一、高浓度氟引起SH-SY5Y神经细胞中α7尼古丁受体水平降低（论文文献综述）
普元柱,苏灿[1]（2020）在《灯盏细辛及其活性成分防治阿尔茨海默病的药理作用研究进展》文中研究指明阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）是一种尚无有效治疗药物的神经退行性疾病。在多个AD模型中的研究表明,灯盏细辛及其活性成分（灯盏乙素和咖啡酰奎宁酸）能够改善/提升学习记忆能力,其作用机制主要涉及抑制β淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）生成、聚集、纤维化和神经毒性、调节胆碱能神经系统、抑制氧化应激和炎症、抑制tau蛋白过度磷酸化、改善线粒体功能、抗神经细胞凋亡等。该文对灯盏细辛及其活性成分在防治AD方面的研究结果进行系统综述,以期为进一步开发灯盏细辛药用潜能提供参考资料。
曾晓晓[2]（2019）在《白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用》文中研究指明目的:长期摄入过量氟可造成全身病理性损害,其主要损害机制与氟离子导致的氧化应激水平升高（Oxidative stress,OS）有关。研究表明,白藜芦醇（Resveratrol,RSV）是沉默信息调节因子2同源蛋白1（Silent mating type information regulation 2 homolog,SIRT1）激动剂,在多种疾病中具有抗氧化作用。本研究选择实验性氟中毒实验大鼠及其所生不同日龄仔鼠脑组织和经氟化钠（NaF）处理的体外培养神经细胞,研究RSV在实验性氟中毒造成的中枢神经系统氧化应激损伤中的神经保护作用。方法:1.研究对象:动物实验造模:用Sprague-Dawley（SD）大鼠,随机分成4组（每组8只）,即对照组:自由饮用自来水（含氟量<1 mg/L）;RSV组:饮水同上,饲养4个月后经灌胃给予RSV（50 mg/kg/天）,持续3个月;染氟组:饮水中加入NaF（F-含量为50 mg/L）;染氟加RSV组:饮水同染氟组,饲养4个月后经灌胃给予RSV（50 mg/kg/天）,持续3个月;对照组和染氟组大鼠在饲养4个月后经胃给予与RSV同等容量的生理盐水3个月;总实验周期为7个月。取上述饲养分组动物,饲养6个月后分雌雄合笼（2:1）饲养,妊娠生产后取不同日龄（1、7、14、21及28天）新生仔鼠进行相关测定。细胞实验造模:用SD大鼠脑组织海马区域原代神经细胞及神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞系神经细胞进行体外培养,采用NaF（4 mmol/L F-）、RSV（10或20 mol/L）、苏拉明（Suramin,SIRT1抑制剂）（200或300μg/mL）,分别或合并处理培养神经细胞,孵育时间为48 h。2.测定方法:观察实验性氟中毒动物氟斑牙形成程度,用氟电极方法测定尿液、血清、脑组织与骨组织氟含量;用Morris水迷宫方法测定动物学习记忆能力;用Western blotting方法检测动物大脑组织和体外培养细胞中SIRT1、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅激活因子（Peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）、α7尼古丁型乙酰胆碱受体（Nicotinic Acetylcholine Receptors,α7 nAChRs）蛋白水平;用CCK-8试验检测体外神经细胞的存活率;用生化方法测定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-Glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）等酶活性,以及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、H2O2及蛋白氧化产物羰基含量,用ELISA测DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷（8-Hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHdG）含量。结果:1.动物实验:成功建立实验性氟中毒动物大鼠及仔鼠模型,表现为染氟组（包括染氟组、染氟加RSV组）动物均出现氟斑牙,尿液、血清、骨及脑组织内氟离子含量均高于对照组（对照组、对照+RSV组）,RSV并不能减少机体内氟离子蓄积。慢性氟中毒动物学习记忆能力明显降低,RSV处理减弱了实验性氟中毒动物学习和记忆能力下降的水平。慢性氟中毒大鼠及其所新生28日龄仔鼠海马及皮质区SIRT1、PGC-1α及α7 nAChR蛋白表达均明显降低,而上述改变均可被RSV逆转。慢性氟中毒动物大鼠及其所新生不同日龄仔鼠脑组织及血清中OS水平升高,包括MDA、蛋白氧化产物羰基、8-OHdG及H2O2等含量上升,而抗氧化酶活性,如SOD、γ-GCS与CAT等均明显降低;应用RSV后,OS水平降低的程度有所减弱。相关分析显示,氟中毒大鼠及其仔鼠OS（MDA、羰基、8-OHdG等）含量升高与SIRT1表达水平呈负相关关系,而抗氧化酶（SOD、γ-GCS与CAT）活性降低程度与SIRT 1蛋白表达呈正相关关系,两者间有统计学意义。2.细胞模型:原代培养大鼠海马神经元细胞及SH-SY5Y神经细胞经NaF处理后,SIRT 1、PGC-1α、α7 nAChR及α4 nAChRs蛋白表达水平均明显下降,OS水平增高;经RSV预处理,可减轻氟化物引起的SIRT1、PGC-1α、α7 nAChR及α4nAChR蛋白表达降低,OS水平降低,而苏拉明则加重NaF引起的上述蛋白表达及OS水平的改变。结论:1、慢性氟中毒引起大鼠及其所生28天龄仔鼠学习记忆能力降低,造成氟中毒成年动物及仔鼠脑组织中SIRT 1、PGC-1α及α7 nAChR等蛋白表达降低,同时造成动物脑组织和血清中抗氧化水平降低;2、高浓度氟处理的神经细胞中亦出现SIRT 1、PGC-1α、α7及α4 nAChRs等蛋白表达降低,OS水平升高;3、RSV处理虽然不能减少氟化物在慢性氟中毒动物体内的蓄积,但是可以减少氟化物慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低的程度,减少氟处理引起的SIRT1、PGC-1α及α7 nAChR等蛋白表达降低的水平,对抗氟引起的OS水平升高;4、慢性氟中毒大鼠脑组织中OS升高的水平与SIRT 1降低的水平有明显的相关性。研究结果指出,RSV可能通过提高SIRT 1蛋白表达增加其抗氧化能力,对抗氟中毒的神经损伤作用,其机制可能与PGC-1α表达异常有关。
何小静[3]（2019）在《黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞炎症反应的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:观察黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ1-42致BV2细胞炎症反应及α7nAChR表达的影响。方法:本实验通过寡聚体Aβ1-42活化小鼠BV2细胞作为研究模型,采用脑脊液药理学方法,运用MTT、ELISA、Western-blot及RT-PCR检测手段,从细胞及蛋白分子水平,观察黄连解毒汤含药脑脊液对BV2细胞炎症反应的调控作用。将处于对数期的BV2细胞随机分为阴性对照组、空白对照组、模型组、阳性对照组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,分别加入无血清培养液、空白脑脊液、空白脑脊液以及相应浓度含药脑脊液,除阴性对照组、空白对照组以外,其余各组加入终浓度为5μM寡聚体Aβ1-42,构建AD神经炎症模型,培育24h后,采用MTT法检测BV2细胞损伤状况,ELISA法检测BV2细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的表达,PCR和Western blot方法分别检测BV2细胞α7nAChR mRNA和蛋白表达水平。结果:1.与空白对照组相比,1μM20μM寡聚体Aβ1-42均可使细胞存活率显着降低,炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8表达量增多;2.黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ1-42致BV2细胞损伤无明显保护作用;3.黄连解毒汤含药脑脊液下调寡聚体Aβ1-42致BV2细胞释放炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达;4.黄连解毒汤含药脑脊液能上调寡聚体Aβ1-42致BV2细胞中α7nAChRmRNA和α7nAChR蛋白表达。结论:1.寡聚体Aβ1-42可以引起BV2细胞损伤及活化,释放一系列促炎性细胞因子;2.黄连解毒汤含药脑脊液能降低寡聚体Aβ1-42致AD神经炎症细胞模型中TNF-α、IL-6、IL-8水平,其作用机制可能与黄连解毒汤含药脑脊液激活胆碱能抗炎通路中α7nAChR有关。
董阳婷[4]（2018）在《氧化应激在β-淀粉样蛋白及氟化物引起的实验性中枢神经损伤病理过程中的作用及其分子机制》文中进行了进一步梳理目的:氧化应激（Oxidative stress,OS）在多种疾病的发生机制中起着重要作用。在本课题组过去的研究中发现,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发病中的关键蛋白之一―β-淀粉样肽（b-Amyloid peptide,Ab）可引起氧化应激水平升高;长期摄入过量氟化物可造成慢性氟中毒,导致机体全身性损伤,其主要损伤机制与氟诱导体内自由基过多有关。为了深入了解OS的致病作用,本文选择AD患者脑组织标本、β-淀粉样肽前体蛋白（b-Amyloid precursor protein,APP）高表达转基因小鼠、慢性氟中毒实验大鼠、经Ab处理的体外培养神经细胞,研究OS在该两种疾病中枢神经损伤中的作用及其分子发生机制。方法:1.AD研究:（1）研究对象:采用AD患者及对照组（非神经系统疾病）尸体解剖大脑海马及皮质颞叶区组织切片标本、APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠模型（APP高表达）及体外培养神经细胞（原代培养海马神经元和SH-SY5Y细胞系细胞）。（2）处理方法:用4月龄及8月龄转基因动物,经灌胃给予20 mg/kg白藜芦醇（Resveratrol,RSV）―一种沉默信息调节因子（Silent information regulators,SIRTs）激活剂、20 mg/kg苏拉明（Suramin）―SIRTs抑制剂、对照组动物给予生理盐水,处理时间为2个月。细胞模型采用0.5mmol/L Ab寡聚体（Aboligomers,AbOs）、10或50mmol/L RSV、200或300μg/mL Suramin、20mmol/L ZLN005及过氧化物酶体增殖物激活受体共激活因子1（peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator 1α,PGC-1α）转染质粒分别或合并处理,孵育时间为2448 h。（3）测定方法:用HE、尼氏染色、透射电镜及免疫组织化学方法检查人体或动物脑组织神经病理学形态变化;用免疫荧光或免疫组织化学方法检测SIRTs（SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5）在脑组织中的表达及定位;用CCK-8试验检测细胞的存活率;流式细胞技术或激光共聚焦显微镜检测体外培养细胞内凋亡或活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平;用ELISA试剂盒检测血清、脑脊液中α-可溶性分泌型APP片断（α-form soluble secreted APP,αAPPs）及脑组织中不可溶性Ab含量;用蛋白印迹（Western-blotting）、免疫荧光或免疫组化、实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+）检测试剂盒分别检测小鼠脑组织不同脑区和体外培养细胞中各种相关蛋白（SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5等）、mRNA表达水平及NAD+水平;用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力。2.慢性氟中毒研究:（1）研究对象:选择Sprague-Dawley（SD）大鼠。（2）处理方法:通过饮水加氟（50 mg/L,用氟化钠配制）及Vit E灌胃处理（50 mg/kg体重/天）复制慢性氟中毒动物模型及抗氧化剂处理动物模型,饲养时间为10个月。（3）测定方法:慢性氟中毒动物模型复制检查,包括脑重、氟斑牙程度、用氟电极方法测定尿氟及骨氟含量;采用生物化学方法测定氧化物阴离子(O2.-)、脂质过氧化物（其代谢产物丙二醛）水平;用免疫组化方法测定胆碱能毒蕈碱样受体（Muscarinic acetylcholine receptors,mAChRs）蛋白表达水平;用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。结果:1.AD部分:（1）人脑标本:结果显示,与正常人比较,AD患者大脑海马及颞叶皮质区SIRTs（SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5）表达均明显降低,并且出现大量的老年斑,老年斑的数量及分布与其的表达呈负相关的关系;（2）AD动物模型:结果显示,经过大量繁殖及基因型鉴定,AD动物模型成功建立;不同月龄段双转基因小鼠学习记忆能力较野生对照小鼠明显降低,脑重亦降低;较野生对照组比较,双转基因小鼠大脑神经元内尼氏小体明显减少,不同月龄双转基因小鼠大脑海马及皮质区均出现数量不等的老年斑,且其数量及分布程度随月龄增加而增加;电镜检查显示,不同月龄双转基因小鼠大脑神经元细胞核核膜局部有缺如,甚至核染色质边集,线粒体嵴和膜出现不同程度融合、断裂、消失;应用RSV处理双转基因小鼠后,其学习记忆能力及脑组织病理学变化明显改善,而Suramin则可进一步加重这些改变。双转基因小鼠海马及皮质区SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5蛋白及mRNA表达均出现不同程度降低,其在大脑海马及皮质区均有分布;同时,双转基因小鼠海马及皮质区PGC-1α、OGG1、α7 nAChR、Syn及SNAP25蛋白表达明显降低,Apo E、Caspase3蛋白表达明显升高;另外,α-分泌酶（ADAM10）及β-分泌酶（BACE2）蛋白表达出现不同程度降低,而β-分泌酶（BACE1）明显升高;而上述改变均可被RSV逆转,动物老年斑明显减少。双转基因小鼠血清及脑脊液中αAPPs含量明显降低;脑组织中不可溶性Aβ水平明显增加,NAD+含量明显降低;而经过RSV处理的双转基因小鼠αAPPs及NAD+含量明显升高,不可溶性Aβ水平明显降低,应用Suramin则出现相反的作用。双转基因小鼠血清、脑组织及线粒体中OS水平与抗氧化酶水平明显升高或降低;应用RSV后,其可降低OS,升高抗氧化酶活性,而Suramin则出现相反的作用。（3）细胞模型:结果显示,原代培养的大鼠海马神经元纯度约达到83%左右,PGC-1α沉默的海马神经元及SH-SY5Y细胞中PGC-1α蛋白表达水平均明显低于野生对照组细胞;加AbOs处理后,神经元内SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5蛋白及mRNA表达均出现不同程度降低;应用RSV预处理神经元后,SIRT1、SIRT3、SIRT4、SIRT5表达明显升高,且RSV可明显清除进入细胞内的AbOs,而Suramin则可进一步加重AbOs的毒性作用;另外,AbOs处理神经元后,细胞内PGC-1α、OGG1、α7 nAChR蛋白表达明显降低,Apo E、Caspase3蛋白表达明显升高;ADAM10及BACE2蛋白表达降低,而BACE1蛋白表达明显升高,RSV预处理细胞后,其可抑制上述改变。AbOs可以使神经元内NAD+水平明显降低,细胞凋亡,细胞内ROS及OS水平明显升高,而细胞及线粒体内抗氧化酶含量明显降低;RSV与处理细胞后,可逆转上述改变,而Suramin则加重上述改变。另外,随着PGC-1α的沉默,SIRT1不能抑制Apo E的表达;而激活PGC-1α后,即使抑制SIRT1的表达,也能调控Apo E的表达。2.慢性氟中毒部分:结果显示,染氟成年大鼠出现不同程度的氟斑牙,尿氟及骨氟含量高于对照组,脑重未见明显变化,学习记忆能力明显降低,同时脑组织M1、M3受体蛋白表达水平均低于对照组;脑组织O2·-及MDA水平明显升高。经Vit E处理的慢性氟中毒大鼠上述毒性改变明显减弱。相关分析结果发现,随着大鼠学习记忆能力降低,M1、M3受体蛋白表达呈降低趋势,两两存在正相关关系。结论:（1）AD患者脑组织、APP高表达转基因小鼠脑组织及经AbOs的神经细胞中OS水平升高,SIRTs表达的降低,可能是导致老年斑大量聚集的原因之一。（2）RSV通过增加SIRTs的表达,减少AbOs诱导的细胞毒性作用,其机制可能涉及SIRTs激活后调控其下游的一系列蛋白,降低线粒体自由基和ROS产生,减少细胞脂质过氧化水平,提升抗氧化酶活性,减少Apo E的改变,抑制线粒体DNA损伤,从而减少细胞凋亡,进而降低细胞老化所引起的学习记忆能力的改变。（3）SIRTs激活后通过刺激α7 nAChR的表达,活化ADAM10,增强APP非淀粉代谢途径,促进sAPPα分泌,从而减少Ab在大脑中的沉积。（4）慢性氟中毒大鼠脑组织中OS水平升高,mAChR M1及M3受体蛋白表达水平降低,MDA及O2·-水平升高,受体水平减低与OS水平的上升有显着性负性相关,这些改变可能是氟中毒大鼠学习记忆能力降低的机制;抗氧化剂对慢性氟中毒脑组织损伤有一定抑制作用。（5）OS在AD及慢性氟中毒中枢神经系统病理损伤机制中有重要作用,抗氧化剂处理或提高抗氧化水平可对抗过量Ab或氟化物引起的神经损伤。
邓明芬[5]（2017）在《7-硝基吲唑拮抗过量氟暴露引起的SH-SY5Y细胞NO/NOS表达水平升高及毒性作用》文中提出目的:为深入研究慢性氟中毒神经损伤的发病机制,本实验在前期氟中毒研究的基础上选用体外培养人脑神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y细胞）株,并复制氟中毒细胞模型,通过加入和不加入神经型一氧化氮合成酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS）抑制剂7-硝基吲唑（7-nitroindazole,7-NI）,研究氟对培养SH-SY5Y细胞细胞增殖、NO/NOS的变化及7-NI对氟中毒性SH-SY5Y细胞细胞增殖、NO/NOS的影响。方法:（1）SH-SY5Y细胞增殖活性检测:采用细胞增殖与活性检测试剂盒（cell counting kit 8,CCK-8）筛选出体外培养SH-SY5Y细胞时氟化钠（Sodium fluoride solution,NaF）和7-NI的最佳药效浓度。（2）实验分组及处理:实验分为对照组、染氟组、抑制剂染氟组。对照组:细胞不做任何处理。染氟组:只加NaF处理细胞,不做其他任何处理;NaF浓度为0mmol/L、0.2mmol/L、2.0mmol/L,处理时间为48h。抑制剂染氟组:NaF+7-NI处理细胞,NaF浓度为0mmol/L、0.2mmol/L、2.0mmol/L,在不同浓度NaF处理的细胞中各加入1μmol/L 7-NI,处理时间为48h。（3）倒置显微镜观察各组细胞形态,透射电镜观察细胞超微结构;硝酸还原酶法和比色法检测各组细胞培养液中一氧化氮（nitric oxide,NO）含量和一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase,NOS）活性;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）方法检测各组nNOS mRNA水平;蛋白免疫印迹（Western Blotting）法检测各组细胞nNOS蛋白表达情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:（1）染氟（0.2mmol/L、2.0mmol/L NaF）组细胞增殖率低于对照组,高氟组低于低氟组,差异有统计学意义（P<0.05）;与染氟组比较,染氟和7-NI共培养组细胞增殖率明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,无氟7-NI组与对照组比较无差异（P>0.05）。（2）普通倒置显微镜镜下观察,染氟组细胞生长密度逐渐降低,低氟组部分细胞开始皱缩、变圆,胞浆中可见颗粒样变化,随着染氟浓度增加高氟组大多数细胞出现皱缩、变圆,部分核固缩,细胞间隙增大,呈网状,可见小部分细胞脱落。染氟与7-NI共培养细胞后,细胞生长密度逐渐增加,大部分细胞形态变为梭形,仅少数呈圆形、不规则形。（3）透射电镜下观察,染氟后可见细胞皱缩,核染色质固缩,浓染,染色质部分边集;细胞质中细胞器数量明显减少,部分线粒体排列紊乱,线粒体嵴断裂、缺失,并出现不同程度的空泡化,内质网扩张。染氟与7-NI共培养细胞后,细胞膜和核膜较完整,核仁明显,但仍可见部分核染色质固缩,浓染;胞质中细胞器数量较染氟组明显增多,高尔基体、内质网等细胞器未见明显异常,线粒体空泡化较染氟组减少。（4）染氟组NO含量、NOS酶活性、nNOS mRNA和蛋白相对表达水平均较对照组增高（P<0.05）,且高氟组高于低氟组（P<0.05）;染氟与7-NI共培养组上述各指标与染氟组比较表达明显减弱（P<0.05）。（5）染氟组细胞凋亡率较对照组增高,且高氟组高于低氟组,差异有统计学意义（P<0.05）;染氟与7-NI共培养细胞后,细胞凋亡较染氟组降低（P<0.05）;无氟7-NI组与对照组比较无差异（P>0.05）。结论:（1）过量氟暴露能抑制SH-SY5Y细胞增殖和促进细胞凋亡发生,并使SH-SY5Y细胞形态和超微结构发生改变,这些细胞损伤可能与氟对NO含量、NOS活性增高、nNOS表达的影响有关。（2）7-NI对氟致nNOS上调有一定抑制作用,在体外可抑制氟中毒引起的SH-SY5Y细胞损伤作用,这为氟中毒所致神经系统损伤治疗药物的研究提供了实验基础。
李星[6]（2017）在《铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响》文中研究表明铅是一种常见的神经毒物,对神经系统具有异常亲和力,可诱发严重的神经功能障碍和学习认知功能损伤。学习记忆和认知是高级中枢神经系统功能的基本体现。海马不仅是学习记忆发生与认知功能塑形的关键场所,也是铅神经毒性作用的主要靶位点。胰岛素/Pi3k/Akt和MAPKs信号通路的活化表达是细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程发生和发展的分子基础,其表达紊乱或活化异常可导致一系列疾病状态及病理表现的发生。阿尔茨海默症（Alzheimer‘s disease,AD）是一种原发型进行性神经退行性疾病,其发病受环境和遗传因素的共同调节。进行性认知功能障碍,及学习记忆能力损伤是AD的典型临床症状,该过程中常伴随Tau蛋白过磷酸化、神经元大量凋亡、突触结构/功能退化及通路蛋白表达异常。虽然AD发病机制尚不清楚,但大量研究数据提示,Aβ表达异常和蓄积可能是各种原因诱导AD发病的共同通路。近期研究发现,AD可能并不属于单纯的老年型疾病,其发病亦具有一定的胚胎源性,这符合成人疾病的胚胎基础假说（Fe BAD）的论述。已知孕哺期铅暴露会诱发严重影响子代中枢神经系统的正常发育;且人群研究结果证实发育早期铅暴露与儿童智力损伤,空间学习记忆能力障碍、认知和注意力下降具有强相关性,但该机制尚不十分清楚。本研究拟运用小鼠孕哺期铅暴露模型和PC12细胞染毒模型,检测孕早期铅暴露对子代小鼠血铅和海马铅含量、海马Aβ相关蛋白（IDE）和学习记忆相关蛋白（NGF）表达的影响;结合体外实验,观察铅暴露对神经细胞生长发育的影响,探讨该过程中可能涉及的AD相关蛋白,神经发育相关因子及MAPKs信号通路蛋白表达变化,对铅的细胞和神经毒性进行阐述和分析,为AD发病机理的探讨及神经功能修复提供理论依据。目的1.通过构建铅中毒动物模型,比较孕哺期铅暴露对仔鼠学习记忆能力的影响,检测各浓度铅暴露组海马IDE和NGF的差异表达,评估孕哺期母体铅暴露对子代小鼠神经元发育和功能表达的影响,进而说明铅的致AD样病变作用。2.通过构建体外细胞染毒模型,分析对比不同剂量及不同时间铅暴露对AD相关细胞因子,神经发育相关因子和胞内信号蛋白表达的影响,探索铅暴露对Aβ及其衍生物表达的影响,说明铅致AD样病变作用并探讨其对信号传导通路表达的影响,为AD的防治和铅毒性的干预治疗提供线索。材料与方法1研究对象动物模型:将怀孕SPF级昆明小鼠随机分为4组,每组10只,1个对照组及3个铅暴露组。孕鼠自怀孕第1d起（E0）至仔鼠断乳时,分别给予醋酸铅含量为0%（对照组）、0.1%（低剂量组）、0.2%（中剂量组）和0.5%（高剂量组）的去离子饮用水。仔鼠出生后仍由母鼠喂养照料至PND21。细胞株:选用褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株作为实验对象,经分化处理后,分别给予终浓度为0μM、20μM、100μM和500μM的醋酸铅染毒。2.方法2.1动物实验2.1.1采用Z-5000石墨炉原子吸收光谱仪测定仔鼠血铅和海马铅浓度。2.1.2采用Morris水迷宫实验评价仔鼠的学习记忆能力。2.1.3采用Western Blot检测IDE和NGF在不同剂量铅暴露组中的表达量。分别采用免疫组化和免疫荧光技术对IDE和NGF在海马组织中的分布和表达进行了描述（对照组和高剂量组）。2.2细胞实验2.2.1采用MTT法检测不同暴露浓度及暴露时间对细胞活性的影响。2.2.2采用Western Blot技术检测AD相关蛋白（Aβ和Aβ寡聚体）,神经发育相关蛋白（IGF1/IGF1R）及胞内信号通路相关蛋白（IR、p-Akt、IDE、ERK1/2、JNK1/2/3、P38）蛋白表达的改变,采用实时定量PCR分析APP、INSR、IDE和IGF1/IGF1R基因m RNA的表达。3.统计分析实验使用SPSS 21.0软件包（SPSS Inc,USA）进行统计分析,两组数据比较采用独立样本t检验,多组数据间比较采用单因素方差分析,两两比较使用Bonferroni检验法,若不满足正态分布,则使用秩和检验,若数据满足正态分布则以均数±标准差（x±s）表示,检验水平为α=0.05。结果1.动物实验结果1.1孕哺期母体铅暴露对仔鼠血铅、海马铅含量及其学习记忆能力的影响不同剂量孕哺期铅暴露后,PND21仔鼠血铅和海马铅含量显着高于对照组（P<0.05）。Morris水迷宫结果显示,中、高暴露剂量组仔鼠的逃避潜伏期和错误次数均显着高于对照组（P<0.05）。1.2.孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马组织IDE和NGF蛋白表达的影响1.2.1 Western Blot结果显示,各铅暴露组仔鼠海马IDE和NGFβ蛋白表达水平较对照组均明显降低（P<0.05）。1.2.2免疫组化结果显示,高剂量铅暴露组仔鼠海马CA1区NGF免疫组化阳性反应物的平均灰度值明显低于对照组（P<0.05）。1.2.3免疫荧光实验结果显示,高剂量铅暴露组仔鼠海马神经元活性剂IDE免疫荧光抗体的平均光密度均显着低于对照组（P<0.05）。2.细胞实验结果1.醋酸铅处理对PC12细胞增殖的影响根据细胞的数量变化及形态学改变最终选择0μM、20μM、100μM和500μM醋酸铅暴露浓度及12h、24h和72h来开展后续研究。2.醋酸铅处理对PC12细胞Aβ和Aβ寡聚体表达的影响不同浓度醋酸铅暴露12h后,500μM染铅组PC12细胞Aβ的表达低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在20μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）,100μM和500μM染铅组PC12细胞Aβ蛋白的表达水平高于对照组（P<0.05）。染毒24h后,各染铅组细胞Aβ的表达水平均低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在各染铅组细胞中的表达无明显改变（P>0.05）。染毒72h后,Aβ蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;Aβ寡聚体蛋白在各染铅组细胞中的表达均高于对照组（P<0.05）。3.醋酸铅处理对PC12细胞IGF1/IGF1R表达的影响醋酸铅暴露12h后,20μM染铅组PC12细胞IGF1的表达高于对照组（P<0.05）,IGF1和IGF1R蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,IGF1蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;IGF1R蛋白在20μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,IGF1蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM和500μM染铅组细胞IGF1R的表达低于对照组（P<0.05）。4.醋酸铅处理对PC12细胞IR、p-Akt、IDE表达的影响染毒12h后,20μM染铅细胞IR的表达低于对照组（P<0.05）,100μM染铅组细胞IR和p-Akt蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞p-Akt的表达低于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞IDE的表达低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,20μM及100μM染铅组细胞IR的表达低于对照组（P<0.05）;p-Akt蛋白在20μM和100μM染铅组细胞中的表达显着高于对照组（P<0.05）,500μM染铅组细胞p-Akt的表达量则明显低于对照组（P<0.05）;IDE蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,IR蛋白在20μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;p-Akt蛋白在500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞IDE的表达低于对照组（P<0.05）。5.醋酸铅处理对PC12细胞MAPK信号通路相关蛋白（ERK1/2、JNK1/2/3、P38）表达的影响不同浓度醋酸铅处理12h后,与对照组比较,各染铅组细胞ERK1的表达增高,而ERK2和P38蛋白表达降低（P<0.05）;500μM染铅组细胞JNK1的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及100μM染铅组细胞JNK2的表达高于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞JNK3的表达低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,与对照组比较,20μM染铅组细胞ERK1表达显着升高,而500μM染铅组细胞ERK1蛋白表达降低（P<0.05）;ERK2蛋白在各染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞JNK1的表达低于对照组（P<0.05）;500μM染铅组细胞JNK2蛋白的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及500μM染铅组细胞JNK3的表达低于对照组（P<0.05）;P38蛋白在100μM和500μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）。染毒72h后,与对照组比较,各染铅组细胞ERK2及JNK1蛋白的表达均降低（P<0.05）;500μM染铅组细胞ERK1的表达低于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞JNK2的表达高于对照组（P<0.05）,500μM染铅组细胞JNK2的表达低于对照组（P<0.05）;JNK3蛋白在100μM及500μM染铅组细胞中的表达均低于对照组（P<0.05）;100μM及500μM染铅组细胞P38的表达低于对照组（P<0.05）。6.醋酸铅对PC12细胞APP、INSR、AKT、IDE和IGF1/IGF1R转录水平的影响PCR结果显示,醋酸铅处理12h后,APP m RNA在各染铅组细胞中的表达无明显改变（P>0.05）;20μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;各染铅组细胞AKT m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）;各实验组细胞IDE m RNA的表达无显着差异（P>0.05）;20μM和100μM染铅组细胞IGF1/IGF1R m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）。染毒24h后,20μM及100μM染铅组细胞APP m RNA的表达高于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;20μM及100μM染铅组细胞AKT m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;20μM染铅组细胞IDE m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;100μM染铅组细胞IGF1 m RNA的表达低于对照组（P<0.05）,各实验组细胞IGF1R m RNA的表达无明显差异（P>0.05）。染毒72h后,20μM及100μM染铅组细胞APP m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）;仅20μM染铅组细胞INSR m RNA的表达低于对照组（P<0.05）;AKT m RNA在20μM及100μM染铅组细胞中的表达低于对照组（P<0.05）;IDE m RNA在各实验组中的表达无明显改变（P>0.05）;20μM和100μM醋酸染铅组细胞IGF1/IGF1R m RNA的表达均低于对照组（P<0.05）。结论1.孕哺期母体铅暴露可导致仔鼠血铅和海马铅浓度明显升高,抑制Aβ降解酶IDE及神经生长因子NGF的表达,损伤仔鼠的空间学习能力,该损伤效应呈暴露浓度依赖性。提示子代学习记忆能力障碍、脑AD样神经退行性变与孕哺期母体铅暴露密切相关。2.细胞染毒实验结果与动物研究结果相一致。醋酸铅暴露会对PC12细胞AD相关蛋白表达产生影响,该过程可能涉及胞内信号通路蛋白的异常表达。铅暴露在抑制ERK2、JNK1/3及P38蛋白表达的同时,刺激了ERK1和JNK2 MAPKs的表达。说明铅暴露可通过诱发信号通路表达异常来诱导AD样病变的产生。
史诗[7]（2015）在《Gx-50通过小胶质细胞受体α7 nAChR及TLR4介导的抗炎作用》文中研究说明阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）是一种神经系统退行性疾病,表现为认知损伤和渐进性记忆障碍。其主要的病理特征是胞外β淀粉样蛋白（βamyloid,Aβ）沉积形成老年斑和胞内tau蛋白超磷酸化形成神经纤维缠结。该病的病理机制十分复杂,与多种信号通路和因素相关,如Aβ、tau蛋白、神经元损伤、慢性炎症等。在众多机制中,脑内小胶质细胞介导的慢性神经炎症被认为与阿尔兹海默症的发生和发展有重要联系,从而受到广泛的关注和研究。研究目的:实验室前期研究表明,一种花椒中提取的天然化合物N-[2-（3,4-dimethoxyphenyl）ethyl]-3-phenyl-acrylamide（gx-50）对AD有显着的治疗作用,主要包括神经元保护、认知能力改善、抗Aβ聚集等功能;其次,基因芯片等结果表明,在原代的神经元中,与AD发生过程相关的一些基因、分子和信号通路也会在一定程度上受到gx-50的影响;此外,在小胶质细胞中,gx-50也表现出抑制Aβ诱导的趋化反应的作用。但目前并没有针对其在神经炎症反应方面的功能进行详细的研究。考虑到神经炎症在AD的发生和发展中具有的重要的作用,我们设计了一系列生物学实验来探究gx-50对Aβ诱导的炎症反应的是否具有以及如何产生抑制作用。研究方法:本实验的主要检测对象是Aβ诱导的小胶质细胞（BV2小胶质瘤细胞系和原代培养的小胶质细胞）及gx-50腹腔注射后APP转基因小鼠脑组织,通过检测其中的细胞因子、通路蛋白、受体等来确定gx-50对Aβ诱导的炎症反应的作用及其机制。通过炎症反应中的重要的促炎介质的检测确定gx-50的抗炎作用。分别用ELISA和Griess法检测细胞分泌的TNF-α、IL-1β、PGE2及NO等促炎介质的含量,并且用real-time PCR和Western blot方法检测组织或细胞内的IL-1β、COX2及i NOS表达。然后用免疫荧光的方法检测转基因小鼠脑切片中小胶质细胞活化情况。针对gx-50与α7 nAChR及其下游介导的抗炎通路JAK2/STAT3和PI3K/AKT的关系进行研究。通过gx-50与α-Btx竞争性结合实验验证gx-50与α7 nAChR的结合作用,然后分别用real-time PCR和Western blot针对该受体m RNA及蛋白的表达情况进行研究,以确定gx-50对该受体表达是否有影响。此外,通过免疫荧光和Western blot的方法检测JAK2、STAT3、PI3K及AKT蛋白磷酸化水平从而确定α7 nAChR介导的JAK2/STAT3和PI3K/AKT信号通路的活化情况,并且通过分别加入α7nAChR、JAK2及PI3K特异性抑制剂α-Btx,AG490和LY294002来进一步验证gx-50与这两个通路的关系。然后,将细胞分别用α-Btx,AG490和LY294002等抑制剂预处理,再用Western blot和ELISA检测IL-1β的表达变化情况,以确定gx-50的抗炎作用是否与α7nAChR及其介导的抗炎通路相关。针对gx-50对TLR4及其下游介导的炎症通路NF-κB及MAPK的关系进行研究。通过real-time PCR和Western blot检测体内体外TLR4的m RNA和蛋白表达及TLR4招募蛋白My D88和TRAF6的蛋白表达情况。此外,通过免疫荧光和Western blot的方法检测NF-κB p65及IκB、p38、ERK、JNK蛋白磷酸化水平从而确定TLR4介导的NF-κB及MAPK信号通路的活化情况。然后,分别用si RNA及过表达质粒干扰和过表达TLR4,通过对TLR4介导的信号通路的抑制和活化情况进一步确定gx-50对该受体介导的炎症通路的影响。研究结果:Gx-50在体内体外对Aβ诱导的神经炎症均有显着的抑制作用。对小胶质细胞促炎介质的检测结果表明Aβ能刺激小胶质细胞中促炎介质的释放,包括TNFα（998.43±26.29 pg/ml）,IL-1β（437.97±72.84 ng/ml）,PGE2（58.72±3.41 ng/ml）及NO（3.13±0.34μM）,而gx-50预处理后这些促炎介质的表达量显着地下降,分别为695.29±74.56 pg/ml,293.17±10.26 ng/ml,37.05±2.15 ng/ml和1.55±0.05μM。此外,Western blot结果进一步证实了gx-50能显着抑制COX2和i NOS的表达。对APP-Tg小鼠脑中促炎介质的检测结论与小胶质细胞结论一致,gx-50能显着地抑制Aβ刺激的促炎介质IL-1β,COX2和i NOS的m RNA及蛋白表达。免疫荧光结果显示gx-50可以抑制小胶质细胞的活化。Gx-50的抗炎机制可能与α7nAChR及下游通路JAK2/STAT3和PI3K/AKT相关。gx-50可以与α7 nAChR相结合,且不论是在正常或病理情况下,gx-50均能上调该受体表达。对α7 nAChR介导的信号通路JAK2/STAT3和PI3K/AKT的检测结果显示,gx-50能上调JAK2、STAT3、PI3K和AKT的蛋白磷酸化,而AG490、LY294002及α-Btx预处理分别抑制了gx-50这一作用,说明了gx-50通过α7nAChR的激活调控JAK2/STAT3和PI3K/AKT信号通路。此外,抑制剂α-Btx、AG49和LY294002的预处理抑制了gx-50对Aβ诱导的IL-1β的下调作用。在病理条件下,gx-50能直接抑制TLR4介导的炎症通路。gx-50可以抑制TLR4的活化,在Aβ或APP+/saline组中TLR4,My D88和TRAF6的表达显着地增加了,gx-50预处理后其表达量均受到了显着地抑制。对体内体外TLR4介导的炎症通路NF-κB及MAPK的检测结果显示,gx-50能显着抑制这两个炎症通路蛋白磷酸化水平。gx-50能抑制Aβ42诱导的IκB的磷酸化表达及NF-κB p65蛋白入核,从而抑制其对下游促炎基因的调控;免疫荧光结果进一步证实了这一点:Aβ刺激NF-κB p65入核,而与其相比,gx-50预处理后NF-κB p65更集中于胞浆中。此外,gx-50能显着地抑制Aβ42诱导的p-ERK1/2,p-p38的表达水平。上述结果表明gx-50显着地抑制了Aβ诱导的TLR4介导的炎症通路的活化。然而,当si RNA干扰TLR4表达时,以IL-1β和TRAF6为例,它们的表达量受到了显着的抑制,与未干扰组相比下降了50%,该效果与gx-50相一致,当TLR4过表达后,gx-50仍对My D88和TRAF6的表达起到抑制作用,使其表达量分别下降了38%和15%。综上所述,gx-50表现出强烈的抗炎作用,该作用体现在多个方面。首先,gx-50能激活炎症负反馈通路。gx-50能与α7nAChR相结合,使其激活进而导致下游通路JAK2/STAT3和PI3K/AKT的激活,而这两个通路对炎症通路起到负调控作用,进而起到抗炎作用。另一方面,gx-50能抑制炎症通路。gx-50能抑制Aβ诱导的TLR4激活,进而导致其下游招募蛋白My D88和TRAF6的减少,从而导致炎症通路NF-κB及MAPK的抑制,最终起到了抗炎作用。
魏娜[8]（2014）在《燃煤污染型地氟病区儿童智力及慢性氟中毒仔鼠学习记忆改变》文中进行了进一步梳理目的：地方性氟中毒（简称地氟病）是世界上分布较为广泛、危害较为严重的一种地方病，可引起中枢神经系统毒性损伤，导致病区儿童智力低下。但慢性氟中毒对发育中神经系统损伤作用机制目前还未完全阐明清楚。为了解燃煤型地方性氟中毒病区经过综合治理后学龄儿童智力情况我们进行了此次调查，并通过动物模型和细胞模型进一步探讨脑组织中N-甲基-D-天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate, NMDA）受体、钙离子信号传导通路及氧化应激对慢性氟中毒仔代神经系统发育和学习记忆能力的损害作用。应用抗氧化剂维生素E（VitE）进行干预处理，寻找慢性氟中毒有效防治措施。方法：选择贵州省毕节市典型燃煤型地方性氟中毒病区改炉改灶及健康教育综合治理时间超过3年的村8-12岁小学生作为治理时间长组，综合治理时间<1年的村小学生作为治理时间短组，同时选择毕节市七星关区内同年龄段小学生作为对照组。采用Dean法进行氟斑牙检查，氟离子选择电极法测定尿氟，《瑞文标准推理测验》检测智商。通过饮水加氟和Vit E灌胃处理制备动物模型，实验动物处理5个月后雌雄大鼠合笼，分别取出生1、7、14、21、28d仔鼠进行实验。观察仔鼠出生后体重变化；记录仔鼠完成平面翻正、空中翻正、听觉惊愕、断崖回避等神经反射的时间； Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力；HE和尼氏染色观察仔鼠脑组织形态改变；脑组织氧化应激指标通过相关试剂盒检测；免疫组化方法检测神经元核心抗原Neu N，NMDA受体各亚单位（NR1、NR2A、NR2B、NR3A）、 CaMK II蛋白在脑组织的表达定位； Western-blotting和Real-time PCR方法检测大鼠脑组织和体外培养细胞中NMDA受体各亚单位蛋白及mRNA表达水平；流式细胞术检测仔鼠脑组织和体外培养神经细胞凋亡率；激光共聚焦和流式细胞仪观察体外培养神经细胞内活性氧簇（ROS）和钙离子（Ca2+）荧光染色。结果：与对照组儿童比较，病区儿童氟斑牙检出率和儿童尿氟含量显着升高，且治理时间短组检出率高于治理时间长组。智力调查结果显示，病区儿童智商与对照组比较明显下降，且智商分布与尿氟含量呈负相关。病区治理时间长与治理时间短两地儿童的智商分布从整体和性别比较无差异，但在低年龄组儿童中，治理时间长病区儿童中等以上智商比例高于治理时间短病区儿童。动物实验结果显示，各实验组仔鼠出生体重无显着差异，但染氟组仔鼠体重增长缓慢，至出生28d体重明显低于对照组和Vit E干预组；完成平面翻正、空中翻正的时间延迟，水迷宫实验显示逃避潜伏期延长，探索平台次数减少，学习记忆能力下降。HE染色观察随仔鼠生长发育，海马及神经细胞体积增大，染氟组仔鼠脑组织神经细胞核比例增大、染色增强；神经细胞尼氏染色变浅；神经元核心抗原Neu N表达降低；脑组织细胞凋亡率增高；脑组织SOD活力下降，MDA含量增加，NO和NOS均呈增高趋势。Vit E干预组各项指标与对照组比较差异无统计学意义。NMDA受体各亚单位在仔鼠发育进程中表达情况为：与新生仔鼠蛋白表达比较，对照组NR1蛋白表达于出生后21d达高峰，以后逐渐下降；NR2A亚基于出生14d表达明显升高，并维持至出生后28d；NR2B亚基蛋白表达于出生28d时明显升高；NR3A亚基在仔鼠出生14d表达最高；phospho-NR2B在仔鼠出生14d表达升高，并稳定维持至出生后28d；CaMKII于出生14d表达明显升高，之后有缓慢下降。染氟组NR1亚单位在仔鼠出生后7d升高，之后逐渐下降至新生水平；NR2A亚基于出生28d表达量最高；NR2B在仔鼠出生14d时其表达显着增加，至出生后28d稍有下降；NR3A亚基表达量无统计学意义；phospho-NR2B在仔鼠出生14d出现表达升高，并在出生21d、28d表达显着升高；CaMK II蛋白表达无显着变化。Vit E干预组NR1亚基表达高峰出现在出生后第14天，持续至出生后28d；NR2A蛋白表达于出生后21d达最高；NR2B亚基蛋白在仔鼠出生14d时其表达显着增加；NR3A亚基蛋白在仔鼠出生7d表达上升，14d时达高峰，一直维持至出生28d；phospho-NR2B蛋白在出生14d后表达升高；CaMK II蛋白在Vit E处理组仔鼠出生后7d其表达就升高，维持至出生28d。与对照组及VitE处理组同龄仔鼠各亚单位蛋白表达比较，染氟组仔鼠脑组织NR1、 NR2B及phospho-NR2B蛋白表达升高， CaMK II、 NR3A亚基蛋白的表达下降，NR2A蛋白表达无明显改变。仔鼠脑组织中NMDA各亚单位mRNA表达水平随仔鼠生长发育，染氟组NR1和NR2b mRNA表达水平有所升高，21d表达最高，28d表达逐渐下降；NR3a mRNA表达下降；Vit E干预组NR3a mRNA表达升高。本实验成功培养了原代神经细胞，经加氟处理后，随染氟时间增加，细胞凋亡率升高，细胞内ROS和Ca2+荧光染色增强，NMDA受体中NR1、 NR2B、phospho-NR2B蛋白表达升高，NR2A表达无明显改变，NR3A及Ca MKII表达下降。转录水平表达发现，低剂量氟处理时，NMDA各亚单位基因的表达无明显变化，高浓度氟处理后，NR2B mRNA表达升高，NR3A mRNA表达下降。通过抗氧化剂Vit E预处理后，细胞凋亡下降，细胞内ROS荧光强度明显下降，Ca2+荧光强度也有一定降低。结论：以上研究结果表明，（1）地方性氟中毒病区学龄儿童氟中毒情况仍较重，经过长时间综合治理后的病区儿童氟斑牙及尿氟含量下降，低年龄儿童智力明显改善。（2）慢性氟中毒可对仔代生长发育和神经系统发育分化产生不良影响。（3）氟在脑组织中的蓄积可导致氧化应激水平升高，反应性氧中间产物和反应性氮中间产物及脂质过氧化产物增加，抗氧化酶活力下降。（4）脑组织氟中毒可能激活NMDA受体功能，主要是NR1、NR2B亚基表达升高，phospho-NR2B水平升高；NR3A亚基表达下降；钙离子通路开放，细胞内钙离子浓度增加，导致细胞产生兴奋性毒性损伤作用，细胞凋亡坏死率增加，进而引起学习记忆等功能损害。
汪志刚[9]（2011）在《烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导神经细胞损伤的影响及机制研究》文中指出在全球范围内,伴随着人口老龄化的加剧,阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）的发病率和患病率快速增加。β淀粉样蛋白（β-amyloid protein, Aβ）在AD发病中起到关键性的作用,最终导致的结果是神经元的大量丢失,尤其是突触前神经元；与此同时,突触前的烟碱受体（nicotinic acetylcholine receptor, nAChR）也显着减少。有研究发现,Aβ蛋白与α7nAChR具有高度亲和力,Aβ蛋白在神经元内的沉积和损伤作用可能与此有关。目前,在AD的治疗中,胆碱酯酶抑制剂是最为重要的药物之一,其通过减少激动剂乙酰胆碱的分解,间接升高乙酰胆碱浓度起作用；然而,其疗效随作用时间的延长逐渐消失,最后无异于安慰剂。同样作为激动剂,烟碱受体激动剂短期应用具有神经细胞的保护作用,长期应用其保护作用不确定；一般认为,烟碱受体拮抗剂短期应用无神经细胞保护作用,而长期应用的研究报道较少。AD与慢性心衰都具有受体过度激活、受体下调和细胞凋亡等共同特征,所以二者可能具有一定的可比性。β受体激动剂短期内应用可以改善心衰的症状,但是长期应用使症状恶化和增加死亡率；而p受体阻滞剂却完全相反,已成为心衰治疗最为重要的手段之一。既然长期应用激动剂治疗AD存在上述问题,那么长期应用拮抗剂是否有可能发挥作用?故本研究从PC12细胞（类神经元）和神经元的实验出发,探讨长时间应用α7烟碱受体拮抗剂是否具有对抗Aβ蛋白的损伤作用,并了解其作用机制。第一部分烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导PC12细胞损伤的影响目的观察长时间应用烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的干预作用,探讨α7烟碱受体拮抗剂远期的细胞保护作用。方法1.用Aβ25-35制作PC12细胞的损伤模型,以α7烟碱受体拮抗剂（甲基牛扁亭碱）和烟碱受体激动剂（尼古丁）进行干预。2.实验分组：对照组, Aβ25-35组,尼古丁+Aβ25-35组,甲基牛扁亭碱+Aβ25-35组。3.MTT法检测药物+Aβ25-35作用于PC12细胞36、48、60、72、84h的细胞活力。4.根据MTT结果,分别于药物+Aβ25-35处理36和84h后,采用Hoechst染色、流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡。结果1.随着作用时间的延长,甲基午扁亭碱组的细胞活力相对地逐渐增加,尼古丁组的细胞活力相对地逐渐下降。2.随着作用时间的延长,甲基牛扁亭碱表现出抑制凋亡的趋势,而尼古丁抑制凋亡的作用消失。结论甲基牛扁亭碱短时间内应用未表现出PC12细胞的保护作用,但因为其具有阻断Aβ蛋白与α7nAChR结合的功能,故最终产生细胞保护作用的趋势。尼古丁短时间应用具有细胞保护作用,可能与其通过其它途径对抗Aβ蛋白损伤有关；但是随着作用时间的延长,Aβ蛋白的损伤作用占据了优势,最终其细胞保护作用丧失。第二部分烟碱受体激动剂和拮抗剂对Ap蛋白诱导损伤的PC12细胞烟碱受体功能的影响目的观察长时间应用烟碱受体激动剂和拮抗剂,在影响Ap蛋白诱导损伤PC12细胞的基础上,探讨其对PC12细胞nAChR功能的作用。方法1.分组同前。2.分别于药物+Aβ25-35处理后36和84h进行检测。首先洗脱所作用的药物,然后采用Fluo 3/AM对钙离子进行染色,用激光共聚焦显微镜检测细胞内基础钙离子浓度和刺激后细胞内钙离子浓度的变化。结果1.在36h,Aβ25-35引起钙超载；在84h,可能由于PC12细胞损伤进一步加重,其基础钙离子浓度反而降低；同时,其nAChR的功能一直是显着降低的。2.在36和84h,甲基牛扁亭碱均具有减轻钙超载的作用；同时,还增强了nAChR的功能,在84h其增强nAChR功能的作用显着优于尼古丁。3.在36和84h,尼古丁均不具有抑制钙超载的作用,在后期促进了钙超载的发生；尼古丁一直具有增强nAChR的功能,但是在后期其作用弱于甲基牛扁亭碱。结论甲基牛扁亭碱抑制Aβ蛋白引起的PCI2细胞钙超载,并且可能通过细胞保护作用或者上调nAChR,最终增强了nAChR的功能。尼古丁不具有抑制Aβ蛋白引起的钙超载,甚至在后期促进了钙超载的发生；尽管一直具有增强nAChR功能的作用,可能与其通过其它途径产生细胞保护作用或者上调nAChR有关,但是在后期其作用已经弱于甲基牛扁亭碱。第三部分烟碱受体激动剂和拮抗剂对Ap蛋白诱导PC12细胞损伤的影响机制目的从α7nAChR数量的调节和影响凋亡的信号转导通路方面,探讨α7烟碱受体拮抗剂产生PC12细胞保护作用的机制。方法1.分组同前。2.分别于药物+Aβ25-35处理后36和84h进行检测。JC1染色检测线粒体膜电位,qRT-PCR检测bcl-2、bax和Caspase 3的mRNA表达,Western Blot检测bcl-2、bax和α7nAChR的蛋白表达。结果1.Aβ蛋白的损伤作用以及尼古丁和甲基牛扁亭碱对Aβ损伤作用的干预均与线粒体凋亡途径有关。2.在36和84h,α7nAChR和Bax表达显着正相关,可能提示α7nAChR介导了Aβ25-35对PC12细胞的损伤；甲基牛扁亭碱和尼古丁均能下调α7nAChR蛋白表达。3.在36和84h,甲基牛扁亭碱均抑制caspase 3的mRNA表达；在84h,增加bcl-2/bax的mRNA表达。而尼古丁对bcl-2/bax的mRNA表达无显着影响,在84h增加了caspase 3的mRNA表达。4.在36和84h,甲基牛扁亭碱显着增加bcl-2/bax的蛋白表达,尼古丁对bcl-2/bax的蛋白表达无显着影响。结论Aβ蛋白可能通过α7 nAChR介导对PC12细胞的损伤,甲基牛扁亭碱通过下调α7nAChR,并阻断Aβ蛋白的损伤作用,进而升高bcl-2/bax,降低Caspase 3的表达,最终抑制PC12细胞的凋亡。第四部分在大鼠神经元中验证烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤作用的影响目的为了验证PC12细胞的实验结果,采用体外培养大鼠神经元进一步观察烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的影响。方法1.用Aβ25-35制作神经元的损伤模型,以α7烟碱受体拮抗剂（甲基牛扁亭碱）和烟碱受体激动剂（尼古丁）进行干预。2.分组同前。3.MTT法检测药物+Aβ25-35作用于大鼠神经元第3、7、14、21d的细胞活力。4.根据MTT结果,在Aβ25-35+药物作用于大鼠神经元21d检测细胞的凋亡和坏死。结果1.在实验早期（第3和7d）,尼古丁具有增加细胞活力的作用；在实验后期（第21d）甲基牛扁亭碱表现出增加细胞活力的作用,而尼古丁的作用消失。2.在实验早期（第3和7d）,尼古丁显着抑制细胞凋亡和坏死；在实验后期（第21d）,甲基牛扁亭碱表现出显着抑制细胞凋亡和坏死的作用,而尼古丁的作用消失。结论烟碱受体拮抗剂甲基牛扁亭碱在短期内并不具有神经元的保护作用,但是长期应用其保护作用显现出来,表现为明确地抑制神经元凋亡和坏死的作用；而烟碱受体激动剂尼古丁在短期内应用具有神经元保护作用,但是长期应用其保护作用逐渐丧失。
王长婷[10]（2010）在《高氟对子代大鼠甲状腺及脑发育、脑功能的影响》文中提出目的:前期实验中已成功制备出高氟导致甲状腺形态损伤和甲状腺功能低减的亲代模型大鼠。在此基础上,本文进一步观察研究其子代大鼠甲状腺损伤和中枢神经系统脑发育、脑学习记忆功能情况并初步探讨了可能的机制,为治疗和预防高氟导致大脑损伤提供一定的参考。方法:选用Wistar大鼠36只,雌雄各半,随机分为四组:正常对照组7只、高氟组14只、高氟甲状腺激素替代组7只、单纯甲状腺功能低减组8只,雌雄各半,分别饮用自来水;加入NaF200mg/L/d的高氟水;饮用高氟水的高氟甲状腺激素替代组,一周后同时每天以0.008%甲状腺干制剂混悬液1.8ml/200g体重/只腹腔注射进行替代,并将混悬液浓度每月递增0.008%;甲减组饮用自来水,同时将溶于生理盐水的PTU按lmg/l00g/d腹腔注射。5个月后,各组分别雌雄交配产生子代大鼠,分别为正常子代大鼠（N组）:常规喂养;高氟甲状腺功能低减子代大鼠（FP组）:此组子代大鼠再随机分为两组,一组为孕后替代组（T2组）,饮用高氟水同时,于怀孕后1周起每日腹腔注射甲状腺素（甲状腺片）2μg/l00g体重进行替代,另一组为高氟组（F组）,持续饮用高氟水;替代组子代大鼠（T1组）:在饮用高氟水同时予甲状腺干制剂混悬液1.8ml/200g体重/只灌胃腹腔注射;单纯甲减子代大鼠（P组）:按lmg/l00g/d腹腔注射溶于生理盐水的PTU。30天后子代与母代大鼠分笼,待子代大鼠2-3月龄时,做水迷宫测其脑功能。4月龄时杀鼠,用放射免疫法测定各组子代大鼠血清TT3、TT4、TSH含量;光镜下观察子代大鼠甲状腺和海马形态结构;免疫组化方法检测海马区域NMDAR2B蛋白表达。结果:1、生长和体重变化F组和P组生长曲线明显低于N组（P<0.05）,T1组稍高于N组（P>0.05）,T2组在10周前与N组相近,10周后体重增长曲线逐渐偏低于N组,但仍高于F和P组（P>0.05）。2、甲状腺变化（1）甲状腺指数:F组明显低于N组（P<0.05）,而P组明显高于N组（P<0.05）,T2组和T1组与N组无差异（P>0.05）。（2）甲状腺功能:F组和P组TT3、TT4明显低于N组（P<0.05）,TSH明显高于N组（P<0.01）;T1组TT3、TT4与N组相近（P>0.05）,TSH接近正常组（P>0.05）;T2组TT3偏低于N组,明显高于F组（P<0.05）和P组,TT4与N组相近（P>0.05）,TSH偏高于N组。（3）HE染色显微镜观察:N组甲状腺滤泡上皮结构正常,排列有序,滤胞无增生或萎缩;F组滤泡上皮增生,数量及层次增加,排列紊乱,细胞呈柱状或高柱状,甚至可向滤泡腔突出形成乳头。滤泡萎缩,滤泡数量减少,排列稀疏,大小不等;间质血管扩张充血,管腔增大,充满;间质有炎细胞散在浸润;间质纤维组织呈灶性或弥漫性增生;P组少量滤泡上皮增生,均见滤泡内胶质减少,滤泡腔空虚,红染均质物减少,间质血管扩张充血,间质血管官腔增大、充满;T1、T2组甲状腺损害较F组和P组轻,仅见滤泡上皮增生。T2组少数可见间质炎细胞浸润和间质血管扩张充血。3、海马变化（1）海马指数:P组明显低于N组（P<0.05）,F组、T1组和T2组与N组相近（P>0.05）。（2）水迷宫测定:在第一次水迷宫（学习能力）测试中,F组和P组爬上平台所用时间明显长于N组爬上平台所用时间（P<0.01）,T1组和T2组爬上平台所用时间与N组爬上平台所用时间相近（P>0.05）。在第二次水迷宫（记忆能力）测试中,F组和P组爬上平台所用时间明显低于第一次爬上平台所用的时间,但仍然明显长于N组爬上平台所用的时间（P<0.01）,T1组和T2组爬上平台所用时间与N组爬上平台所用时间相近（P>0.05）。（3）HE染色显微镜观察:N组海马神经元细胞排列有序,轮廓清晰,结构和细胞形态正常,细胞核深染,尼氏体清楚可见。F组海马组织结构变疏松,染色变浅,细胞稀疏,有水肿空泡形成。海马神经元细胞肿胀,神经元体积较正常增大,细胞浆染色变浅,胞核体积较正常增大,染色变浅;尼氏体消失;神经元排列明显紊乱,细胞层次结构破坏,极性消失;部分神经纤维增生紊乱,红染丝条状的神经纤维数量增多、增粗、排列;少量神经元坏死,神经元结构模糊或破坏,突起消失,细胞浆染色加深,细胞核结构模糊、固缩、碎裂。P组除了有脑组织水肿及神经元肿胀,神经元变性,神经元排列紊乱外,神经元坏死外,还有胶质细胞增生,脑组织内胶质细胞散在、弥漫、灶性或结节状增生。T1组和T2组海马组织损伤较F组和P组轻,仅见部分脑组织水肿海马神经元轻度肿胀、变性,神经元排列有序,神经元坏死减少。（4）NMDA受体亚单位NR2B免疫组化染色,数阳性细胞数:NMDAR2B受体免疫组化染色呈棕黄色,主要着色在海马CA1区的胞膜及胞浆,胞核不着色。F组和P组阳性细胞比值明显少于N组（P<0.01）,T1组阳性细胞比值与N组相近（P>0.05）,T2组阳性细胞比值高于F组,明显高于P组（P<0.05）。4、大脑变化大脑重量:F组和P组大脑重量偏低于N组（P<0.05）,T1组、T2组大脑重量于N组相近（P>0.05）。各组大脑指数无明显差异。结论:1、慢性氟中毒子代大鼠与亲代大鼠一样可发生明显的脑损伤和脑认知能力降低。2、慢性氟中毒子代大鼠与亲代大鼠一样可发生明显的甲状腺损伤和甲状腺功能降低。3、慢性氟中毒子代大鼠,无论是在氟中毒同时防止甲状腺功能低减还是在其胚胎期纠正甲状腺功能低减,均可明显减轻脑损伤和脑认知能力降低。强烈提示,慢性氟中毒子代大鼠高氟作用下甲状腺功能低减是导致其脑损伤、脑功能障碍的另一重要病机。4、考虑到胎儿、婴幼儿的脑发育特点和重要性,在氟中毒防治工作中,纠正慢性氟中毒地区胎儿和婴幼儿甲状腺功能低减尤为重要。5、海马NBMDAR2B受体数量的减少,可能是高氟子代大鼠发生脑损伤和脑认知能力降低的一个重要机制。
二、高浓度氟引起SH-SY5Y神经细胞中α7尼古丁受体水平降低（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、高浓度氟引起SH-SY5Y神经细胞中α7尼古丁受体水平降低（论文提纲范文）
（1）灯盏细辛及其活性成分防治阿尔茨海默病的药理作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 对A β的影响 |
| 1.1 拮抗Aβ神经毒性 |
| 1.2 抑制Aβ生成 |
| 1.3 抑制Aβ聚集、纤维化 |
| 2 调节胆碱能神经系统 |
| 3 抗氧化 |
| 4 改善线粒体功能 |
| 5 对炎症反应的影响 |
| 6 抑制tau蛋白异常磷酸化 |
| 7 抗神经细胞凋亡 |
| 8 其他 |
| 9 问题与展望 |
（2）白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（3）黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞炎症反应的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及细胞株 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器及耗材 |
| 1.5 实验试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 含药脑脊液制备 |
| 2.1.1 动物分组给药 |
| 2.1.2 制备含药脑脊液 |
| 2.2 BV2 细胞培养 |
| 2.2.1 细胞复苏 |
| 2.2.2 细胞换液 |
| 2.2.3 细胞传代 |
| 2.2.4 细胞冻存 |
| 2.3 实验检测 |
| 2.3.1 MTT法测定不同浓度寡聚体Aβ_(1-42)致BV2 细胞损伤的影响 |
| 2.3.2 MTT法测定不同含药脑脊液对BV2 细胞增殖的影响 |
| 2.3.3 MTT法测定不同含药脑脊液对寡聚体Aβ_(1-42)致BV2 细胞损伤的影响 |
| 2.3.4 ELISA检测黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ_(1-42)致BV2 细胞炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8 的影响 |
| 2.3.5 RT-PCR检测黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞中α7n ACh R m RNA表达的影响 |
| 2.3.6 WB检测黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞中α7n AChR蛋白表达的影响 |
| 3 统计方法 |
| 4 技术路线图 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 不同浓度寡聚体Aβ_(1-42)致BV2 细胞损伤的影响 |
| 5.2 不同浓度含药脑脊液对BV2 细胞增殖的影响 |
| 5.3 黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞损伤的影响 |
| 5.4 黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞释放炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8 的的影响 |
| 5.5 黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞中α7n AChR mRNA的影响 |
| 5.6 黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2 细胞中α7n AChR蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 β 淀粉样蛋白和小胶质细胞在AD发病中的作用 |
| 1.1 β 淀粉样蛋白与AD |
| 1.2 小胶质细胞与AD |
| 2 胆碱能抗炎通路在AD神经炎症中的作用 |
| 2.1 神经炎症是AD发病的重要机制 |
| 2.2 胆碱能抗炎通路通过α7nAChR介导神经炎症反应 |
| 3 毒损脑络是AD发病的关键病机 |
| 4 清热解毒方—黄连解毒汤在AD中的研究 |
| 5 脑脊液药理学认识 |
| 6 阳性药的选择 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在读硕士期间发表的学术论文、专着及科研成果 |
（4）氧化应激在β-淀粉样蛋白及氟化物引起的实验性中枢神经损伤病理过程中的作用及其分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（5）7-硝基吲唑拮抗过量氟暴露引起的SH-SY5Y细胞NO/NOS表达水平升高及毒性作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 略缩词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（6）铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词索引 |
| 1. 引言 |
| 2. 孕哺乳期母体铅暴露对仔鼠神经生长发育及AD相关蛋白的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 体内实验技术路线 |
| 2.3 材料 |
| 2.3.1 研究对象 |
| 2.3.2 主要药品与试剂 |
| 2.3.3 主要仪器和耗材 |
| 2.3.4 主要溶液的配制 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 动物模型的建立与分组 |
| 2.4.2 取材方法 |
| 2.4.3 Morris水迷宫测试 |
| 2.4.4 血铅和海马铅的提取与检测 |
| 2.4.5 石蜡切片制作 |
| 2.4.6 免疫组化实验 |
| 2.4.7 免疫荧光显微术和DAPI（细胞核染色） |
| 2.4.8 Western blot分析 |
| 2.4.9 统计分析 |
| 2.5 体内实验结果 |
| 2.5.1 仔鼠出生体重和PND21体重在各实验组的差异表达 |
| 2.5.2 血铅和海马铅在各实验组的差异表达 |
| 2.5.3 孕哺期母体铅暴露对仔鼠学习和记忆能力的影响 |
| 2.5.4 海马NGF蛋白在各实验组的差异表达 |
| 2.5.5 海马IDE蛋白在各实验组的差异表达 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 铅暴露对仔鼠学习记忆能力的影响及与AD相关分子的关联 |
| 2.6.2 孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马NGFβ蛋白表达的影响 |
| 2.6.3 孕哺期母体铅暴露对仔鼠海马IDE蛋白表达的影响 |
| 2.7 小结 |
| 3. 铅致PC12细胞AD样损伤效应及对胰岛素/Pi3k/Akt和MAPKs信号通路蛋白表达的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 体外技术路线图 |
| 3.3 材料 |
| 3.3.1 研究对象 |
| 3.3.2 主要药品与试剂 |
| 3.3.3 主要仪器设备 |
| 3.3.4 溶液的配制 |
| 3.4 方法 |
| 3.4.1 PC12细胞株培养 |
| 3.4.2 MTT实验 |
| 3.4.3 醋酸铅染毒 |
| 3.4.4 Western blot分析 |
| 3.4.5 Real-time PCR |
| 3.4.6 数据统计 |
| 3.5 细胞实验结果 |
| 3.5.1 MTT实验及醋酸铅对PC12细胞形态的影响 |
| 3.5.2 醋酸铅对PC12细胞Aβ和Aβ寡聚体蛋白表达的影响 |
| 3.5.3 醋酸铅对PC12细胞IR、p-Akt和IDE蛋白表达的影响 |
| 3.5.4 醋酸铅对PC12细胞IGF1和IGF1R蛋白表达的影响 |
| 3.5.5 醋酸铅对PC12细胞MAPK信号通路相关蛋白(ERK1/2、JNK1/2/3、P38）表达的影响 |
| 3.5.6 醋酸铅对PC12细胞APP、INSR、AKT、IDE和IGF1/IGF1R转录水平的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 3.6.1 AD发病机制的假说 |
| 3.6.2 铅暴露对PC12细胞APP mRNA表达的影响 |
| 3.6.3 铅暴露对PC12细胞总Aβ和Aβ寡聚体蛋白表达的影响 |
| 3.6.4 铅暴露对PC12细胞IR蛋白和INSR基因表达的影响 |
| 3.6.5 铅暴露对PC12细胞IGF1/IGF1R分子表达的影响 |
| 3.6.6 铅暴露对PC12细胞p-Akt、IDE蛋白和AKT、IDE基因表达的影响 |
| 3.6.7 铅暴露对PC12细胞MAPKs级联信号通路蛋白ERK1/2、JNK1/2/3、P38蛋白表达的影响 |
| 3.7 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 参考文献 |
| 综述 阿尔茨海默症发病机理研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）Gx-50通过小胶质细胞受体α7 nAChR及TLR4介导的抗炎作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 阿尔兹海默症 |
| 1.2 β 淀粉样蛋白与AD |
| 1.2.1 β 淀粉样蛋白生成 |
| 1.2.2 淀粉样蛋白假说及Aβ 在AD中的作用 |
| 1.3 小胶质细胞与AD |
| 1.3.1 小胶质细胞功能简介 |
| 1.3.2 小胶质细胞在AD中的作用 |
| 1.4 炎症与AD的关系 |
| 1.4.1 炎症在神经系统中的作用 |
| 1.4.2 慢性神经炎症与AD的关系 |
| 1.5 α7 烟碱型乙酰胆碱受体与AD |
| 1.5.1 α7 烟碱型乙酰胆碱受体的功能 |
| 1.5.2 α7 nAChR抗炎作用 |
| 1.6 关于AD的药物研究 |
| 1.6.1 AD临床治疗药物现状及AD药物研究几大方向 |
| 1.6.2 抗炎药物研究 |
| 1.6.3 gx-50 的相关研究 |
| 第二章 gx-50 对 α7 nAChR及其下游通路的作用 |
| 2.1 背景介绍 |
| 2.2 实验材料及仪器 |
| 2.3 试剂配制 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 BV2小胶质系细胞培养及加药处理 |
| 2.4.2 CCK8细胞活性检测 |
| 2.4.3 受体结合实验 |
| 2.4.4 从细胞中提取RNA及反转录 |
| 2.4.5 荧光实时定量PCR（Quantitative Real time PCR ）检测 |
| 2.4.6 从细胞中提取蛋白 |
| 2.4.7 免疫蛋白印迹（Western Blot）检测 |
| 2.4.8 细胞免疫荧光分析 |
| 2.4.9 细胞因子检测 |
| 2.4.10 统计学方法 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 gx-50 可与 α7 nAChR结合并影响其表达 |
| 2.5.2 gx-50 对JAK2活化的影响 |
| 2.5.3 gx-50 对STAT3活化的影响 |
| 2.5.4 gx-50 对PI3K活化的影响 |
| 2.5.5 gx-50 对AKT活化的影响 |
| 2.5.6 gx-50 对小胶质细胞炎症介质表达的影响 |
| 2.5.7 α7 nAChR抑制后gx-50 对炎性因子IL-1β 的影响 |
| 2.6 结果讨论 |
| 第三章 gx-50 对Aβ 诱导的神经炎症的影响 |
| 3.1 背景介绍 |
| 3.2 实验材料及仪器 |
| 3.3 试剂配制 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 大鼠原代小胶质细胞分离和培养 |
| 3.4.2 流式细胞术（flow cytometry，FCM）鉴定小胶质细胞 |
| 3.4.3 痴呆小鼠模型 |
| 3.4.4 从细胞/组织中RNA提取及反转录 |
| 3.4.5 荧光实时定量PCR（Quantitative Real time PCR ）检测 |
| 3.4.6 从细胞/组织中提取蛋白 |
| 3.4.7 小胶质细胞浆蛋白及核蛋白提取 |
| 3.4.8 Western Blot |
| 3.4.9 转基因小鼠脑组织切片免疫荧光双染色分析 |
| 3.4.10 siRNA干扰TLR4表达实验 |
| 3.4.11 小鼠tlr4原核表达质粒构建和转染 |
| 3.4.12 统计学方法 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 原代培养小胶质细胞的鉴定 |
| 3.5.2 gx-50 对转基因小鼠炎症介质表达的影响 |
| 3.5.3 gx-50 对转基因小鼠脑内小胶质细胞活化的影响 |
| 3.5.4 gx-50 对核转录因子NF-κB及IκB的影响 |
| 3.5.5 gx-50 对MAPKs通路磷酸化的影响 |
| 3.5.6 gx-50 对TLR4及其下游招募蛋白的影响 |
| 3.5.7 TLR4敲除后gx-50 对该通路的影响 |
| 3.5.8 TLR4过表达后gx-50 对该通路的影响 |
| 3.6 结果讨论 |
| 第四章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
（8）燃煤污染型地氟病区儿童智力及慢性氟中毒仔鼠学习记忆改变（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 1.前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1实验动物 |
| 2.2主要实验试剂和仪器设备 |
| 2.3 调查点和调查对象 |
| 2.4 方法 |
| 2.5 数据统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 病区调查结果 |
| 3.2 动物模型实验结果 |
| 3.3 细胞模型研究结果 |
| 4、讨论 |
| 结 论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 致谢 |
| 英文缩写词索引 |
| 博士期间参与科研项目 |
| 博士期间发表文章 |
| 博士期间参与工作 |
（9）烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导神经细胞损伤的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 前言 |
| 第一部分 烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导PC12细胞损伤的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤的PC12细胞烟碱受体功能的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导PC12细胞损伤的影响机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 在大鼠神经元中验证烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导损伤作用的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论和展望 |
| 结论 |
| 展望 |
| 附录(综述) |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）高氟对子代大鼠甲状腺及脑发育、脑功能的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验溶液的配制 |
| 1.4 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 观察指标及检测方法 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组子代大鼠生长发育变化 |
| 3.2 各组子代大鼠甲状腺变化 |
| 3.3 各组子代大鼠海马变化 |
| 3.4 各组子代大鼠大脑重量和大脑指数 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 缩略表语 |
| 附录二 综述 |
| 参考文献 |
| 附录三 致谢 |
| 附录四 个人简介 |
四、高浓度氟引起SH-SY5Y神经细胞中α7尼古丁受体水平降低（论文参考文献）
- [1]灯盏细辛及其活性成分防治阿尔茨海默病的药理作用研究进展[J]. 普元柱,苏灿. 中国中药杂志, 2020(23)
- [2]白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用[D]. 曾晓晓. 贵州医科大学, 2019(07)
- [3]黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞炎症反应的机制研究[D]. 何小静. 成都中医药大学, 2019(04)
- [4]氧化应激在β-淀粉样蛋白及氟化物引起的实验性中枢神经损伤病理过程中的作用及其分子机制[D]. 董阳婷. 贵州医科大学, 2018(07)
- [5]7-硝基吲唑拮抗过量氟暴露引起的SH-SY5Y细胞NO/NOS表达水平升高及毒性作用[D]. 邓明芬. 贵州医科大学, 2017(01)
- [6]铅致阿尔茨海默症样变神经毒性及对相关通路蛋白表达的影响[D]. 李星. 郑州大学, 2017(11)
- [7]Gx-50通过小胶质细胞受体α7 nAChR及TLR4介导的抗炎作用[D]. 史诗. 上海交通大学, 2015(02)
- [8]燃煤污染型地氟病区儿童智力及慢性氟中毒仔鼠学习记忆改变[D]. 魏娜. 贵阳医学院, 2014(07)
- [9]烟碱受体激动剂和拮抗剂对Aβ蛋白诱导神经细胞损伤的影响及机制研究[D]. 汪志刚. 暨南大学, 2011(10)
- [10]高氟对子代大鼠甲状腺及脑发育、脑功能的影响[D]. 王长婷. 贵阳中医学院, 2010(06)