Ghrelin对鸡等级前卵泡颗粒细胞中LN和Cx43表达的影响 |
| 3.6 PKA和PKC信号途径在Ghrelin促颗粒细胞增殖中的作用 |
| 4 讨论 |
| 第七章 提示和创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表文章 |
（9）bFGF基因修饰的MSCs细胞复合β-磷酸三钙修复骨缺损实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 慢病毒真核表达载体构建及其转染活性的测定 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料及仪器 |
| 1.2 方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 bFGF基因修饰的犬骨髓间充质干细胞的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验材料及仪器 |
| 1.2 实验步骤 |
| 1.3 检测BFGF在骨髓间充质干细胞内的表达情况 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 bFGF基因修饰的rMSCs细胞生物学特性及MSCs与β-磷酸三钙复合培养的体外实验研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第四部分 bFGF基因修饰的rMSCs成骨活性的实验研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 细胞-生物材料复合物制备 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 观察方法及指标 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（10）乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫颈癌浸润、转移及预后的关系（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 论文部分 乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫颈癌浸润、转移及预后的关系 |
| 前言 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 结论 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 图片 |
| 综述部分 乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子在妇科肿瘤领域的研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 在读期间出版论着 |
| 致谢 |
四、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在内耳中的研究进展（论文参考文献）
- [1]细胞因子bFGF和LIF对雏鸡原始卵泡发育的调节作用及其机理的研究[D]. 郭长权. 浙江大学, 2020
- [2]光动力抗菌化学疗法在烧伤感染治疗中的研究与应用[D]. 买冰洁. 陕西师范大学, 2020(02)
- [3]肺内皮细胞靶向肽修饰的成纤维细胞生长因子对放射性肺损伤的修复[D]. 关东伟. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
- [4]运动康复对稳定性冠心病血管新生及内皮功能的影响[D]. 王谦. 昆明医科大学, 2019(06)
- [5]碱性成纤维细胞生长因子对LASIK术后角膜神经修复和角膜知觉恢复的影响[D]. 周远沛. 郑州大学, 2014(02)
- [6]bFGF在宫腔粘连患者子宫内膜中的表达及意义[D]. 葛静. 中南大学, 2013(05)
- [7]bFGF在肝纤维化中的研究进展[J]. 毛小荣. 国际消化病杂志, 2011(03)
- [8]局部性促生长因子对鸡卵泡发育的调控及其机理的研究[D]. 林金杏. 浙江大学, 2011(07)
- [9]bFGF基因修饰的MSCs细胞复合β-磷酸三钙修复骨缺损实验研究[D]. 马雷. 新疆医科大学, 2010(08)
- [10]乙酰肝素酶、碱性成纤维细胞生长因子的表达与子宫颈癌浸润、转移及预后的关系[D]. 张庆. 郑州大学, 2009(02)