一、小鼠卵黄囊内皮细胞的体外培养及其细胞因子表达的检测（论文文献综述）
李昕宇[1]（2021）在《小鼠Kupffer细胞的转分化研究》文中研究说明研究背景及目的:KCs是肝脏长期驻留的巨噬细胞,在慢性肝损伤期间KCs被激活并分泌促炎症和促纤维化细胞因子,作用于HSCs转分化形成肌成纤维细胞,最终产生胶原沉积,学术界广泛认可,HSCs是肝脏中胶原沉积的主要来源,也是肝纤维化病理过程的核心环节,而KCs除了能辅助HSCs参与纤维化以外,是否有其他途径产生胶原沉积尚未阐明。HSCs转分化成为肌成纤维细胞是肝纤维化的关键步骤,除了HSCs转分化以外,肝脏中还存在大量其他细胞转分化的现象,例如有实验研究证明了动物模型中肝细胞和胆管细胞相互转化。在肝外组织中的巨噬细胞,例如皮肤、心肌、肾脏等组织中巨噬细胞可更进一步转分化为纤维细胞并分泌胶原蛋白,和伤口损伤愈合修复密切相关。通过上述类比,提出KCs可以发生转分化的猜想,KCs转分化为类成纤维细胞后可能产生胶原沉积,甚至有可能参与肝组织损伤修复乃至肝纤维化形成。KCs的转分化理论提供了不同于传统纤维化理论着眼于HSCs的不同视角,把肝硬化的过程视为河流,HSCs的转分化可视作主干道,而KCs则可作为支流,提供了未来肝纤维化治疗的新思路和新靶点,同时给成纤维细胞提供了新的来源,完善了对肝纤维化的认识。材料和方法:首先本研究在两个不同的体外实验模型中进行平行实验:体外肝脏非实质细胞培养和精密肝切片培养。具体步骤如下:（1）构建特异性追踪KCs谱系的动物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追踪KCs谱系。（2）分离KCs后进行体外培养。（3）使用精密肝切片培养技术进行精密肝片培养。（4）使用免疫荧光成像分析培养后的KCs表达的蛋白。（5）利用多聚体免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。（6）实时定量PCR（Fludigm）。其次在小鼠肝切片中进行胶原沉积研究,使用氯膦酸盐脂质体耗竭KCs,进行精密肝切片培养,对肝切片进行Masson三色染色和RT-PCR基因表达分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培养技,实时定量PCR分析基因表达,使用LDH检测套盒定量分析肝片中细胞死亡情况。结果:（1）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs的特征基因以及调控其表达的转录因子表达下调。（2）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs中纤维化相关的基因以及调控其表达的转录因子表达上调。上述效应在非实质细胞培养和肝组织切片培养之间是高度一致的。（3）清除KCs后肝切片中胶原沉积减少。（4）Il-1r敲除小鼠的肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。（5）Nlrp3敲除小鼠肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。结论:KCs转分化在体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均有发生。KCs的转分化在体外培养中相对保守反应,转分化为类似成纤维细胞样的细胞,可以分泌胶原沉积相关蛋白。
李昀桥[2]（2021）在《小鼠胚胎生血内皮细胞时空与功能异质性研究》文中提出造血干细胞作为造血系统的基石,具有自我更新和多谱系造血分化的能力,在个体的生命周期中可以持续产生各种谱系的血细胞,并重建受到损伤的受体造血系统。然而在胚胎发育中,造血干细胞数量稀少,发育时间窗短,并且目前缺乏对其特异性的表面标志物的认识,这使得深入研究发育造血干细胞的特性变得十分困难。目前研究表明,小鼠的造血干细胞是由主动脉-性腺-中肾区（Aorta-gonad-mesonephros region,AGM）背主动脉中一种特殊的内皮细胞亚群—生血内皮细胞在胚胎期第10天通过内皮向造血转化过程产生的,这一过程目前可以通过谱系示踪技术及实时成像系统在体内条件下观察到,更加明确了造血的内皮起源。目前已知小鼠AGM区中生血内皮细胞数量在胚胎期第10天达到高峰,随后逐渐下降;在胚胎发育过程中表达CD47、CD61、Dll4,此外,还表达Flk1、VE-Cadherin等内皮分子,缺乏CD41,CD43及CD45等造血分子的表达。Runx1作为内皮向造血转化过程中重要的转录因子,同样是生血内皮细胞的一个重要的标志物。因此,研究人员构建了Runx1+23GFP转基因小鼠来富集生血内皮细胞,同样,Gfi1-Tomato转基因小鼠也被用来探究生血内皮细胞的内皮向造血转化过程,但被这些分子标记的生血内皮细胞的造血干细胞潜能并没有得到证实。通过精确的单细胞转录组分析并结合体内功能实验验证,我们准确地用新构建的Neurl3-EGFP转基因小鼠捕捉到了具有造血干细胞功能的生血内皮细胞,进一步的通过CD41-CD43-CD45-CD31+CD201+Kit+CD44+（PK44）组合高效捕获了这群生血内皮细胞,同时在单细胞水平的体外功能实验上发现PK44细胞具有三种分化潜能,分别是单内皮潜能（约23%）、内皮和造血双向分化潜能（约2.7%）及单造血潜能（约40%）。在本研究中,我们探究了PK44细胞在造血干细胞出现前后的时空异质性和功能异质性特征。首先,我们通过对胚胎期第10天AGM区PK44细胞的单细胞转录组测序数据进行生物信息学分析,发现PK44细胞可以进一步划分为三个不同的亚群,其中两个亚群在分子表型上有明显区别,分别表现出内皮或造血偏向的特征,因此我们将这三个群体定义为内皮偏向群体、中间态群体及造血偏向群体。接下来通过分析这三个群体间的差异表达基因（Differentially expressed gene,DEG）,运用流式细胞仪索引分选（index sorting）模式并结合体外单细胞水平的功能实验筛选候选的可以区分PK44细胞功能异质性的分子,最终筛选到CD93及CD146这两个内皮相关分子,通过结合Kit与CD93或CD146的表达可以将PK44细胞群体划分为内皮和造血偏向的群体并可以较高效的富集其中的造血偏向群体,这一结果进一步在单细胞水平上的体外功能实验中得到了验证。接下来,我们发现在卵黄囊中也可以检测到PK44细胞的存在,通过分析在造血干细胞出现前后不同时间点的AGM/caudal half及卵黄囊PK44细胞特征,我们发现卵黄囊中PK44细胞表现出与AGM区相似的发育动态和功能多样性:在绝对数量上均是在胚胎期第10天达到高峰,随后逐渐下降;体外功能方面卵黄囊PK44细胞与AGM区一样,同样具有三种分化潜能,但内皮和造血双向分化潜能及单造血潜能比例均小于AGM区。同时我们发现卵黄囊PK44细胞群体在体外与OP9-DL1基质细胞共培养后,无论是造血簇的大小还是数量,均远远小于同时间点的AGM区细胞。重要的是,卵黄囊中的PK44细胞群体在体外与OP9-DL1基质细胞共培养后展现出明确的长期多谱系造血重建能力。虽然具有体外功能的相似性,卵黄囊中的PK44细胞群体表现出与AGM区中PK44细胞群体不同的转录组特征。综上所述,我们的研究描绘了以PK44为代表的生血内皮细胞的时空特征,并揭示了卵黄囊中之前并不为人所知的具有造血干细胞潜能的生血内皮细胞群体。这些发现为今后深入研究造血干细胞的不同起源和发育的分子机制提供了基础。
贺健[3]（2021）在《单细胞转录组解析人类胚胎造血干细胞与巨核细胞的发育》文中认为哺乳动物血液系统为中胚层起源,在发育早期具有多位点起始、多谱系层级等特征。解析血液发生过程的细胞命运和分子机制对再生医学意义重大。造血干细胞（Hematopoietic stem cell,HSC）是个体血液系统形成的基础,并且通过自我更新（Self-renewal）和多系分化（Multilineage differentiation）维持个体整个生命周期的血液系统功能。一般认为,胚胎时期的造血干细胞起源于主动脉-性腺-中肾区域（Aorta-gonad-mesonephros,AGM）的背主动脉（Dorsal aorta）腹侧,由一群具有生血潜能的内皮细胞（Hemogenic endothelial cell,HEC）经内皮生血转化（Endothelial to hematopoietic transition,EHT）发育而来。目前关于造血干细胞起源的认识大部分都是基于小鼠,斑马鱼等模式动物的研究。由于早期人胚样本较难获得,以及细胞数量相对较少,人们对于人胚造血干细胞的发生过程仍然知之甚少,尤其是关于HSC前体细胞HEC的特征及其富集策略,亟待通过高效的方法和手段加以解析。本研究中,我们首先对胚胎背主动脉的细胞进行基于10x Genomics平台的单细胞转录组测序（sc RNA-seq）,分析鉴定出一群特异性高表达RUNX1的内皮细胞,功能富集分析该群体具有明显的RNA合成和代谢活跃等特征;通过对差异基因中表面标志分子的筛选,我们推测CD44具有在内皮细胞中富集生血内皮细胞的潜能。随后,我们对背主动脉区域的内皮细胞中CD44+和CD44-的群体进行富集测序（Single cell tagged reverse transcription sequencing,STRT-Seq）,发现CD44+主要富集了动脉内皮细胞,而CD44-主要富集了静脉内皮细胞,并且在动脉内皮细胞中分离出一群表达RUNX1,MYB和ANGPT1的生血内皮细胞,功能富集分析显示这群生血内皮细胞同样表现出显着的核糖体代谢等特征。随后,我们使用STRT-Seq对背主动脉中的CD34+CD45+的造血干祖细胞（HSPC）进行了测序,分析鉴定出一个淋系祖细胞和一个髓系祖细胞亚群,以及三个分别表现为明显动脉特征、细胞周期活跃以及相对成熟的造血干祖细胞亚群。联合所有的内皮细胞和造血干祖细胞群体,我们构建了胚胎背主动脉区内皮生血转化过程中细胞特化的路径,并发现一些基因,如EMCN,PROCR和RUNX1T1会在内皮向造血命运决定的时刻呈现瞬时上调表达的趋势。通过对极早期胚胎体进行测序分析,我们发现了一群同样兼具内皮和生血特征的早期生血内皮细胞。相比于背主动脉生血内皮细胞,早期生血内皮细胞缺乏动脉特征和Notch信号的富集。联合所有的内皮造血细胞进行分析,我们推测早期生血内皮细胞不需要经历类似于背主动脉生血内皮细胞的动脉化过程,而直接分化产生造血细胞。最后,利用配-受体对分析,我们解析了背主动脉区域不同间质,上皮和内皮细胞群体与生血内皮细胞的潜在互作关系,并提示了Notch,BMP4,TGF-beta等信号通路在生血微环境形成过程中潜在的调控作用。同样,我们利用sc RNA-seq解析了人胚发育过程中卵黄囊和胎肝中细胞异质性,明确了其中巨核细胞的转录组特征。通过比较分析,我们发现卵黄囊中的巨核细胞主要呈现糖酵解等特征,而胎肝中的巨核细胞主要呈现周期活跃等特征。进一步地,我们整合并分析了巨核细胞自身的异质性,发现其除了产生血小板的常规巨核细胞亚群,还包含了一群胞外基质特征明显的微环境形成巨核细胞,和一群CD14+免疫调节特性的巨核细胞。通过假时序分析,我们发现这些不同的巨核细胞亚群呈现两种分化模式并且具有不同的转录调控机制。总的来说,我们围绕造血干细胞发生过程和巨核细胞异质性,利用单细胞转录组测序解析了人胚早期造血系统发育的分子细胞图谱。我们首先在背主动脉区域捕获到一群兼具动脉内皮特征和生血特征的造血干细胞;进一步的筛选发现CD44是能够高效富集生血内皮的表面标志分子;随后我们又解析了背主动脉区域造血干祖细胞的异质性,并联合动脉内皮细胞和生血内皮细胞,绘制了内皮生血转化的细胞发育路径和探究了该过程中的分子变化规律;此外,我们在极早期的胚内发现了一群缺乏动脉内皮特征的早期生血内皮细胞;并且通过分析背主动脉区不同细胞群体与生血内皮细胞的互作,在分子水平上阐释了生血微环境异质性;最后,我们解析了巨核细胞的发育位点差异和群体的异质性,及其分化过程的调控模式。这些发现不仅填补了人胚早期血液系统发生过程的知识空缺,同时也为血液相关疾病的治疗尤其是体外血液再生策略提供重要理论基础。
黄涛[4]（2021）在《单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化》文中研究说明巨噬细胞在组织稳态和炎症中发挥着不可替代的作用,是机体固有免疫的重要组成成分,还行使着重要的组织特异性功能。同时,它们也参与了多种疾病的病理生理学过程,如肿瘤免疫、移植免疫及神经退行性病变等。长期以来,成体小鼠中巨噬细胞一直被认为来源于造血干细胞,但新近研究发现,小鼠大部分组织驻留型巨噬细胞都来源于胚胎时期卵黄囊的原始造血巨噬细胞或者多潜能的红系-髓系祖细胞（Erythro-myeloid progenitor,EMP）。尽管传统观念认为哺乳类动物血液系统的发育是非常保守的,但人体中是否如小鼠一样,存在非造血干细胞来源的组织驻留型巨噬细胞尚缺乏明确证据。理清人体中巨噬细胞的谱系关系,阐明不同谱系来源的巨噬细胞功能的异同,将有助于开发治疗重大疾病的新方法。近年来单细胞测序技术突飞猛进,尤其适用于研究存在高度异质性的造血系统及胚胎发育早期的细胞群体。因此,我们利用单细胞转录组测序技术精准解析了人胚期（孕8周内）不同发育阶段和组织位点的CD45+造血细胞。经过数据降维,我们一共识别并注释了15个造血群体。之后我们对这些造血群体的转录组特征和时空动力学进行了深度解析。我们的研究发现,与小鼠中组织驻留巨噬细胞来源于原始造血巨噬细胞或EMP类似,人体胚胎组织驻留巨噬细胞也存在两种非造血干细胞起源,分别是原始造血巨噬细胞和CD45+CD34+CD44+人体卵黄囊来源的髓系偏向祖细胞（Yolk-sac-derived myeloid-biased progenitor,YSMP）,其中YSMP可能是小鼠中EMP在人胚中的对应细胞。我们接下来还重点研究了头部小胶质细胞在人胚期的发育。我们发现头部的巨噬细胞具有明显的发育阶段异质性,CX3CR1、SALL1和P2RY12等特征基因的表达证实了其连续的特化过程。最后,我们对胚胎期、儿童期和成体期的巨噬细胞转录组数据做比较后发现,头部、肝脏中组织驻留型巨噬细胞的特化在胚胎期已经发生,而皮肤、肺中驻留型巨噬细胞的特化程度较轻甚至没有特化。总之,我们的研究跨越人体胚胎的多个发育阶段,覆盖多个组织器官,绘制了人胚早期造血细胞的发育图谱,明确了人胚巨噬细胞的多重起源,定义了人胚第一个具有多系分化潜能的造血祖细胞群体（YSMP）,解析了组织驻留型巨噬细胞特化过程中的关键分子特征。此外,我们的研究提供了目前最翔实可靠的人胚巨噬细胞单细胞转录组数据,这些数据可以为人体巨噬细胞的后续研究提供参考和依据。
王晓晴[5]（2020）在《Ash2l-1在小鼠卵黄囊早期造血中的功能和机制研究》文中指出组蛋白H3K4的甲基化修饰在调控基因表达的过程中发挥着至关重要的作用,H3K4的甲基化修饰主要是在甲基转移酶MLL/SET1家族蛋白催化作用下完成,在哺乳动物中,MLL/SET1家族蛋白包含六种蛋白复合体:MLL1/MLL、MLL2、MLL3、MLL4、SET1A、SET1B,这六种蛋白复合体具有4种相同的核心亚基:WDR5、RBBP5、ASH2L 和 DPY30,并称为 WRAD。其中的 ASH2L主要作用是促进H3K4的三甲基化修饰。我们之前的研究发现,在小鼠中,由于可变启动子的选择,Ash2l会产生两种不同亚型的mRNA,并进一步翻译成两种长度不同的蛋白亚基:ASH2L-1,ASH2L-2,但有关这两种亚型在小鼠胚胎发育中的具体作用还不清楚。本文主要阐述了Ash2l-1在小鼠早期胚胎造血和血管发育中的作用,有关Ash2l-2的作用还在进一步的研究中。当Ash2l-1缺失时,小鼠胚胎在E9.5-E10.5时发生致死,并发现E9.5时的卵黄囊上的血管和造血发生缺陷。E8.5卵黄囊的转录组测序结果显示,红细胞和血管发生相关基因的表达水平显着下调。在体外细胞实验中,发现Ash2l-1的缺失不影响小鼠胚胎干细胞的增殖和多能性,但是影响了胚胎干细胞向拟胚体的诱导,在Ash2l-1-/-的拟胚体中,出现搏动心肌的比例减少,红细胞和血管形成相关基因的表达明显下降。Ash2l-1-/-胚胎干细胞形成的畸胎瘤形态显着减小,重量降低,中胚层来源的红细胞数量也出现了明显的下降。在Ash2l-1缺失的胚胎卵黄囊组织和体外诱导拟胚体中发现H3K4me3水平出现了明显的下调,结合卵黄囊上H3K4me3的CUT&RUN结果,说明Ash2l-1可能是通过关键基因启动子区的H3K4me3修饰水平调控红细胞发育和成熟、血管发生和形成相关基因的表达。综合体内和体外实验结果,说明Ash2l-1的缺失下调了卵黄囊上基因的H3K4me3修饰水平并影响了小鼠胚胎的造血和血管发生。
范腾[6]（2020）在《复方青黄散调控HIF1A/GATA信号通路改善骨髓增生异常综合征红系造血》文中研究表明临床研究表明,复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征安全、临床有效。为进一步完善复方青黄散临床疗效、复方青黄散的药效学及作用机制研究,本研究在课题组研究基础上,对复方青黄散的临床疗效进行分析,并利用MDS转基因模型小鼠进行药效学和作用机制探讨。研究一 复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征的临床研究目的:分析复方青黄散治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效。方法:对2015年1月到2016年10月在中国中医科学院西苑医院血液科接受复方青黄散治疗1年半的61例骨髓增生异常综合征患者的临床资料进行回顾性分析。主要分析患者使用复方青黄散的临床疗效及影响疗效相关因素。患者一般资料描述采用统计描述,计数资料的描述采用均数±标准差表示,两组间比较采用t检验,计量资料采用秩和检验。结果:（1）61例MDS患者接受复方青黄散治疗后:16例获得血液学改善（16/61,26.2%）,40例获得血液学稳定（40/61,65.6%）,5例治疗无效（5/61,8.2%）,血液学进步率为91.8%。（2）61例患者治疗后血红蛋白水平（85.59±26.6g/L）较治疗前（79.23±21.28g/L）显着升高（p=0.016）。（3）61例患者治疗后中性粒细胞计数（1.14±0.63×109/L）较治疗前（1.01±0.53×109/L）升高,无显着差异（p=0.12）。（4）61 例患者治疗后血小板计数（43.67±37.79 × 109/L）较治疗前（44.35±38.23×109/L）无显着改变（p=0.93）。（5）61 例患者在治疗后 3 月（260ml）、6月（180ml）以及1年半（80ml）的输血量较治疗前（350ml）显着减少（p=0.0004）。（6）年龄小于60岁,染色体核型预后好和中等及IPSS-R低危和中危患者复方青黄散治疗后疗效较好。（7）61例患者使用复方青黄散后未见肝肾功能异常。结论:复方青黄散治疗MDS患者的血液学进步率为91.8%,复方青黄散对红系改善较为明显。研究二 骨髓增生异常综合征小鼠模型的建立及复方青黄散的药效学研究目的:为了解复方青黄散药效学,本研究建立骨髓增生异常综合征转基因小鼠模型并进行复方青黄散的药效学研究。方法:本研究利用M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ和TPM+移植小鼠的转基因MDS模型小鼠。M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ和TPM+小鼠发病后,将其骨髓移植到受体鼠体内（B6J和B6J*129）,TPM+移植小鼠给予多西环素食物诱导发病,M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ移植小鼠则等待发病。移植后监测小鼠移植物嵌合度。小鼠发病后将16只分为两组,分别给予复方青黄散或PBS灌胃治疗,每周5次,连续4周。复方青黄散给药小鼠药物剂量为4.2mg/kg/天,PBS组给予100ul/天。评价给药前、后小鼠血常规的变化,记录小鼠的生存时间。结果:（1）M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ和TPM+移植小鼠移植1月后移植物嵌合度检测:M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ移植小鼠CD45.2+细胞群所占百分比为76.19±3.21%,TPM+移植小鼠中,GFP+细胞群所占百分比为74.59±7.22%。（2）复方青黄散和PBS治疗组小鼠治疗前血常规基线。PBS组和复方青黄散组小鼠血红蛋白、红细胞、血小板的基线一致（p=0.32,0.19,0.55）。（3）复方青黄散和PBS组小鼠治疗后血常规变化。①治疗后第8,15,21天,复方青黄散组小鼠血红蛋白较PBS组小鼠血红蛋白显着升高（p=0.009,0.026,0.015）;②治疗后第8,15,21天,复方青黄散组小鼠红细胞较PBS组红细胞显着升高（p=0.005,0.012,0.004）;③治疗后第21天,复方青黄散组小鼠血小板较PBS组小鼠显着升高（p=0.029）。（4）复方青黄散组和PBS组小鼠生存时间:PBS对照组小鼠中位生存时间为47.5天;复方青黄散组小鼠记录至128天,仍未得到中位生存时间,复方青黄散治疗组小鼠的生存时间较PBS组显着延长（p=0.04）。结论:复方青黄散可改善MDS模型小鼠贫血、血小板减少,延长其生存时间。研究三 复方青黄散改善贫血的作用机制研究目的:为了解复方青黄散改善贫血的作用机制,本研究利用MDS小鼠和正常小鼠及MDS患者和正常人的细胞进行体内、外作用机制和分子作用机制研究。方法:（1）采用CCK-8法分析复方青黄散对正常小鼠和人的细胞以及MDS小鼠和人的细胞的细胞活力的作用;（2）采用流式细胞术分析MDS小鼠复方青黄散和PBS干预后骨髓造血干细胞和红细胞前体细胞分化;（3）采用克隆形成簇、红细胞爆发集落形成簇和红细胞集落形成簇分析,对MDS小鼠骨髓和正常小鼠骨髓进行体外培养,研究复方青黄散对红系分化的体外作用;（4）采用免疫蛋白电泳和定量PCR,探讨复方青黄散对MDS克隆和正常克隆的分子学作用机制。结果:（1）复方青黄散对MDS小鼠细胞、MDS患者细胞、正常小鼠和人脐带血细胞无细胞活力抑制作用,可促进MDS-L细胞分化。（2）MDS小鼠给予复方青黄散治疗后,红细胞前体细胞群Ⅰ、Ⅱ较PBS组显着增加（p=0.014,p=0.031）,成熟红细胞群Ⅳ较PBS组显着减少（p=0.039）;复方青黄散组正常造血干细胞群较PBS组显着增加（p=0.006）,复方青黄散组小鼠脾脏较PBS组显着减小（p=0.032）。（3）体外TPM+骨髓移植小鼠骨髓细胞、TPM+、TPM-小鼠骨髓细胞和正常小鼠骨髓的BFU-E和CFU-E培养结果显示:复方青黄散组BFU-E和CFU-E的克隆计数和细胞数均较PBS组增加（p<0.05）。（4）正常小鼠给予复方青黄散治疗后,小鼠的LSK,MPP2,MPP3,MPP4及Pre-CFU-E、Pro-E+CFU-E细胞群均较PBS组增加（p<0.05）,两组小鼠的脾脏重量和血常规改变无差异（p>0.05）。（5）复方青黄散可下调M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ细胞HIF1A蛋白及下游Binp3,Binp31,Ldha,Hk2,Ddit4基因表达,上调M11PTD/WT/Runx1Δ/Δ细胞P53、MDM2、VHL蛋白的表达。（6）复方青黄散可上调正常细胞GATA1、GATA2、GATA3蛋白表达。结论:复方青黄散通过促进MDS克隆和正常细胞的红系分化而改善贫血。复方青黄散改善贫血的分子作用机制为:下调MDS克隆HIF1A表达,发挥抑制MDS克隆作用,使MDS克隆向正常红系分化;上调正常细胞的GATA1、GATA2、GATA3,促进正常细胞的红细胞系分化。
唐琳[7]（2020）在《人参皂苷Rg1对小鼠骨髓内皮祖细胞体外增殖的影响及其作用机制的研究》文中提出目的建立小鼠骨髓内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）系作为细胞模型,采用RNA-seq技术结合生物信息学手段,分析人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）对小鼠骨髓EPCs增殖影响的差异表达基因及其主要意义,探讨人参皂苷Rg1对小鼠骨髓EPCs促增殖作用的分子机制,为利用人参皂苷Rg1治疗内皮损伤性疾病提供分子生物学水平依据,同时寻找促进EPCs体外生长的关键靶点,为培养数量充足、富有活力的EPCs提供新思路。方法1.采用全骨髓差速贴壁培养法与二次酶消化法相结合,分离和纯化小鼠骨髓EPCs。通过形态学观察、细胞表面抗原表达率检测,进行所获EPCs的细胞鉴定。2.在EPCs的传代培养过程中,选择增殖能力强的细胞,通过有限稀释培养获得单克隆细胞系,并进行传代培养扩增。通过形态学观察、生长特性观察、细胞表面抗原检测、核型分析、体外成血管实验,进行所建细胞系MBMME2的鉴定。3.取小鼠骨髓EPCs的传代细胞和细胞系MBMME2细胞,每种细胞分为7个组,即4个人参皂苷Rg1处理组（终浓度分别为5、10、15、20μmol/L）,空白对照组、溶剂对照组（1.25‰乙醇）和阳性对照组（10-8μmol/L雌激素）,培养96 h,用MTT法检测细胞增殖水平。取小鼠骨髓EPCs传代细胞,按上述分为7个组,培养3周,观察集落形成能力。以上每种细胞分为10μmol/L人参皂苷Rg1组和溶剂对照组,培养96 h,用流式细胞术进行细胞周期分析。4.将MBMME2细胞分为4个组,即3组人参皂苷Rg1处理组（终浓度分别为5、10、20μmol/L）和溶剂对照组,培养96 h,收集总RNA样本,构建cDNA文库、HiSeq测序,建立转录组数据库。经差异表达分析,筛选出差异表达基因（DEGs）,并以DEGs为对象进行基因功能注释、信号通路富集分析,以及蛋白质互作网络分析。根据RNA-seq分析结果,选出20个DEGs进行RT-qPCR验证。结果1.分离和纯化所获小鼠骨髓内EPCs贴壁生长良好,细胞多为短梭形或椭圆形。细胞传代接种后,早期形成集落,逐渐长大,而至汇合。较大集落中心的细胞重叠,外围细胞为单层,形态清晰。单层细胞密集时,呈典型的铺路石样排列。所获EPC传代细胞的表面抗原阳性细胞率检测显示,CD90为97.1%,CD133为83.4%,CD34为90.8%,CD29为23.5%,CD45为8.8%。2.本研究建立的细胞系MBMME2为连续传代细胞系,具有EPCs的一般生物学特征。细胞贴壁生长速率高,对血清的依赖性低,5%FBS的生长培养基能维持细胞的快速增殖。细胞增殖指数为44.8%～47.9%。流式细胞术检测显示,CD90、CD133、CD34、CD31和CD45的阳性细胞率依次为99.7%、36.4%、96.8%、97.5%和0.1%,并得到细胞免疫荧光染色结果的支持。染色体核型多为三倍体。体外成血管实验显示,细胞能排列成多个管横截面样的网络状结构。本细胞系传代方便,大集落和融合层上浮的细胞即能接种培养。3.在人参皂苷Rg1浓度为5～20μmol/L的条件下培养96 h后,小鼠骨髓EPCs的传代细胞和细胞系MBMME2细胞的MTT实验结果显示,两种细胞的吸光值均随人参皂苷Rg1浓度增高表现为先升后降。10μmol/L人参皂苷Rg1组的MTT吸光值最大,5～15μmol/L范围内各组的MTT吸光值均显着高于对照组,20μmol/L浓度组与对照组之间的吸光值差异无显着性意义。集落形成实验显示,5～20μmol/L人参皂苷Rg1各组的EPC集落生成能力都显着高于对照组;10μmol/L组的集落生成率最高,显着高于其它各组。10μmol/L人参皂苷Rg1组的细胞增殖指数显着高于对照组。4.RNA-seq数据显示,与对照组相比,3个人参皂苷Rg1处理组都有许多基因显着差异表达。DEGs功能富集分析表明,DEGs主要与细胞通讯、分子功能调控、发育过程、细胞膜受体、细胞外基质、离子转运等相关,涉及的主要信号通路包括细胞周期、PI3K-Akt、Wnt、MAPK、雌激素、细胞分化等通路。RT-q PCR结果表明,Celsr3、Mapk4、Col3a1、Nos3、Mmp9、Cdkl3、Notch1、Grk4、Bnip3、Mapk7、Mapk11、Mapk8、Stat5a、Gper1、Bnip1、Cdk20基因的表达显着上调,显着下调P21、Casp12、Casp4、Casp6的表达显着下调,支持RNA-seq的结果,这些基因与细胞凋亡和增殖调控等功能密切相关。蛋白互作网络分析显示,Cdc20、CDK4、CDK6、P21、Bub1b等差异基因编码的蛋白处于一些信号转导网络中的重要位置,这些网络主要与细胞周期、细胞衰老、细胞凋亡、细胞分化及癌症等相关。结论1.采用细胞克隆选择和长期自然传代培养相结合,首次成功建立小鼠骨髓内皮祖细胞系MBMME2。2.在体外培养条件下,人参皂苷Rg1能促进小鼠骨髓内皮祖细胞传代细胞及其细胞系细胞的增殖,并呈明显的浓度依赖性;浓度过高时,其促增殖作用减弱。3.转录组研究揭示,人参皂苷Rg1对MBMME2细胞体外生长的影响机制涉及许多基因表达的上调和下调,这些基因主要参与Jak-Stat、MAPK、Wnt、PI3K-Akt、细胞分化及雌激素等信号通路。
杨最[8]（2020）在《地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究》文中提出地中海贫血症是世界上最常见和发生率最高的一种单基因遗传病。目前临床上地中海贫血症没有可以普遍推广的根治方法。产前诊断在地中海贫血症的预防上有重要贡献。由于产前诊断技术的局限,导致地中海贫血症稀有突变类型不能被检测,不能完全避免地中海贫血症患儿出生。而外显子测序技术有可能弥补这一缺点,因此我们运用外显子测序技术对地中海贫血症基因携带者羊水样本进行检测,既能验证临床产前诊断结果,同时也是为了发现新的变异位点。我们通过外显子测序筛选出1344个共有变异位点。通过对这些共有变异位点进行GO富集分析筛选了26个term,涵盖膜的整体成分、跨膜信号受体活性、细胞外基质结构成分、钙离子结合等;通过KEGG富集分析筛选了13条信号通路,包括糖酵解/糖异生、ECM受体相互作用、补体与凝血级联反应等。这些基因和信号通路可能与地中海贫血症的发病机制密切相关,其结果需要进一步验证。另一方面,珠蛋白基因缺陷影响红细胞发育过程。红细胞的发育起源于造血干细胞,对造血干细胞的机理研究是根治地中海贫血症等一系列血液疾病的潜在突破口。我们利用磁珠分选和流式分选的方法从脐带血样本分离纯化CD34阳性细胞,在体外运用多种细胞因子成功对造血干细胞进行诱导分化,为体外培养造血干细胞模拟体内的造血过程奠定基础。
甘晓文[9]（2020）在《人胎盘合成的血清淀粉样蛋白A1（SAA1）在分娩中的作用》文中进行了进一步梳理研究目的早产是导致新生儿死亡的主要原因,防治早产仍是产科面临的严峻考验。早产的原因复杂,其高危因素包括全身或局部感染、患有妊娠合并症及并发症、双胎妊娠、前次早产史、宫颈子宫手术史等,但仍有30%左右的早产病因尚未明确,其主要原因之一是人类分娩启动机制尚未完全阐明,因此阐明人类分娩启动的具体机制可以为预测及治疗早产提供新的思路。研究发现妊娠组织的无菌性炎症不仅存在于无明显诱因和无感染证据的早产,同时还是正常分娩启动机制中的重要一环。血清淀粉样蛋白A1（SAA1）是一种急性期反应蛋白,主要由肝脏合成,参与调节炎症反应。近年来发现许多肝外组织也具有合成分泌SAA1的能力,我们既往的研究发现,胎膜合成的SAA1可以在胎膜局部引起炎症反应从而参与分娩,但胎盘是否能够表达和分泌SAA1并参与分娩过程目前尚不清楚。本研究主要目的为明确孕晚期胎盘是否表达和分泌SAA1及其在早产及正常分娩启动的作用及其机制。研究方法本课题采用人胎盘组织和原代培养人胎盘滋养细胞作为研究模型,利用RNA测序、原位杂交、免疫组化、免疫荧光、实时荧光定量PCR、蛋白印迹杂交、ELISA、受体及信号通路抑制剂和小鼠腹腔注射等技术,研究了人胎盘和原代人胎盘滋养细胞SAA1的表达、分泌及调控;研究了SAA1对胎盘滋养细胞促炎性细胞因子和前列腺素合成关键酶环氧合酶-2（COX-2）表达的调控及机制;研究了主要促分娩因子对胎盘滋养细胞SAA1的表达和分泌的影响,并利用小鼠模型,研究了小鼠胎盘SAA1表达及注射SAA1是否能引起早产。研究结果1.体内存在四种SAA基因,分别为SAA1、SAA2、SAA3、SAA4,其中SAA1和2表达蛋白为急性期反应蛋白,SAA3为假基因,而SAA4为细胞固有型表达基因。足月胎盘滋养细胞转录组测序结果表明,SAA4在胎盘滋养滋养细胞表达量极低,SAA1和SAA2在胎盘合体滋养层细胞均有表达,但以SAA1表达量最高。原位杂交、免疫组织化学及免疫荧光染色结果显示,足月胎盘绒毛组织可以检测到SAA1 mRNA及蛋白,并主要分布于合体滋养细胞层。实时荧光定量PCR、ELISA测定发现,体外培养的人原代胎盘滋养细胞可以表达SAA1 m RNA和分泌SAA1,并随滋养细胞的合体化而显着增加;2.SAA1可以诱导人胎盘合体滋养细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-8、TNF-α和前列腺素合成关键酶COX-2的表达,并促进IL-8、TNF-α、PGF2α的分泌,但不影响人胎盘滋养细胞CRH及芳香化酶的表达;3.TLR4受体阻断剂（CLI095）、NFκB阻断剂（JSH-23）、p38阻断剂（SB203580）、ERK1/2阻断剂（PD98059）和JNK阻断剂（SP600125）均可不同程度地阻断SAA1对IL-8、TNF-α和COX-2表达的诱导作用。4.皮质醇、脂多糖（LPS）及TNF-α均可以诱导人胎盘合体滋养细胞SAA1表达和分泌;5.经过产程的胎盘组织SAA1 m RNA及蛋白水平明显高于未经过产程的胎盘组织,并伴有血清SAA1水平的升高;绒毛膜羊膜炎导致的早产血清SAA1水平进一步升高。6.免疫组织化学染色表明,孕晚期小鼠胎盘及卵黄囊膜组织均可表达SAA1;腹腔注射LPS可以引起早产,并伴有胎盘及胎膜SAA水平升高;腹腔注射SAA1也可以引起早产,并增加胎盘组织的IL-1β、TNF-α和COX-2蛋白的表达。结论本课题首次证明足月人胎盘组织可以表达和分泌SAA1,而且其表达随着滋养细胞的合体化而显着增加,促分娩因子如皮质醇、LPS和促炎性细胞因子均可以诱导人胎盘滋养细胞SAA1的表达,分娩时胎盘组织和母体血浆SAA1水平显着增加。SAA1可以通过结合TLR4受体并激活NFκB及MAPK信号通路诱导胎盘合体滋养细胞促炎性因子IL-8、TNF-α和COX-2的表达,提示SAA1可能通过诱导胎盘促炎性因子的表达和前列腺素的合成参与分娩。小鼠腹腔注射SAA1可以促进胎盘促炎性因子的表达并诱导早产发生,动物实验为SAA1参与分娩过程提供了进一步证据。
吕萃[10]（2020）在《多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究》文中提出从多能干细胞诱导分化出可移植、有功能的血液及免疫细胞一直是再生医学领域的研究热点和难点。本文第一部分证明小鼠胚胎干细胞分化来源、体内成熟的T细胞可以结合CAR-T技术改造实现体内清除肿瘤的目的,第二部分初步实现诱导小鼠胚胎干细胞获得可移植的髓系祖细胞种子,移植后可在体内短期再生髓系细胞（包括粒细胞、单核-巨噬细胞）。本研究为再生T细胞以及可移植髓系细胞的转化研究提供了技术借鉴。嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）疗法已成为临床上治疗血液肿瘤的有效手段。通常CAR-T细胞是通过分离患者外周血来源的T细胞在体外进行基因编辑而制备,但是患者自身的T细胞数量有限且经常出现功能异常或耗竭,因此需要探索T细胞新的来源。本研究基于课题组已开发的定向诱导T细胞技术,利用Runx1-Hoxa9条件性表达的多能干细胞系诱导分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖细胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,从脾脏中分离出再生的T细胞（induced T cells,iT）,通过将iT细胞感染CD19-CAR逆转录病毒制备CD19-CAR iT细胞。为了验证CD19-CAR iT细胞在体内针对B淋巴瘤细胞的杀伤功能,本研究首先通过移植表达荧光素酶（luciferase）的B淋巴瘤细胞（Ka539-luciferase）构建了基于C57BL/6的肿瘤负荷鼠模型,随后分别将CD19-CAR iT细胞和Ctrl-CARiT细胞（阴性对照）过继移植到肿瘤模型中,流式检测发现CD19-CAR iT细胞可以持久抑制外周血中CD19+B细胞的产生,这表明了其具有针对特异抗原的直接杀伤能力。同时小鼠活体成像实验证实CD19-CAR iT细胞可以有效缓解肿瘤模型鼠的肿瘤负荷,并且相比于对照组,经过CD19-CAR iT细胞治疗的肿瘤鼠能够显着延长生存时间（>70天）。其次,CD19-CAR iT细胞在体内接受到CD19抗原刺激后能够快速增殖,并且可被大量激活（CD44+CD62L-）,从侧面印证了 CD19-CARiT细胞功能的有效性。以上结果说明CD19-CAR iT细胞可以有效清除B淋巴瘤细胞,也验证了由多能干细胞诱导再生的iT细胞可以用于制备CAR-T细胞,这为T细胞疗法的新细胞来源提供了技术参考。与此同时,髓系细胞,特别是粒细胞和单核-巨噬细胞,是天然免疫系统重要成员,在吞噬、杀菌和抗病原体感染中发挥关键作用。因此,再生有功能的髓系细胞对移植和化疗后的抗感染治疗具有重要的临床意义。本研究发现,Runx1-Hoxa10二因子条件性诱导表达的mES细胞系（iR10 mESCs细胞系）可诱导分化获得可移植的造血细胞种子,移植后体内再生出髓系细胞,包括粒细胞和单核-巨噬细胞。具体而言,首先通过形成拟胚体（Embryoid bodies,EBs）的方式模拟胚胎发育早期阶段,随后通过诱导Runx1和Hoxa10的表达和添加特定造血细胞因子进行培养获得诱导型生血内皮细胞（iHECs,CD31+CD41lowCD45-c-Kit+CD201hi）。生成的iHECs再和OP9-DL1基质细胞共培养获得诱导型造血祖细胞（induced hematopoietic progenitor cells,iHPCs）,这些 iHPCs 植入半致死辐照后的Rag1-/-小鼠后成功再生髓系细胞（CD11b+）。PCR测序结果证明体内再生的髓系细胞确实插入了目的基因Runx1和Hoxa10。此外,在骨髓和脾脏组织中均检测到再生的髓系细胞,包括粒细胞（CD11b+Gr1+）、单核细胞（CD11b+Gr1-F4/80-）和巨噬细胞（CD11b+F4/80+）。最后,iHPCs在移植入半致死辐照后的野生型受体鼠后也成功再生髓系细胞。结合再生髓系细胞的功能实验结果,本研究将为再生人髓系细胞提供技术参考,也有望为临床上抗感染细胞疗法等提供新的细胞来源。
二、小鼠卵黄囊内皮细胞的体外培养及其细胞因子表达的检测（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、小鼠卵黄囊内皮细胞的体外培养及其细胞因子表达的检测（论文提纲范文）
（1）小鼠Kupffer细胞的转分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 前言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肝脏概述 |
| 1.2 肝脏纤维化 |
| 1.2.1 肝细胞的死亡与凋亡 |
| 1.2.2 肝纤维化发展 |
| 1.2.3 肝纤维化中肌成纤维细胞的组成 |
| 1.3 KCs在肝脏学中的研究进展 |
| 1.3.1 KCs的起源 |
| 1.3.2 KCs在肝脏结构中的定位 |
| 1.3.3 KCs的免疫作用 |
| 1.3.4 KCs的异质性 |
| 1.3.5 KCs的可塑性 |
| 1.3.6 KCs与肝脏疾病 |
| 1.4 细胞谱系追踪技术 |
| 1.4.1 细胞谱系追踪技术的基本原理 |
| 1.4.2 细胞谱系追踪的标记方法 |
| 1.4.3 细胞谱系追踪在肝脏研究中的应用 |
| 1.4.4 细胞谱系追踪的未来 |
| 1.6 细胞的转分化 |
| 1.6.1 细胞转分化概述 |
| 1.6.2 自然发生的转分化 |
| 1.6.3 实验性转分化 |
| 1.6.4 肝脏中的转分化 |
| 1.6.5 转分化应用于再生医学的优点和局限性 |
| 第2章 KCs在体外非实质细胞培养过程中的形态和表型变化研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 2.2.4 主要实验试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 非实质细胞分离 |
| 2.3.2 收集培养的非实质细胞 |
| 2.3.3 多聚体免疫共沉淀 |
| 2.3.4 RNA提取 |
| 2.3.5 基因表达分析 |
| 2.3.6 免疫荧光成像 |
| 2.3.7 统计学方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 精密肝切片培养实验过程中,KCs特征性基因表达下调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 3.2.4 主要实验试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 在精密肝切片培养和体外非实质细胞培养实验中,KCs中纤维化相关基因表达分析研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 KCs在培养过程中转录因子基因表达研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 KCs与肝片中胶原沉积的初步探索研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 主要实验耗材与设备 |
| 6.1.4 主要实验试剂配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 KCs耗竭 |
| 6.2.2 肝片培养、基因分析等方法同前所述 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 本实验创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）小鼠胚胎生血内皮细胞时空与功能异质性研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1、造血干细胞发育的研究进展 |
| 1.1 原始造血 |
| 1.2 短期定向造血 |
| 1.3 以造血干细胞生成为标志的定向造血 |
| 1.3.1 以造血干细胞生成为标志的定向造血产生的位点 |
| 1.3.2 可能产生造血干细胞的其他造血位点 |
| 1.3.3 造血干细胞前体 |
| 1.4 造血干细胞发育微环境 |
| 2、生血内皮细胞的研究进展 |
| 2.1 生血内皮细胞的起源 |
| 2.2 生血内皮细胞的分子特征及功能异质性 |
| 2.3 生血内皮细胞的内皮向造血转化过程机制 |
| 3、流式细胞术的研究进展 |
| 3.1 流式细胞术的发展史 |
| 3.2 流式index sorting技术的应用 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验小鼠 |
| 1.1.2 耗材与试剂 |
| 1.1.2.1 基础试剂 |
| 1.1.2.2 流式抗体 |
| 1.1.2.3 细胞因子 |
| 1.1.3 仪器与设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 体外功能实验 |
| 1.2.1.1 小鼠胚胎取材 |
| 1.2.1.2 胚胎组织单细胞化 |
| 1.2.1.3 流式抗体标记及分选 |
| 1.2.1.4 基质细胞共孵育培养 |
| 1.2.1.5 免疫组织化学染色 |
| 1.2.1.6 集落形成实验 |
| 1.2.2 体内功能实验 |
| 1.2.2.1 基质细胞共孵育培养 |
| 1.2.2.2 移植实验 |
| 1.2.2.3 外周血嵌合率检测 |
| 1.2.2.4 多组织多系嵌合率检测 |
| 1.2.2.5 二次移植 |
| 1.2.3 单细胞RNA-seq文库的构建 |
| 1.2.4 单细胞RNA-seq数据质量控制 |
| 1.2.5 细胞类型检测与降维 |
| 1.2.6 差异表达基因(Differentially expressed gene,DEG)与群体表面标志物的鉴定 |
| 1.2.7 基因本体(Gene ontology,GO)分析 |
| 1.2.8 数据处理 |
| 1.2.9 数据分析及实验人员分工 |
| 第二章 实验设计 |
| 第三章 AGM区中PK44细胞的功能异质性研究 |
| 3.1 AGM区中PK44细胞的单细胞转录组特征 |
| 3.2 富集AGM区PK44群体中的造血偏向群体 |
| 第四章 AGM区及卵黄囊中PK44细胞的发育动态 |
| 第五章 AGM区及卵黄囊中PK44细胞的体内外功能差异 |
| 第六章 卵黄囊中PK44细胞的转录组特征 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（3）单细胞转录组解析人类胚胎造血干细胞与巨核细胞的发育（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 早期人胚背主动脉的细胞异质性解析 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验设计 |
| 1.3 实验材料 |
| 1.3.1 实验样本的获取 |
| 1.3.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 人胚背主动脉的解剖分离 |
| 1.4.2 单细胞悬液的制备 |
| 1.4.3 流式细胞分选和10x Genomics建库测序 |
| 1.5 数据分析和处理 |
| 1.5.1 测序原始数据预处理 |
| 1.5.2 表达矩阵降维和细胞聚类 |
| 1.5.3 细胞类型识别和差异表达分析 |
| 1.5.4 细胞群体的相关性分析 |
| 1.6 实验结果 |
| 第二章 人胚生血内皮细胞的富集及其转录组特征分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验设计 |
| 2.3 实验材料 |
| 2.3.1 实验样本的获取 |
| 2.3.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 实验样本的获取 |
| 2.4.2 流式细胞分选及分析 |
| 2.4.3 STRT-seq建库及测序 |
| 2.5 数据处理和分析 |
| 2.5.1 测序原始数据预处理 |
| 2.5.2 降维和聚类,以及差异分析 |
| 2.5.3 基因表达的相关性分析 |
| 2.6 实验结果 |
| 2.6.1 内皮细胞中CD44~+和CD44~-群体的分选及特征 |
| 2.6.2 RUNX1~+生血内皮细胞的特征鉴定 |
| 2.6.3 生血内皮细胞的特征基因分析 |
| 第三章 人胚背主动脉造血干祖细胞及内皮造血转化的解析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验设计 |
| 3.3 实验材料 |
| 3.3.1 实验样本的获取 |
| 3.3.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 组织分离,单细胞悬液制备,流式分选和建库 |
| 3.4.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 3.4.3 内皮生血转化假时序分析 |
| 3.4.4 基因表达模式分析 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 人胚背主动脉中造血干祖细胞的转录组异质性 |
| 3.5.2 内皮细胞和造血干祖细胞的联合分析 |
| 3.5.3 内皮造血转化过程及其特征规律 |
| 第四章 极早期胚胎体生血内皮的转录组水平解析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验设计 |
| 4.3 实验材料和分析方法 |
| 4.3.1 实验样本的获取和单细胞建库 |
| 4.3.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 4.3.3 数据分析方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 人胚极早期发育阶段的细胞异质性解析 |
| 4.4.2 极早期胚胎内皮和造血细胞异质性解析 |
| 4.4.3 极早期生血内皮和背主动脉生血内皮的差异比较 |
| 第五章 人胚早期背主动脉生血微环境的转录组解析 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验设计 |
| 5.3 实验材料和分析软件 |
| 5.3.1 数据样本 |
| 5.3.2 分析软件 |
| 5.4 数据分析方法 |
| 5.4.1 配-受体互相作用分析 |
| 5.4.2 配-受体基因的通路富集分析 |
| 5.4.3 细胞群体互作强度的可视化 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.5.1 背主动脉生血内皮与微环境细胞群体互作概览 |
| 5.5.2 内皮细胞群体与生血内皮的互作分析 |
| 第六章 人胚早期巨核细胞的异质性解析 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验设计 |
| 6.3 实验材料和分析软件 |
| 6.3.1 数据样本 |
| 6.3.2 实验试剂、设备和分析软件 |
| 6.4 实验和数据分析方法 |
| 6.4.1 卵黄囊和胎肝的单细胞悬液制备 |
| 6.4.2 流式分选和单细胞建库 |
| 6.4.3 测序数据的预处理和质控 |
| 6.4.4 数据批次校正 |
| 6.4.5 降维,聚类和差异分析 |
| 6.4.6 巨核细胞分化假时序分析 |
| 6.5 实验结果 |
| 6.5.1 人胚卵黄囊细胞群体的鉴定 |
| 6.5.2 人胚胎肝细胞群体的鉴定 |
| 6.5.3 巨核细胞群体的鉴定和差异比较 |
| 6.5.4 巨核细胞群体异质性分析 |
| 6.5.5 巨核细胞的分化路径分析 |
| 第七章 结论和展望 |
| 7.1 人类胚胎造血干细胞产生过程的单细胞解析 |
| 7.2 人类胚胎巨核细胞的发育分化规律 |
| 7.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（4）单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 巨噬细胞的分类 |
| 1.1.1 巨噬细胞的传统分类 |
| 1.1.2 单核吞噬系统对巨噬细胞的分类 |
| 1.1.3 巨噬细胞的二元分类 |
| 1.1.4 巨噬细胞的多元分类 |
| 1.1.5 巨噬细胞的其它分类 |
| 1.2 巨噬细胞的起源 |
| 1.2.1 原始造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.2.2 瞬时定向造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.2.3 定向造血对巨噬细胞的贡献 |
| 1.3 巨噬细胞的特化 |
| 1.3.1 内在因素对巨噬细胞特化的影响 |
| 1.3.2 微环境对巨噬细胞特化的影响 |
| 1.4 巨噬细胞的功能 |
| 1.4.1 巨噬细胞的免疫功能 |
| 1.4.2 巨噬细胞的组织特异性功能 |
| 1.5 人类巨噬细胞的研究现状 |
| 1.5.1 人类胚胎造血发育简介 |
| 1.5.2 人类巨噬细胞的发育 |
| 1.6 单细胞转录组测序 |
| 1.6.1 单细胞测序平台的进展 |
| 1.6.2 单细胞转录组数据分析方法的进展 |
| 1.6.3 单细胞转录组测序在巨噬细胞研究中的应用 |
| 1.7 研究内容及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验样本 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 抗体列表 |
| 2.1.4 软件列表 |
| 2.1.5 主要设备与器材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 组织分离与单细胞化 |
| 2.2.2 单细胞流式分析与分选 |
| 2.2.3 造血祖细胞体外培养 |
| 2.2.4 单细胞转录组文库的构建及测序 |
| 2.2.5 原始数据预处理及质控 |
| 2.2.6 细胞群体识别及降维分析 |
| 2.2.7 差异表达基因分析与生物标志识别 |
| 2.2.8 SCENIC与GSEA分析 |
| 2.2.9 假时序分析 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 人胚早期造血细胞的时空转录图谱 |
| 3.1.1 实验流程和测序数据质控 |
| 3.1.2 人胚早期造血细胞的细胞类型及其分子特征 |
| 3.1.3 人胚早期造血群体的差异比较 |
| 3.1.4 STRT-seq测序数据的验证 |
| 3.2 人胚早期造血祖细胞的特征解析 |
| 3.2.1 人胚早期造血祖细胞的转录调控 |
| 3.2.2 人胚早期造血祖细胞的时间动力学分析 |
| 3.2.3 YSMP与HSPC的差异比较 |
| 3.3 YSMP在胚肝中的发育及其鉴定 |
| 3.3.1 YSMP的发育路径解析 |
| 3.3.2 YSMP发育的分子决定机制 |
| 3.3.3 YSMP的功能验证 |
| 3.4 人胚巨噬细胞的多重起源 |
| 3.4.1 巨噬细胞及相关群体的特征解析 |
| 3.4.2 人胚巨噬细胞的多重起源解析 |
| 3.5 人胚巨噬细胞在不同组织中的特化 |
| 3.5.1 人胚小胶质细胞的起源和特化 |
| 3.5.2 人胚巨噬细胞在肝脏的特化 |
| 3.6 人胚TRM与经典TRM的比较 |
| 3.6.1 人胚TRM与经典TRM的联合分析 |
| 3.6.2 人胚TRM与经典TRM的差异比较 |
| 第四章 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 作者在学期间取得的学术成果 |
| 主要简历 |
| 致谢 |
（5）Ash2l-1在小鼠卵黄囊早期造血中的功能和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 小鼠胚胎早期造血的发生 |
| 1.1.1 小鼠早期胚胎发育中的重要事件 |
| 1.1.2 卵黄囊的发育过程 |
| 1.1.3 原始造血 |
| 1.1.4 永久造血 |
| 1.1.5 红细胞的起源 |
| 1.1.6 造血发生过程中的分子调控 |
| 1.2 Ash2l的研究 |
| 1.2.1 组蛋白H3K4的甲基化修饰 |
| 1.2.2 SET1/MLL复合体 |
| 1.2.3 WRAD |
| 1.2.4 MLL家族对哺乳动物胚胎发育以及对疾病的影响 |
| 1.2.5 Ash2l的研究进展 |
| 1.3 本论文的研究目的和意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 其他试剂的配制 |
| 2.1.3 培养基的配方 |
| 2.1.4 本实验所使用的耗材与仪器 |
| 2.1.5 本实验所使用的抗体 |
| 2.1.6 本实验所使用的引物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物饲养 |
| 2.2.2 构建Ash2l-1敲除小鼠 |
| 2.2.3 鉴定小鼠和细胞基因型 |
| 2.2.4 提取mRNA(RNAzol裂解方法） |
| 2.2.5 反转录 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR |
| 2.2.7 提取总RNA(RNAzol裂解方法） |
| 2.2.8 免疫印迹 |
| 2.2.9 MEF细胞(小鼠成纤维细胞)的分离、培养及冻存 |
| 2.2.10 mESCs(小鼠胚胎干细胞)的建系与培养 |
| 2.2.11 拟胚体的诱导 |
| 2.2.12 石蜡切片 |
| 2.2.13 HE染色 |
| 2.2.14 免疫荧光 |
| 2.2.15 畸胎瘤实验 |
| 2.2.16 血红蛋白着色实验 |
| 2.2.17 CUT&RUN |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 Ash2l-1敲除小鼠在胚胎发育期间致死 |
| 3.2 Ash2l-1的缺失导致小鼠胚胎的器官和卵黄囊发生异常 |
| 3.3 Ash2l-1参与了血管和造血发生相关基因的调控 |
| 3.4 Ash2l-1的缺失不影响小鼠胚胎干细胞的多能性 |
| 3.5 Ash2l-1的缺失导致拟胚体分化异常 |
| 3.6 Ash2l-1的缺失导致畸胎瘤异常 |
| 3.7 Ash2l-1可能是通过影响基因的H3K4me3调控基因的表达 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 总结与讨论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（6）复方青黄散调控HIF1A/GATA信号通路改善骨髓增生异常综合征红系造血（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 复方青黄散治疗MDS的临床研究 |
| 1. 研究内容 |
| 1.1 研究目的 |
| 1.2 病例来源 |
| 1.3 研究方案 |
| 1.4 病例选择 |
| 1.5 纳入和排除标准 |
| 1.6 治疗方法 |
| 1.7 疗效评价标准 |
| 1.8 患者资料 |
| 1.9 统计学分析 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 临床疗效 |
| 2.2 外周血细胞计数 |
| 2.3 输血量改变 |
| 2.4 不同年龄疗效比较 |
| 2.5 不同性别疗效比较 |
| 2.6 不同染色体核型疗效比较 |
| 2.7 不同IPSS-R危度疗效比较 |
| 2.8 安全性评价 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 复方青黄散的药效学和作用机制研究 |
| 第一节 MDS小鼠模型建立及复方青黄散的药效学研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 骨髓细胞提取 |
| 1.3 药物干预方案 |
| 1.4 外周血细胞计数 |
| 1.5 流式细胞术检测细胞表面标记物 |
| 1.6 动物实验伦理 |
| 1.7 仪器和设备 |
| 1.8 试剂 |
| 1.9 统计学分析 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 MDS小鼠移植物嵌合度检测 |
| 2.2 复方青黄散干预前MDS小鼠外周血细胞计数 |
| 2.3 复方青黄散干预后MDS小鼠外周血细胞计数 |
| 2.4 复方青黄散干预后MDS小鼠生存时间 |
| 3. 讨论 |
| 第二节 复方青黄散改善贫血的作用机制研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 细胞 |
| 1.3 CCK-8法检测细胞活力 |
| 1.4 流式细胞术检测细胞表面标记物 |
| 1.5 q-PCR检测目的基因表达 |
| 1.6 Western-bolt检测目的蛋白表达 |
| 1.7 克隆形成蔟分析 |
| 1.8 实验仪器及耗材 |
| 1.9 统计学分析 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 复方青黄散对小鼠和人源细胞细胞活力的作用 |
| 2.2 复方青黄散对MDS小鼠骨髓造血的作用 |
| 2.3 复方青黄散对MDS小鼠骨髓红系分化的体外作用 |
| 2.4 复方青黄散对正常小鼠造血的作用 |
| 2.5 复方青黄散对正常小鼠骨髓红系分化的体外作用 |
| 2.6 复方青黄散对MDS克隆的分子作用机制 |
| 2.7 复方青黄散对正常细胞的分子作用机制 |
| 2.8 复方青黄散中雄黄、青黛对正常小鼠骨髓红系分化的体外作用 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 文献综述 |
| (一) 中医论治骨髓增生异常综合征的研究进展 |
| (二) 西医诊治骨髓增生异常综合征的研究进展 |
| (三) 红细胞分化成熟机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附录 |
（7）人参皂苷Rg1对小鼠骨髓内皮祖细胞体外增殖的影响及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 内皮祖细胞研究进展 |
| 1.1.1 内皮祖细胞的发现及其意义 |
| 1.1.2 内皮祖细胞的培养与鉴定 |
| 1.1.3 内皮祖细胞系 |
| 1.1.4 内皮祖细胞的应用研究 |
| 1.1.5 内皮祖细胞增殖研究进展 |
| 1.2 人参皂苷Rg1的药效及其作用机制的研究进展 |
| 1.2.1 人参皂苷Rg1药效研究的概述 |
| 1.2.2 人参皂苷Rg1作用机制的研究 |
| 1.3 本研究的目的及总体设计 |
| 第二章 小鼠骨髓EPCs的分离、培养与鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 差速贴壁法 |
| 2.1.5 二次酶消化法 |
| 2.1.6 纯化传代细胞培养 |
| 2.1.7 集落形成实验 |
| 2.1.8 细胞表面抗原表达检测 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 细胞形态学观察结果 |
| 2.2.2 集落特征 |
| 2.2.3 细胞表面抗原阳性细胞率 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 小鼠骨髓内皮祖细胞系MBMME2的建立与鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 骨髓EPCs分离和纯化 |
| 3.1.5 细胞克隆培养和筛选 |
| 3.1.6 传代培养 |
| 3.1.7 细胞系的保存与复苏 |
| 3.1.8 细胞生长对FBS依赖性的观察 |
| 3.1.9 细胞增殖能力的观察 |
| 3.1.10 细胞周期分析 |
| 3.1.11 核型分析 |
| 3.1.12 流式细胞术 |
| 3.1.13 细胞免疫荧光染色 |
| 3.1.14 体外成血管实验 |
| 3.1.15 统计学分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 细胞形态学观察结果 |
| 3.2.2 细胞生长特性 |
| 3.2.3 细胞周期分布 |
| 3.2.4 染色体核型 |
| 3.2.5 细胞表面抗原阳性细胞率 |
| 3.2.6 体外成血管实验 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 人参皂苷Rg1对小鼠骨髓内皮祖细胞体外增殖的影响研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 细胞传代培养 |
| 4.1.5 MTT比色法 |
| 4.1.6 集落形成实验 |
| 4.1.7 细胞周期分析 |
| 4.1.8 统计学分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 细胞增殖速率 |
| 4.2.2 集落形成能力 |
| 4.2.3 细胞周期分布 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 人参皂苷Rg1 对小鼠内皮祖细胞系MBMME2 细胞生长影响的转录组学研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 实验分组 |
| 5.1.4 RNA-Seq流程 |
| 5.1.5 RT-q PCR |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 RNA样本浓度与质量检测结果 |
| 5.2.2 测序数据质量评价 |
| 5.2.3 样本间Venn分析 |
| 5.2.4 样本间的PCA分析 |
| 5.2.5 差异基因聚类分析 |
| 5.2.6 差异基因表达分析 |
| 5.2.7 功能注释分析 |
| 5.2.8 GO功能富集分析 |
| 5.2.9 KEGG富集分析 |
| 5.2.10 DEGs信号通路分析 |
| 5.2.11 主要差异蛋白互作网络 |
| 5.2.12 RT-q PCR |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 人参皂苷Rg1对MBMME2 促增殖作用机制 |
| 5.3.2 MBMME2 对人参皂苷Rg1 的耐受机制 |
| 5.4 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 专业名词缩略语表(Abbreviations) |
| 附录二 攻读学位期间发表的主要论文及专利 |
| 致谢 |
（8）地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 地中海贫血的定义和分类 |
| 1.2.1 α地中海贫血 |
| 1.2.2 β地中海贫血 |
| 1.3 地中海贫血的治疗现状和预防 |
| 1.3.1 常规疗法 |
| 1.3.2 造血干细胞移植 |
| 1.3.3 基因活化疗法 |
| 1.3.4 地中海贫血预防现状 |
| 1.4 造血调控与造血干细胞的研究 |
| 1.4.1 血细胞发生的基本概念 |
| 1.4.2 造血细胞发育阶段和鉴别方法 |
| 1.4.3 早期造血的三个阶段 |
| 1.4.4 早期造血胎儿红细胞生成和血红蛋白合成 |
| 1.4.5 多能造血干细胞维持自我更新的分子基础 |
| 1.4.6 造血干细胞多态性 |
| 1.4.7 造血祖细胞多态性 |
| 1.4.8 造血干细胞和祖细胞的主要区别 |
| 1.4.9 造血干细胞和造血祖细胞表面标志 |
| 1.4.10 造血干细胞的体外和体内检测方法 |
| 1.4.11 造血干细胞和祖细胞富集方法 |
| 1.4.12 造血干细胞移植问题 |
| 1.4.13 造血干细胞体外扩增问题 |
| 1.5 造血调控的关键:细胞因子 |
| 1.5.1 最早研究的细胞因子:集落刺激因子 |
| 1.5.2 作用于早期造血细胞的细胞因子 |
| 1.5.3 其他类型参与造血调控的细胞因子 |
| 1.5.4 与红系分化相关的调控因子 |
| 1.5.5 转录因子在造血调控中的作用 |
| 1.6 红细胞系统发育以及相关调控 |
| 1.6.1 红系祖细胞阶段 |
| 1.6.2 红系前体细胞阶段 |
| 1.6.3 红细胞脱核和释放成熟阶段 |
| 1.6.4 红细胞生成的调控机制 |
| 1.7 本文的主要研究内容 |
| 第2章 实验方法与材料 |
| 2.1 样本来源 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 羊水细胞培养 |
| 2.4.2 细胞冻存 |
| 2.4.3 细胞计数 |
| 2.4.4 脐带血分离单个核细胞 |
| 2.4.5 磁珠分选CD34阳性细胞 |
| 2.4.6 流式细胞仪分析和分选不同阶段的红细胞 |
| 2.4.7 体外造血集落检测 |
| 2.4.8 WES数据分析 |
| 第3章 地中海贫血携带者基因型调查研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 羊水细胞体外培养 |
| 3.3 地中海贫血携带者外显子测序结果 |
| 3.3.1 地中海贫血携带者临床和基因分类 |
| 3.3.2 全外显子组测序结果和数据分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 脐带血造血干细胞体外诱导分化研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 脐带血造血干细胞的分离纯化和鉴定 |
| 4.3 脐带血造血干细胞体外诱导分化和造血集落检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（9）人胎盘合成的血清淀粉样蛋白A1（SAA1）在分娩中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要实验仪器 |
| 2.常用试剂与耗材 |
| 3.实验试剂配制 |
| 3.1 免疫组织化学检测试剂 |
| 3.2 胎盘滋养细胞分离及原代培养试剂 |
| 3.3 蛋白提取试剂 |
| 3.4 蛋白定量试剂 |
| 3.5 Western blot实验试剂 |
| 3.6 组织免疫荧光染色试剂 |
| 3.7 原位杂交试剂 |
| 3.8 药物配制方法 |
| 3.9 实验所用激动剂和拮抗剂 |
| 3.10 实验所用抗体 |
| 4.实验材料 |
| 5.实验方法 |
| 5.1 人胎盘绒毛组织SAA1 的原位杂交染色 |
| 5.2 人胎盘绒毛组织SAA1 的免疫组织化学染色 |
| 5.3 胎盘绒毛组织免疫荧光染色 |
| 5.4 人胎盘绒毛组织蛋白的提取 |
| 5.5 人胎盘绒毛组织总RNA的提取 |
| 5.6 人晚孕胎盘滋养细胞的原代培养及加药处理 |
| 5.7 滋养细胞总RNA提取 |
| 5.8 人胎盘滋养细胞的转录组高通量测序 |
| 5.9 实时荧光定量PCR |
| 5.10 提取细胞总蛋白 |
| 5.11 BCA法测定样本蛋白浓度 |
| 5.12 蛋白质免疫印迹杂交(Western Blot) |
| 5.13 ELISA测定孕妇血清、胎盘组织及滋养细胞培养液SAA1、IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE_2和PGF_2α含量 |
| 5.14 动物实验 |
| 5.15 统计分析 |
| 结果 |
| 1.人胎盘滋养细胞合体化前后转录组学测序结果 |
| 2.SAA1 在人胎盘绒毛组织的分布与表达 |
| 3.SAA1 诱导人胎盘合体滋养细胞促炎因子和前列腺素合成及其机制 |
| 3.1 SAA1 促进人胎盘合体滋养细胞IL-1β、IL-8、TNF-α的表达 |
| 3.2 SAA1 促进人胎盘合体滋养细胞COX-2 的表达和前列腺素的合成 |
| 3.3 SAA1 不影响人胎盘合体滋养细胞CRH及芳香化酶的表达 |
| 3.4 TLR4 介导了SAA1对人胎盘合体滋养细胞IL-8、TNF-α和COX-2 的诱导作用 |
| 3.5 NFκB参与SAA1对人胎盘合体滋养细胞IL-8、TNF-α和COX-2 的诱导作用 |
| 3.6 MAPK信号通路参与SAA1对人胎盘合体滋养细胞IL-8、TNF-α和COX-2 的诱导作用 |
| 4.人胎盘滋养细胞SAA1 表达受LPS、皮质醇及TNF-α的调控 |
| 4.1 LPS对人胎盘合体滋养细胞SAA1 表达的影响 |
| 4.2 糖皮质激素对人胎盘合体滋养细胞SAA1 表达的影响 |
| 4.3 TNF-α和 IL-8 对人胎盘合体滋养细胞SAA1的表达的影响 |
| 5.SAA1 水平在正常分娩及感染性早产中的变化 |
| 5.1 血清及胎盘组织SAA1 含量与足月正常分娩过程相关 |
| 5.2 血清SAA1 水平与感染性早产的关系 |
| 6.动物实验 |
| 6.1 SAA1 在孕晚期小鼠胎盘及胎膜组织的分布与表达 |
| 6.2 孕晚期小鼠胎盘及胎膜组织中SAA1 蛋白表达量的变化 |
| 6.3 腹腔注射常规剂量LPS诱导胎膜及胎盘的SAA1 |
| 6.4 腹腔注射SAA1 引起早产 |
| 6.5 孕鼠腹腔注射SAA1 引起胎盘促炎性细胞因子水平增加 |
| 6.6 腹腔注射SAA1 引起小鼠胎盘COX-2 蛋白增加 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 1.SAA1 在胎盘的表达及其意义 |
| 2.SAA1 诱导人胎盘合体滋养细胞促炎基因的表达及机制 |
| 3.糖皮质激素和促炎性因子对人胎盘合体滋养细胞SAA1 的诱导作用 |
| 结论 |
| 综述-急性期反应蛋白血清淀粉样蛋白(A-SAA)研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（10）多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 多能干细胞分化再生的T细胞体内抗肿瘤评估 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 癌症细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.2 CAR-T细胞免疫疗法概述 |
| 1.1.3 再生T细胞的研究进展 |
| 1.2 实验材料和实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 实验试剂 |
| 1.2.3 实验器材 |
| 1.2.4 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 iR9 mESCs体外定向分化获得造血祖细胞iHPCs |
| 1.3.2 iR9 mESCs来源的iHPCs移植免疫缺陷鼠再生T淋巴细胞 |
| 1.3.3 CD19-CAR iT细胞体内肿瘤杀伤功能验证策略 |
| 1.3.4 CD19-CAR iT可有效清除肿瘤模型鼠外周血中的B淋巴细胞 |
| 1.3.5 CD19-CAR iT可有效消除肿瘤模型鼠的肿瘤负荷 |
| 1.3.6 CD19-CAR iT可有效延长肿瘤模型鼠的生存期 |
| 1.3.7 CD19-CAR iT细胞在小鼠体内显示出增殖和激活能力 |
| 1.4 总结和讨论 |
| 第2章 多能干细胞再生可移植髓系细胞研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 髓系细胞的发育和调控 |
| 2.1.2 再生髓系细胞的现状和进展 |
| 2.1.3 髓系细胞再生新思路 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验器材 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 iRunx1-P2A-Hoxa10-EGFP mES打靶细胞系(iR10 mESCs)构建成功 |
| 2.3.2 iR10 mESCs体外诱导分化生成造血祖细胞 |
| 2.3.3 基质细胞OP9-DL1较MS5-DL1更能促进造血祖细胞产生 |
| 2.3.4 iR10 mESCs来源iHPCs移植Rag1~(-/-)小鼠能够再生髓系细胞 |
| 2.3.5 受体鼠各组织中能检测到再生髓系细胞 |
| 2.3.6 受体鼠骨髓中检测到再生的髓系祖细胞 |
| 2.3.7 iR10 mESCs来源髓系细胞在体内短期存在 |
| 2.3.8 野生型受体鼠体内再生髓系细胞 |
| 2.4 总结和讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
四、小鼠卵黄囊内皮细胞的体外培养及其细胞因子表达的检测（论文参考文献）
- [1]小鼠Kupffer细胞的转分化研究[D]. 李昕宇. 吉林大学, 2021(01)
- [2]小鼠胚胎生血内皮细胞时空与功能异质性研究[D]. 李昀桥. 军事科学院, 2021(02)
- [3]单细胞转录组解析人类胚胎造血干细胞与巨核细胞的发育[D]. 贺健. 军事科学院, 2021(02)
- [4]单细胞精度解析人胚巨噬细胞的起源和特化[D]. 黄涛. 军事科学院, 2021(02)
- [5]Ash2l-1在小鼠卵黄囊早期造血中的功能和机制研究[D]. 王晓晴. 中国科学技术大学, 2020(02)
- [6]复方青黄散调控HIF1A/GATA信号通路改善骨髓增生异常综合征红系造血[D]. 范腾. 中国中医科学院, 2020(01)
- [7]人参皂苷Rg1对小鼠骨髓内皮祖细胞体外增殖的影响及其作用机制的研究[D]. 唐琳. 湖南师范大学, 2020(01)
- [8]地中海贫血症红细胞谱系发育分化基因筛查及机制研究[D]. 杨最. 哈尔滨工业大学, 2020(01)
- [9]人胎盘合成的血清淀粉样蛋白A1（SAA1）在分娩中的作用[D]. 甘晓文. 上海交通大学, 2020(01)
- [10]多能干细胞分化再生T细胞的体内抗肿瘤评估及再生可移植髓系细胞研究[D]. 吕萃. 中国科学技术大学, 2020(01)