一、锂导致大鼠慢性肾功能不全时肾小球毛细血管数目的改变（论文文献综述）
于珊珊[1]（2021）在《虫草益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织RhoA/ROCK1信号通路的影响》文中认为目的:基于RhoA/ROCK1通路对其下游因子ILK的调控,参与肾间质纤维化形成物质COL-I、COL- Ⅲ等的调控,验证虫草益肾方对RhoA/ROCK1信号通路的影响,探索虫草益肾方防治肾纤维化的作用机理。方法:根据体重不同将100只雄性SD大鼠逐一编号,根据随机数字表法分组:假手术组、模型组、盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组,每组20只。造模选用左侧输尿管梗阻法建立肾间质纤维化模型。单侧输尿管梗阻模型术后次日开始灌胃给药。虫草益肾方组每日给与虫草益肾方水煎液6.57g/（kg·d）灌胃,虫草益肾方高剂量组每日给与虫草益肾方水煎液13.14g/（kg·d）灌胃,盐酸咪哒普利组给与盐酸咪哒普利水溶液0.9g/（k g·d）灌胃,假手术组和模型组每日给与等体积的生理盐水灌胃,至实验周期完成。实验期间定期记录大鼠的一般状态、体重变化情况,分别于造模第7天、14天取材,留取大鼠血清用于检测血清尿素氮、血清肌酐;留取肾组织以HE染色、Masson染色法研究肾组织病理形态学变化情况,以免疫组化法检测PDGF-BB、ROCK1、ILK、COL-I、COL- Ⅲ蛋白表达情况,Western Blot法检测RhoA、ROCK1、ILK、E-cad、a-SMA蛋白表达情况,Realtime PCR等法检测RhoA、ROCK1、ILK、E-cad、a-SMA等基因表达情况。分别于造模第6天、13天,以随机方式从各组分别选取10只大鼠放入代谢笼中,留取24小时尿液,用于24小时尿蛋白定量（24h UPQ）检测,禁食不禁水。结果:（1）大鼠一般情况:模型组大鼠一般状态不佳,皮毛暗淡,体重减轻,活动减少;虫草益肾方组、盐酸咪哒普利组、虫草益肾方高剂量组大鼠反应能力、皮毛色泽、体重变化等方面均有不同程度改善。（2）血清肌酐、血清尿素氮、24小时尿蛋白定量:模型制备后第7天、14天,模型组与假手术组比较,血清肌酐、血清尿素氮、24小时尿蛋白定量等水平均明显升高,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组分别与模型组比较,血清肌酐水平明显下降,P<0.05,差异具有统计学意义。（3）HE和Masson染色显示:虫草益肾方可改善UUO大鼠肾脏的病理变化程度,可减少UUO大鼠肾组织纤维化面积百分比,与假手术组相比模型组肾间质纤维化发生率明显增高,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组第7天、14天与模型组比较,肾间质纤维化面积百分比降低,P<0.05,差异具有统计学意义;虫草益肾方组与虫草益肾方高剂量组比较,虫草益肾方组肾间质纤维化面积百分比降低,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组与虫草益肾方高剂量组比较,盐酸咪哒普利组肾间质纤维化面积百分比降低,P<0.05,差异具有统计学意义。（4）免疫组化检测显示:实验第14天时,检测大鼠肾组织PDGF-B B、ILK、R OCK 1、COL-Ⅰ、C OL-Ⅲ蛋白表达情况,与假手术组比较,模型组上述蛋白表达水平均明显升高,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组与模型组比较,上述蛋白表达水平均明显下降,P<0.05,差异具有统计学意义;与虫草益肾方高剂量组比较,虫草益肾方组、盐酸咪哒普利组ILK、ROCK1、COL-Ⅰ、CO L-Ⅲ蛋白表达水平降低,P<0.0 5,差异具有统计学意义,PDGF-BB表达水平未见明显差异,P>0.05,差异无统计学意义。（5）Real-Time PCR显示:实验第14天,检测肾组织RhoAmRNA、R OCK1mRNA、ILKmRNA、E-cadherinmRNA、a-SMAmRNA表达水平,与假手术组比较,模型组RhoAmRNA、ROCK1mRNA、ILKmRNA、a-SMAmRNA表达水平均明显升高、E-c adhe rinmRNA明显降低,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组与模型组比较,RhoA、ROCK1mRNA、ILKmRNA、a-SMAmRNA表达水平均明显降低、E-cadherinmRNA明显升高,P<0.05,差异具有统计学意义;与虫草益肾方高剂量组比较,虫草益肾方组、盐酸咪哒普利组RhoAmRNA、ROCK1mRN A、ILKmRNA、a-SMAmRNA表达水平降低,P<0.05,差异具有统计学意义。（6）Western Blot显示:实验第14天,检测大鼠肾组织RhoA、ROC K1、ILK、E-cadherin、a-SMA蛋白表达水平,与假手术组比较,模型组ROCK1、RhoA、IL K、a-SMA蛋白表达水平升高,E-cadherin蛋白表达水平降低,P<0.05,差异具有统计学意义;盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组、虫草益肾方高剂量组与模型组比较,ROCK1、RhoA、ILK、a-SMA蛋白表达水平下降,E-cadherin蛋白表达水平升高,P<0.05,差异具有统计学意义;与虫草益肾方高剂量组比较,盐酸咪哒普利组、虫草益肾方组ROCK1、RhoA、ILK、E-cadherin、a-SMA蛋白表达水平有降低,P<0.05,差异具有统计学意义。结论:1.本研究证实了虫草益肾方可改善UUO模型大鼠的一般状态,降低24小时尿蛋白定量、血清肌酐、血清尿素氮生化指标。2.虫草益肾方能够延缓肾脏病理改变,保护肾功能。3.在肾纤维化形成过程中存在RhoAROCK1信号通路的激活,虫草益肾方可以抑制UUO模型大鼠肾组织PDGF-BB、ROCK1、RhoA等的表达,下调ILK的表达。4.虫草益肾方抑制肾组织IL K表达,从而干预ILK所介导的EM T,抑制E-cadherin、a-SMA、Ⅰ型和 Ⅲ型胶原蛋白的表达,延缓肾间质纤维化的进展。
王宇[2]（2021）在《急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊PCI术后心功能的转归及影响因素分析》文中认为研究目的本课题通过回顾性分析急性ST段抬高型心肌梗死（ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI）行急诊经皮冠状动脉介入（Percutaneous coronary intervention,PCI）治疗后连续性住院患者的病例资料,比较住院期间左心室射血分数<50%与左心室射血分数≥50%患者的临床特点,以及不同BNP水平患者中左心室射血分数<50%与左心室射血分数≥50%的临床特点,并随访术后1年左心室射血分数变化患者的临床特征,比较不同左心室射血分数范围患者术后1年心功能发生改善和恶化的临床特点,探讨影响急性STEMI患者急诊PCI术后心功能转归的危险因素,为制定干预策略抑制心肌重构,防止心脏功能恶化提供临床思路和依据。研究方法连续收集2015年6月至2018年6月期间在我院心血管内科接受急诊PCI的STEMI患者。入院后48h行超声心动图检查,根据测得的左心室射血分数（Left ventricular ejection fraction,LVEF）,分为LVEF≥50%组、和LVEF<50%组,录入两组患者的基线资料、包括实验室检验、检查结果,急诊PCI手术相关数据,所有患者在术后1年进行超声心动图检查,随访LVEF变化,对录入数据进行统计分析,两组间连续性变量的比较采用两独立样本t检验,分类变量采用卡方检验,对接受急诊PCI的急性STEMI患者随访1年影响心功能恶化的变量进行采用Logistic回归分析。所有数据均采用SPSS 21.0软件实现,以P<0.05为差异有统计学意义。研究结果（一）接受急诊PCI的STEMI患者住院期间不同射血分数分组的临床特点1.LVEF<50%组与LVEF≥50%组患者的临床特点本研究共入选725例患者,其中男性625例（86.2%）,女性100例（13.8%）,平均年龄（63.0±12.8）岁。LVEF≥50%组646例,LVEF<50%组79例。LVEF<50%组患者BMI≥24kg/m2、Killip分级≥II级所占比例,脑利钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）水平、白细胞计数、肌酐水平、左室舒张末期内径、左室收缩末期内径高于LVEF≥50%组患者;肾小球滤过滤（glomerular filtration rate,GFR）、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯水平低于LVEF≥50%组患者,且两组相比差异有统计学意义（P<0.05）;两组患者在症状发作至球囊扩张时间、罪犯血管、支架植入数、支架长度、支架内径、冠脉病变支数等手术情况,恶性心律失常、急性心力衰竭、全因死亡、心源性休克、心脏骤停等院内心血管不良事件方面,以及院内服用阿司匹林、P2Y12受体拮抗剂、他汀类、ACEI/ARB、β-受体阻滞剂等用药情况相比差异无统计学意义（P>0.05）。2.LVEF<50%组与LVEF≥50%组患者不同BNP水平的临床特点（1）LVEF≥50%患者共有646例,BNP（27）100pg/ml组241例,100-400pg/ml组276例,BNP?400pg/ml组129例。与BNP（27）100pg/ml组和100-400pg/ml组相比,BNP?400pg/ml组患者年龄更大、Killip≥II级比例更高、入院时收缩压更高,肌酐、LDL-C、TC水平更高,GFR、TG、HDL-C、LVEF水平更低,症状发作至球囊扩张时间更长、罪犯血管为LAD比例更高,院内急性心力衰竭的发生率更高,差异相比有显着的统计学意义（P<0.05）。（2）LVEF<50%患者共有79例,其中BNP（27）100pg/ml组10例,100-400pg/ml组20例,BNP?400pg/ml组49例。与BNP（27）100pg/ml组和100-400pg/ml组相比,BNP?400pg/ml组患者高龄人数更多、Killip≥II级比例更高、入院时心率更快,高敏c Tn I、白细胞计数、空腹血糖水平更高,GFR、HDL-C、TG水平更低,症状发作至球囊扩张时间更长、罪犯血管为LAD、冠脉多支病变比例更高,院内急性心力衰竭的发生率更高,差异相比有显着的统计学意义（P<0.05）。（二）接受急诊PCI的STEMI患者术后1年心功能转归1.术后1年共随访患者217例,LVEF≥50%组198例,LVEF<50%组19例,两组患者术后1年用药情况包括阿司匹林、P2Y12受体拮抗剂、他汀类、ACEI/ARB、β-受体阻滞剂方面相比差异无统计学意义（P>0.05）2.术后1年共随访患者217例,在随访的198例LVEF≥50%组患者中共有21例患者心功能发生恶化（LVEF<50%）,177例患者心功能保持正常（LVEF≥50%）。与LVEF维持正常组患者相比,LVEF恶化组高龄患者比例更多,既往心肌梗死病史、罪犯血管为前降支所占比例更高,入院时收缩压更低,BNP、白细胞计数水平更高,左心室舒张末期内经、左心室收缩末期内径更大,两组差异相比有显着的统计学意义（P<0.05）。3.LVEF<50%组术后1年共随访19例,共有8例患者心功能发生改善（LVEF≥50%）,11例患者心功能仍处于LVEF<50%。与LVEF持续<50%组相比,LVEF改善组症状发作至球囊扩张时间更短,两组相比差异有显着的统计学意义（P<0.05）。4.在随访的198例LVEF≥50%组患者中共有21例患者心功能发生恶化。Logistic回归分析结果显示,既往心肌梗死病史（OR:12.93,95%CI:2.18-76.78,P=0.0049）、BNP≥400pg/ml（OR:4.31,95%CI:1.19-15.53,P=0.0256）、TC≥6.2mmol/L（OR:11.85,95%CI:2.07-68.03,P=0.0055）、罪犯血管为前降支（OR:5.76,95%CI:1.52-21.89,P=0.0101）是急性STEMI患者行急诊PCI术后1年心功能发生恶化的独立危险因素。结论1.与STEMI行急诊PCI术后LVEF≥50%的患者相比,LVEF<50%者超重、Killip≥II级比例更高,肌酐、白细胞计数水平更高,左心室舒张末期内经、左心室收缩末期内径更大,肾小球滤过率更低,提示BMI、心肌梗死范围、左心室扩大、肾功能减退对住院期间LVEF下降有一定程度的影响。2.既往心肌梗死病史、BNP≥400pg/ml、总胆固醇≥6.2mmol/L、罪犯血管为前降支是急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊PCI术后1年发生心功能恶化的独立危险因素,关注有心肌梗死史人群,重视前降支闭塞后心肌重构,强化调脂治疗,预防再次心梗,对延缓急性心肌梗死患者再灌注治疗后远期左室收缩功能减退可能具有重要意义。
刁珂[3]（2020）在《芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病的临床再研究》文中研究表明目的:在前期短期应用芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病3b期、Ⅲ期的研究基础上,针对芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病G3aA2期气阴两虚、瘀血阻络型患者的中长期临床疗效及安全性进行临床观察再研究。方法:选取符合糖尿病肾脏疾病（G3aA2期）气阴两虚,瘀血阻络型诊断的患者,经过2周的洗脱期治疗后随机分配为试验组和对照组。两组患者给予西医基础治疗,试验组给予芪蛭降糖胶囊（每粒0.5g）每次5粒,每天3次;对照组给予缬沙坦胶囊（每粒80mg）每次80-160mg,每日一次。治疗时间为6个月。观察两组患者基线值、治疗后第1、3、6个月尿蛋白/肌酐（UACR）、血肌酐（SCr）、血清胱抑素（Cys-C）、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）及中医症候的变化,并计算出肾小球滤过率（eGFR）;观察肾功能不全、肾功能进展、终点事件例数及不良反应发生率。结果:本试验共有118例患者完成6个月的观察,其中试验组60例,对照组58例。（1）治疗前两组患者各实验室指标及中医症状积分均无统计学差异（P>0.05）。（2）实验室指标:试验组治疗后1个月,UACR、SCr较基线值均有所降低,eGFR较前有所上升,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）;治疗后3个月,试验组UACR、SCr、eGFR较基线值改善明显（P<0.01）,Cys-C与基线值相比有所下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗后6个月试验组UACR、SCr、eGFR、Cys-C与基线值相比均有明显改善（P<0.01）,FBG、HbAlc较基线值有所下降,差异具有统计学意义（P<0.05）。两组间比较,治疗后1个月两组间差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后3个月试验组UACR水平低于同期对照组（P<0.05）,余指标无明显差异（P>0.05）;治疗后6个月,试验组SCr、Cys-C、FBG水平低于同期对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）,UACR、eGFR水平较同期对照组显着改善（P<0.01）,HbA1c两组间差异不明显（P>0.05）。（3）中医症状积分:治疗6个月后试验组的中医症状明显改善,有效率为90%,治疗后组间比较具有显着统计学差异（P<0.01）。（4）临床总疗效:治疗后试验组临床总有效率为81.67%,对照组为58.62%,试验组治疗本病的总有效率优于对照组（P<0.05）。（5）两组各随访点肾功能不全、肾功能进展、终点事件发生率、不良反应发生率组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论:中长期应用芪蛭降糖胶囊能够减少DKD（G3aA2期）气阴两虚、瘀血阻络型患者尿蛋白排泄,维持早期肾功能稳定,延缓DKD进展。
郭传[4]（2020）在《益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究》文中研究表明背景动脉粥样硬化性肾病（atherosclerotic renal disease,ARD）是指因动脉粥样硬化引起肾动脉狭窄和血流量减少,而导致的肾脏损伤,是引起终末期肾脏病（end stage renal disease,ESRD）的主要原因。随着肾灌注的不断减少,肾小管周围微血管内皮逐渐受损,呈现稀疏化,“微血管荒废—小管间质纤维化”的病理链逐渐形成,这是ARD进展的关键病理环节。目前针对ARD的治疗,主要包括药物治疗与血管重建术,以控制血压、血脂、减少心血管事件发生概率和保护肾功能,但是治疗的效果并不理想,疾病的肾脏终点并未得到改善。这也提示临床工作者在ARD的治疗过程中,应积极寻找新的干预措施和治疗靶点,如选择决定ARD患者肾脏预后的小管间质纤维化作为切入点。研究发现,当小管间质微血管受到损伤时,小管间质纤维化的速度可以明显加快,因此从保护小管间质微血管内皮的角度,探寻延缓ARD小管间质纤维化的措施具有重要意义。硫酸吲哚酚（indoxyl sulfate,IS）作为一种肠源性尿毒症毒素,由肠道微生物分解色氨酸并经肝脏转化而成,主要通过肾脏清除。当肾功能下降时,IS在体内明显蓄积,因为其易与蛋白质结合,而不易被透析清除。IS可通过活化芳香烃受体（Aryl hydrocarbon receptor,AhR）,并进一步激活烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酶氧化剂-4（Nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,NOX4）,诱导氧化应激和炎症反应,导致内皮功能障碍,引起微血管荒废,加速小管间质纤维化。因此,在IS刺激条件下,AhR/NOX4通路激活并介导的的氧化应激和炎症反应,可能是ARD进展中小管间质微血管损伤的主要机制,从而加重了小管间质纤维化。本课题组基于既往的证候学研究和临床经验,考虑ARD的基本病机以脾肾气虚为本,湿、浊、瘀、毒夹杂为标。知名肾病专家戴希文教授结合多年治疗慢性肾脏病的临床经验,提出了益气活血、利湿降浊解毒的益肾缓衰方,与ARD的基本病机相吻合,在延缓ARD肾功能进展方面具有一定的临床疗效。益肾缓衰方相关的基础研究提示,该方在保护血管内皮和改善小管间质纤维化方面具有重要作用。鉴于IS与中医“浊毒”致病特点类似,且IS可通过活化AhR,激活NOX4,进而损伤血管内皮,因此可以考虑益肾缓衰方对小管间质微血管的保护作用可能与该方抑制IS的毒性作用有关,并提出“益肾缓衰方可能通过调控IS介导下的AhR/NOX4通路,改善微血管荒废,减轻小管间质纤维化,从而延缓ARD进展”的假说。围绕此假说,本研究首先对ApoE基因敲除小鼠使用高脂饮食喂养联合5/6肾切除构建ARD模型,观察益肾缓衰方对ARD小鼠血清IS水平、小管间质微血管损伤、小管间质纤维化以及AhR/NOX4通路相关分子表达水平和下游氧化应激、炎症分子变化的影响。其次,采用IS刺激人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）构建毒素损伤细胞模型,观察益肾缓衰方含药血清对IS诱导下HUVECs活力、衰老和氧化应激以及AhR/NOX4通路的的影响,旨在从IS角度出发,阐述益肾缓衰方对ARD间质微血管的保护作用和机制,为该方延缓ARD小管间质纤维化提供一定的理论依据。目的1.观察益肾缓衰方对ARD小鼠血清IS水平的变化、小管间质纤维化以及小管周围微血管内皮损伤的影响,以及该方对IS诱导下血管内皮细胞损伤的保护作用。2.从IS激活AhR/NOX4通路,并诱导氧化应激和炎症反应角度,揭示益肾缓衰方对ARD小管间质微血管的保护作用和机制,为该方延缓ARD小管间质纤维化提供一定的理论依据。方法1.体内实验:通过对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠使用高脂饮食喂养联合5/6肾切除构建ARD模型。实验分为:对照组、假手术组、模型组、益肾缓衰方低剂量组（16.76g/kg.d）、益肾缓衰方中剂量组（33.52g/kg.d）、益肾缓衰方高剂量组（67.04g/kg.d）、爱西特组（0.4g/kg.d）,干预20周。观察小鼠一般情况,并利用自动生化仪检测小鼠肾功能（Scr、BUN）和血脂水平变化（TC、TG、LDL-c）,高效液相色谱-荧光法测血清IS水平、Elisa法测氧化应激指标（SOD、MDA）及小鼠血清内皮功能障碍指标（ADMA）水平、HE染色和VG染色判断肾动脉的动脉粥样硬化程度,HE染色、PAS染色、Masson染色判断肾组织的组织形态学变化及间质胶原沉积,电镜观察肾脏的超微结构,免疫组化检测小鼠间质纤维化相关指标（Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1）、AhR蛋白及肾间质内微血管内皮保护指标（vWF）表达水平,real time PCR检测小鼠肾组织内AhR/NOX4通路相关分子（AhR、NOX4、MCP-1）以及间质纤维化相关指标（TGF-β1）的mRNA表达水平。2.体外实验:采用500μmol/LIS刺激HUVECs 24h建立内皮损伤的毒素模型。首先,通过 CCK-8 法检测不同浓度 IS（0μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L）刺激后HUVECs活力变化及不同浓度益肾缓衰方含药血清（5%、10%、20%）对IS刺激下HUVECs活力的影响,同时确定IS的造模浓度和含药血清的干预浓度。其次,将实验分为:空白对照组、含药血清对照组、毒素模型组和含药血清实验组,并通过SA-β半乳糖苷酶法检测各组细胞衰老程度、化学荧光微孔板法检测各组细胞ROS生成量。最后,增加AhR抑制剂组（CH223191）及AhR抑制剂+含药血清组,并进一步检测各组细胞的细胞活力、细胞衰老情况、ROS生成量,并通过Western blot检测AhR与NOX4的蛋白表达,real time PCR法检测AhR、NOX4及炎症因子MCP-1的mRNA表达。结果1.体内实验:（1）与对照组比,假手术组小鼠体重虽增加,但无统计学意义（P>0.05）;血清TC、TG、LDL-c水平明显升高（P<0.05）,血清SOD活性明显下降（P<0.05）,但血清Scr、BUN、IS水平、MDA及ADMA含量升高均不明显（P>0.05）;肾动脉内膜增厚、管腔狭窄,肾小管扩张,肾小管超微结构未见明显异常,肾间质胶原纤维沉积不明显（P>0.05）;肾间质内TGF-β1、Collagen Ⅳ、α-SMA、AhR蛋白表达水平未见明显增加（P>0.05）,肾间质内vWF蛋白表达水平下降（P<0.05）;肾组织内AhR、TGF-β1及NOX4 mRNA表达水平的变化无统计学差异（P>0.05）,但MCP-1 mRNA表达水平增加,有统计学意义（P<0.05）。（2）与对照组比,模型组小鼠体重无明显差异（P>0.05）;Scr、TC、TG、LDL-c和血清IS水平显着升高（P<0.05）;血清SOD活性下降而MDA、ADMA含量增加（P<0.05）;肾动脉内膜增厚、管腔狭窄,肾小球硬化,肾小管空泡样变性、腔内微绒毛稀疏和缺失,且小管间质纤维化明显;肾间质胶原纤维沉积明显增加（P<0.05）;肾间质vWF蛋白表达水平下调而CollagenⅣ、α-SMA、TGF-β1及AhR蛋白表达水平增加（P<0.05）;肾组织内AhR、NOX4、TGF-β1及MCP-1 mRNA表达水平增加（P<0.05）。（3）与假手术组比,模型组小鼠体重平均水平较假手术组低,但仅在饮食干预8周时显示有统计学差异（P<0.05）;血清Scr、IS、MDA及ADMA水平更高（P<0.05）,而血脂水平及SOD活性无明显差异（P>0.05）;肾动脉内膜增厚及管腔狭窄程度更加明显,肾小球硬化更加明显,腔内微绒毛稀疏和缺失,肾间质胶原纤维沉积更加明显（P<0.05）;肾间质 Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1、AhR及 vWF 蛋白表达水平明显增加（P<0.05）;肾组织内TGF-β1、AhR、NOX4及MCP-1 mRNA表达水平增加更加明显（P<0.05）。（4）与模型组比较,益肾缓衰方低剂量、中剂量组,对小鼠体重影响不明显（P>0.05）,高剂量组和爱西特组在干预20周时,体重明显低于模型组（P<0.05）;益肾缓衰方低、中、高剂量组及爱西特组均可显着降低小鼠血清Scr和血清IS水平（P<0.05）,但对BUN及血脂水平的改变均不明显（P>0.05）;益肾缓衰方低剂量组可明显增加小鼠血清SOD活性、降低小鼠血清MDA和ADMA含量（P<0.05）,中剂量和高剂量组可明显降低小鼠血清MDA（P<0.05）,爱西特组可明显增加小鼠血清SOD活性并降低小鼠血清MDA含量（P<0.05）;益肾缓衰方低、中、高剂量组均可在一定程度改善肾动脉内膜增厚情况、肾小管空泡样变性以及肾小管的超微结构,但仅低剂量组可明显减轻肾间质胶原纤维沉积（P<0.05）;益肾缓衰方低剂量组和中剂量组均可明显减少肾间质Collagen Ⅳ、α-SMA、AhR蛋白表达,并增加肾间质vWF蛋白的表达（P<0.05）;益肾缓衰方低剂量组和中剂量组均可明显减少肾组织AhR、NOX4、MCP-1 mRNA的表达水平（P<0.05）,且益肾缓衰方低剂量组对于减少肾组织内TGF-β1蛋白和mRNA的表达量,均具有统计学差异（P<0.05）。益肾缓衰方高剂量组和爱西特组对肾组织Collagen Ⅳ、α-SMA、TGF-β1、AhR和vWF的蛋白表达及TGF-β1、AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达无统计学差异（P>0.05）。2.体外实验:（1）与 0μmol/LIS 组比,500μmol/LIS 组与 1000μmol/LIS 组在干预24h、48h、72h后,均可以显着降低HUVECs活力（P<0.05）,250μmol/L IS组在干预48h时可显着降低HUVECs活力（P<0.05）,但1000μmol/LIS干预后细胞数目呈下降趋势。（2）与同等浓度的正常大鼠血清组比,在IS刺激条件下,10%和20%的含药血清可显着增加细胞活力（P<0.05）;在无IS刺激条件下,5%和10%含药血清组对细胞活力无明显影响（P>0.05）,20%的含药血清可显着增加细胞活力（P<0.05）。（3）与空白对照组比较,含药血清对照组对细胞活力、细胞衰老、ROS生成及AhR和NOX4的蛋白和mRNA表达均无显着影响（P>0.05）。（4）与空白对照组比,毒素模型组的细胞活力下降、衰老细胞染色率增加及ROS相对生成量增加（P<0.05）,细胞核内AhR蛋白及NOX4蛋白表达增加,AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达增加（P<0.05）。（5）与毒素模型组比较,含药血清实验组、AhR抑制剂组、AhR抑制剂+含药血清组均可明显增加细胞活力、降低衰老细胞染色率及ROS相对生成量（P<0.05）,下调AhR蛋白及NOX4蛋白表达水平,下调AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达水平（P<0.05）。（6）与AhR抑制组比,AhR抑制剂+含药血清组在增加细胞活力、降低衰老细胞染色率及ROS相对生成量,以及下调AhR蛋白及NOX4蛋白表达水平和AhR、NOX4及MCP-1的mRNA表达水平方面效果更加显着（P<0.05）。结论1.益肾缓衰方可改善ARD小鼠肾功能以及肾动脉和肾组织的病理形态学损伤,减轻小鼠肾间质纤维化,从而延缓ARD进展。2.益肾缓衰方可通过降低ARD小鼠血清IS水平并改善ARD模型小鼠体内IS对血管内皮的损伤,改善小管间质微血管荒废,进而减轻小管间质纤维化。3.益肾缓衰方能够改善ARD小鼠小管间质微血管荒废和IS诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤,机制可能与该方抑制IS诱导下AhR/NOX4通路的激活,进而改善下游的氧化应激和炎症反应有一定的关系。
张之燕[5]（2020）在《三七注射液作用于肠道黏膜屏障调节LPS/TLR4通路对CRF大鼠肾脏保护作用的机制研究》文中认为目的:从“肠-肾轴”角度探讨三七注射液作用于肠道黏膜屏障调节LPS/TLR4通路发挥对CRF肾脏保护作用。方法:将60只清洁级SD雄性大鼠,随机分为正常组（n=10）、模型组（n=10）、三七注射液低剂量组（n=10）、三七注射液中剂量组（n=10）、三七注射液高剂量组（n=10）和盐酸贝那普利组（n=10）。正常组大鼠正常饲养,三七注射液组、模型组、盐酸贝那普利组进行单侧输尿管结扎,造模后8周检测大鼠尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）和肌酐（serum creatinine,Scr）水平,造模成功后,正常组、模型组均予以生理盐水（10m L/kg·d）腹腔注射给药;三七注射液低、中、高剂量组,分别予以三七注射液（1、2、3g/kg·d）腹腔注射给药,阳性对照组予以盐酸贝那普利5mg/kg·d腹腔注射给药,药物给药干预8周后处死大鼠,并通过内毒素检测和D-乳酸、Western blot、ELISA观察血清内毒素（LPS）、肾肠组织TLR-4蛋白表达及炎症因子TNF-α、IL-6。结果:（1）生化检测结果表明,模型组BUN、Scr水平较正常组上升（P<0.01）,而经三七注射液及贝那普利干预后,BUN和Scr水平呈下降趋势,其中三七中剂量组、三七高剂量组及阳性对照组较模型组下降,有统计学意义（P<0.01）,提示三七注射液具有降低BUN、Scr水平的作用,以三七中剂量组及三七高剂量组作用显着。（2）ELISA检测结果表明,模型组内毒素和D-LA水平较正常组上调（P<0.05）,而经三七注射液和贝那普利干预后,各用药组与模型组相比均有下降趋势,三七中剂量组和阳性对照组均具有统计学意义（P<0.05）。（3）ELISA检测结果表明,模型组TNF-α、IL-6含量高于正常组和治疗组,与正常组比具有统计学意义（P<0.01）,各用药组与模型组相比均有下降,三七中剂量组、三七高剂量组和阳性对照组具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,其中三七高剂量组与阳性对照组相比无显着差异,但此两组较三七低剂量组TNF-α、IL-6的含量下降。（4）Western blot检测结果表明,与模型组相比较,肾组织和肠组织TLR4蛋白表达的水平在三七治疗组和阳性对照组均下降（P<0.01或P<0.05）。结论:三七注射液可以抑制肾、肠炎症反应,发挥抗肾纤维化作用,其中三七注射液中剂量和高剂量较低剂量肾脏保护作用更显着,而这一保护机制可能与三七注射液作用肠道黏膜屏障调节LPS/TLR4通路对CRF大鼠肾脏发挥保护作用相关。
梁苏东[6]（2020）在《异槲皮素预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究》文中提出目的:肾缺血再灌注损伤（renal ischemia reperfusion injury,RIRI）为临床中常见的问题之一,它存在于临床中的多种病理生理过程。肾缺血再灌注损伤的病理生理学很复杂,炎症反应、氧化应激、细胞凋亡被认为在其中扮演了重要的角色。异槲皮素（isoquercetin,IQ）天然存在于多种植物中,既往研究已经发现IQ能通过抗炎症反应、抗氧化应激、抗凋亡的作用减轻脑部缺血再灌注损伤。但IQ在肾缺血再灌注损伤中的作用未见报道。本研究探究了 IQ对小鼠肾缺血再灌注损伤有无保护作用,并对相关作用机制进行初步的研究。方法:30只雄性野生型C57BL/6小鼠（10周龄,体重22-24g）按随机数字表法随机分为三组,每组10只,分别为:假手术组（Sham组）,肾缺血再灌注损伤组（RIRI组）和肾缺血再灌注损伤（RIRI）+IQ预处理组。肾缺血再灌注损伤组（RIRI组）:小鼠右侧肾脏切除术后阻断左肾蒂血管使左侧肾脏缺血30分钟,后开放左肾蒂血管夹,再灌注24小时。肾缺血再灌注损伤（RIRI）+IQ预处理组:小鼠术前连续3天,每天按20 mg/kg IQ的量以腹腔注射方式给药,后行缺血再灌注。（1）检测IQ预处理对血尿素氮、血肌酐的影响,HE染色观察肾脏组织学的变化;（2）通过对肾组织髓过氧化物酶（MPO）活性、IL-6、TNF-α的检测,评估IQ预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤抗炎症反应方面的作用。Western blot和免疫组化法检测肾脏组织中NF-κB表达水平,探讨可能的炎症反应机制。（3）通过对肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）的检测,评估IQ预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤抗氧化应激反应方面的作用。（4）通过检测肾脏组织 caspase-3、caspase-8、caspase-9 的活性以及 Bcl-2、Bax蛋白的表达量,评估IQ预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤抗凋亡方面的作用。结果:（1）与RIRI组相比,IQ预处理能显着降低小鼠肾缺血再灌注损伤后的血尿素氮、血肌酐水平,降低肾脏组织学组织损伤评分,具有一定的肾脏保护功能。（2）炎症方面的影响:与RIRI组相比,IQ预处理能显着降低肾脏组织MPO的活性,降低炎性因子IL-6、TNF-α的水平以及肾脏组织中NF-κB表达水平。（3）氧化应激方面的影响:与RIRI组相比,IQ预处理能显着升高抗氧化物质SOD、GSH、CAT的活性,降低脂质过氧化终产物MDA的水平。（4）凋亡途径的影响:与RIRI组相比,IQ预处理显着降低肾脏组织caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性,升高Bcl-2的表达量,降低Bax的表达量,上调Bcl-2/Bax。结论:（1）IQ对小鼠肾缺血再灌注损伤具有显着保护作用。（2）IQ能通过抗炎症反应的作用减轻小鼠肾缺血再灌注损伤,其可能是通过下调NF-κB通路来介导的。（3）IQ能通过抗氧化的作用对小鼠肾缺血再灌注损伤起到保护作用。（4）IQ能通过抗凋亡的作用减轻小鼠肾缺血再灌注损伤,其可能是通过调节Bcl-2家族和caspase家族成员来实现的。
秦田雨[7]（2020）在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液（Shenkang,SK）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药（ARB）组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组（n=6）。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL（生药0.13 g）/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.08 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.04 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.02 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK（0,1,2,4mg/mL）干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:（1）肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低（p<0.05或p<0.01）;与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低（p<0.05）。（2）肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加（p<0.05或p<0.01）。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低（p<0.01或p<0.001）,其中以SK中剂量组最为显着（p<0.001）。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加（p<0.001）;与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少（p<0.05或p<0.01）。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。（3）Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组p-STAT3（Try705位点）/STAT3比例显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中（p<0.01）、低剂量（p<0.001）组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2（Try1007位点）/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度（p<0.05）,（4）PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平（p<0.05 或p<0.01）。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3（Try705位点）/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高（p<0.05）,p-JAK2（Try1007位点）/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义（p>0.05）;与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高（p<0.05或p<0.001）;与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平（p<0.001）,与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK（p<0.05）及 4 mg/mL SK（p<0.01）显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平（p<0.05）。[结论]（1）系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。（2）SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。（3）SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
朱晓冉[8]（2020）在《糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症》文中指出心力衰竭（heart failure）简称心衰（HF）,是指由于心脏的收缩功能和/或舒张功能发生障碍,静脉回心血量不能充分泵出心脏,导致心室充盈压力增高,静脉系统血液淤积,动脉系统相对充盈不足,组织灌注不足,从而引起心脏循环功能障碍的综合征。心衰并不是一个独立的疾病,而是心脏疾病发展的终末阶段。尽管我们使用多种药物和非药物的方式治疗心衰,心衰患者的5年生存率仍然仅有50%。随着人口老龄化,心衰患者也日益增加,心衰的治疗已经成为世界关注的重要公共卫生问题之一。心力衰竭的临床特征是水钠潴留,在晚期失代偿心衰患者中表现的尤为突出。心脏及肾脏之间有多重共同作用的通路,相互影响,互为因果。心力衰竭的主要病理生理机制是血管收缩/钠潴留系统（肾素-血管紧张素-醛固酮系统、交感神经系统、精氨酸加压素系统）和/或血管舒张/钠排泄（钠尿肽系统）系统调节失衡导致液体潴留和电解质平衡紊乱。尽管利尿剂,β受体阻滞剂,血管紧张转换酶抑制剂（ACEI）,血管紧张素受体阻断剂（ARB）和利钠肽类药物的应用可以显着改善心衰患者的症状,延长生存时间,但是对于晚期失代偿心衰伴利尿剂抵抗和/或稀释性低钠血症的患者,仍需要探索更加安全、便捷和有效的治疗措施来解决机体水钠潴留的状态,提高患者的生存率。本课题组在以往的临床实践中发现,在心衰伴水钠潴留的患者给予糖皮质激素补充治疗,可以改善肾功能,增加肾小球滤过率,产生强大的促利尿作用,提高生存率。但是其药理学机制并不明确。我们通过临床和动物实验均证实了糖皮质激素可以抑制RAAS系统,降低血管紧张Ⅱ和醛固酮的浓度,产生强大的利尿作用。同时,我们还通过动物实验证实了糖皮质激素可以上调肾脏钠尿肽A型受体（natriuretic peptide receptor A,NPR-A）的表达,激活钠尿肽系统,从而增加肾脏血流量,改善肾功能,产生强大的利尿作用。早期研究发现,心衰患者由于神经内分泌系统激活,激素精氨酸加压素（arginine vasopressin,AVP）水平非渗透性升高而出现异常的水钠潴留、低渗透压和稀释性低钠血症。心衰时持续性AVP非渗透性释放通过肾脏精氨酸加压素2型受体（V2R）的激活调控下游的水通道蛋白和钠通道蛋白,导致水钠潴留和低钠血症,这是导致死亡和住院的危险因素。血浆AVP水平与慢性心衰患者的心衰严重程度和/或生存率密切相关。由于低钠血症的临床不良后果,V2R拮抗剂被开发用于治疗心衰患者的低钠血症。同时,人们观察到皮质醇功能减退的患者会出现低钠血症,在给予糖皮质激素补充治疗后症状得到纠正。这些前期研究都使我们猜测糖皮质激素是否也可能通过抑制V2R起到增加水钠排泄的作用呢?为了研究糖皮质激素对精氨酸加压素系统的影响,我们通过左冠状动脉结扎术造成大鼠心梗后心力衰竭模型,饲养8周后给予急性水负荷形成慢性心衰伴稀释性低钠血症模型,评估糖皮质激素对心衰大鼠稀释性低钠血症和左心室功能的改善作用,并进一步探讨糖皮质激素促水钠排泄作用的分子学机制。肌酐清除率（Creatinine clearance,Scr）作为评估肾小球滤过率（glomerular filtration rate,GFR）的标志性指标之一,容易受到饮食、生理或病理因素的影响。所以不能作为衡量GFR的金标准。胱抑素C在人体大多数细胞组织中稳定的表达,以恒定的速率产生,完全被肾小球滤过并在近端小管被重吸收和降解。由于其一般不容易受到饮食、性别、年龄、药物等外界因素的影响,因此对于GFR的评估优于Scr及其他内源性标志物。然而,以往的研究报道,皮质类固醇激素等非肾因素可以增加血清胱抑素C水平,但不影响肾功能,其机制尚不清楚。因此,我们给予正常大鼠糖皮质激素,采用金标准法（菊粉清除率法）测定GFR以及循环和组织中的胱抑素C水平,探讨糖皮质激素对胱抑素C的影响及其机制。第一部分糖皮质激素改善心衰大鼠水钠排泄和左心功能目的:心衰患者大多同时伴有肾功能不全,而肾功能不全又导致心衰症状进一步加重,二者之间形成一个恶性循环,从而加重患者心肾损伤,导致病情恶化。我们以往的临床研究表明,糖皮质激素可以改善慢性失代偿心衰患者临床症状和肾功能,产生强大的利尿作用。本研究采用动物模型,旨在明确糖皮质激素对慢性心衰伴稀释性低钠血症大鼠心肾功能的改善作用。方法:1.利用左冠状动脉前降支结扎法造成大鼠心肌梗死模型,8周后形成慢性心衰。腹腔注射6%体重的去离子水,形成慢性心衰伴稀释性低钠血症大鼠模型。2.把实验动物随机分成4组:假手术组（CON组）,慢性心衰组（CHF组）,糖皮质激素治疗组（DEX组）,糖皮质激素及糖皮质激素受体（GR）抑制剂联合治疗组（RU486+DEX组）。3.通过测定尿量、尿钠、尿渗透压、血钠和血渗透压等指标评估糖皮质激素对心衰大鼠水钠潴留的改善作用。4.评估糖皮质激素对心衰大鼠肾功能的影响。5.评估糖皮质激素是否对大鼠心脏纤维化有改善作用。6.采用Millar压力-容积导管评估心衰大鼠左心功能。结果:1.生理指标在急性水负荷试验中,与假手术组相比,心衰大鼠肾脏水钠排泄能力显着受损。CHF组大鼠在慢性心衰和急性水负荷的共同作用下表现为:尿量减少,血钠浓度升高,血渗透压降低,尿钠排泄量减少,尿渗透压升高。值得注意的是,在给予地塞米松预处理后6小时内,大鼠就明显表现出尿量的增加（P<0.01）。在药物预处理第6小时我们给予6%体重水负荷,随后地塞米松预处理的心衰大鼠依然可以排出额外的自由水摄入（P<0.01）。由于地塞米松引起排水增加,使心衰大鼠的血钠,血氯恢复至正常水平,成功逆转了心衰大鼠的稀释性低钠血症。此外,DEX预处理可逆转心衰大鼠急性水负荷诱导的血浆渗透压下降。DEX导致尿量增多的同时,伴随着尿钠的增多。DEX预处理的有益作用均可被糖皮质激素受体（GR）拮抗剂RU486所抵消,说明这些作用是GR介导的。2.糖皮质激素对肾功能的影响我们研究了糖皮质激素对心衰大鼠肾功能的影响,与正常对照组相比,心衰大鼠的肌酐清除率显着降低（P<0.01）,血清肌酐升高（P<0.05）,地塞米松可以增加肌酐清除率,降低血清肌酐（P<0.01）。但是四组间尿蛋白/肌酐并没有统计学差异（P>0.05）。这种有益的作用可被糖皮质激素受体（GR）拮抗剂RU486阻断,提示这些作用是GR介导的。3.糖皮质激素对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响我们通过Western blot和马松染色法研究地塞米松对心脏胶原蛋白的影响。我们发现,地塞米松抑制胶原蛋白Ⅰ的表达,但并不影响胶原蛋白的表达Ⅲ。马松染色同样证实地塞米松对心脏有抑制胶原蛋白合成增加的作用。4.血流动力学指标我们通过Millar压力-容积导管研究了DEX对心衰大鼠左心功能的影响。主要研究了收缩末期压力-容积关系（end-systolic pressure-volume relationship,ESPVR）、左心室压力上升最大速率（maximal slope of systolic pressure increment occurs early during isovolumic contraction,+d P/dtmax）、前负荷补充功（preload recruitable stroke work,PRSW）、等容松弛常数（iso-volumic relaxation constant,Tau）、左心室舒张末期压力（left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP）五个常见指标。收缩期末压力-容积关系（ESPVR）描述了心室在不同的左室充盈容积下所能产生的最大压力。ESPVR被认为是最可靠的心室收缩力指标。在实验中,我们通过阻断大鼠下腔静脉改变前负荷,绘制出不同负荷下心室收缩终点的压力和相应的容积值,从而得到一条具有一定斜率的直线。心力衰竭时,ESPVR变平并向右移位,表示心肌收缩力下降。由于ESPVR不受前负荷、后负荷和心率变化的影响,因此与其他血流动力学参数如射血分数、心输出量、+d P/dtmax和卒中体积相比,它是一个更好的收缩功能指标。每搏功即心肌收缩力,不仅随后负荷变化,也随前负荷变化。因此,通常采用每搏功与舒张末期容积的线性关系作为衡量心脏收缩力的指标,称为前负荷补充功（PRSW）,其对前后负荷的变化非常不敏感。心力衰竭时,心肌收缩力减弱,PRSW的斜率变小。收缩压增量的最大斜率（+d P/dtmax）出现在等容收缩的早期,是与心脏收缩力相关的参数之一。然而,+d P/dtmax受前负荷、后负荷、心率和心肌肥厚的影响,收缩力指数较差。松弛常数（Τau）表示心室压力在等容舒张期的指数衰减。多项研究表明Tau对心脏前后负荷不敏感。心力衰竭时,左室舒张压和右房压升高,Τau延长。左室舒张末期压（LVEDP）,即心脏的前负荷,是心脏收缩前心肌纤维的负荷,即舒张末期流向心室的血流量。LVEDP是心力衰竭最重要的标志。心衰时LVEDP升高,当心衰加重或失代偿时,同样可导致LVEDP升高。LVEDP的增加意味着体积超载或液体潴留。前负荷越大,下一次心脏收缩的压力越大。数据显示,与正常对照组相比,CHF组大鼠的ESPVR（环中的红线所示）降低（P<0.01）,地塞米松增加了CHF大鼠的ESPVR（图2A和B）（P<0.01）,心衰大鼠的Tau较正常对照组明显增加（P<0.05）,地塞米松预处理可以降低心衰大鼠的松弛常数（P<0.05）（图2 E）,心衰大鼠的LVEDP较正常大鼠明显升高（P<0.05）,地塞米松可降低心衰大鼠的LVEDP（P<0.01）（图2 F）。四组间+d P/dtmax和PRSW无差异（图2C和D）（P>0.05）。这些参数的变化说明心衰大鼠的心肌收缩力降低,地塞米松在增加尿量的同时显着改善了心脏的收缩功能和舒张功能。地塞米松预处理的有益作用均可被GR拮抗剂RU486所抵消,提示这些作用是由糖皮质激素受体介导的。第二部分糖皮质激素对心衰时精氨酸加压素通路的作用及分子生物学机制目的:失代偿心衰伴低钠血症时,心排血量减低、相对有效循环血容量不足不但激活了交感神经系统、RAAS系统,也导致AVP释放明显增加,AVP V2受体（V2R）表达增加,从而激活下游的腺苷酸环化酶,促进集合管水通道蛋白（AQP）的表达增加,机体排水能力下降,最终导致水潴留和稀释性低钠血症。我们的研究目的是通过动物实验,观察糖皮质激素是否可以通过抑制V2R-AQP途径,增加肾脏对自由水的排泄能力。方法:用定量Western Blot技术检测肾脏内髓V2受体的表达,免疫组织化学技术确定V2受体的表达部位。用定量Western Blot技术检测肾脏内髓水通道蛋白2（AQP2）和水通道蛋白3（AQP3）的表达,免疫组织化学技术确定水通道蛋白的表达部位。结果:1.糖皮质激素对心衰大鼠血浆AVP的作用既往的研究发现CHF伴低钠血症的患者血浆AVP浓度升高。为了进一步研究糖皮质激素对血浆AVP水平的影响,我们通过ELISA实验检测了各组大鼠血浆AVP水平。我们并没有发现CHF组大鼠与假手术组大鼠血浆AVP水平存在明显的统计学差异（P>0.05）,这可能与心衰大鼠水负荷后血浆渗透压明显下降,暂时下调了AVP水平有关。地塞米松治疗明显下调了心衰大鼠血浆的AVP水平（P<0.05）。2.糖皮质激素下调心衰大鼠V2R的表达肾脏对水的重新收主要是通过表达在集合管基底膜外侧的V2R调控。在对心衰大鼠的研究中发现血清AVP浓度升高导致了下游AQP2的上调是导致心衰水潴留的主要原因。为了研究糖皮质激素对心衰大鼠肾脏V2R的影响,我们通过Western blot检测了V2R在肾脏内髓中的表达。结果表明,CHF大鼠V2R表达高于正常对照组（P<0.05）。然而,DEX治疗降低了CHF大鼠集合管的V2R表达（P<0.05）。DEX对V2R的抑制作用可以被GR拮抗剂RU486阻断（P<0.05）（图2A）。提示这种抑制作用是通过糖皮质激素受体介导的。免疫组化结果显示V2R定位于集合管基底膜侧,进一步验证了WB的结果。3.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓质组织AQP2的表达V2R的激活可以调控AQP2向顶端膜穿梭,从而导致肾脏对自由水的渗透性增加。为了确定糖皮质激素对AQP2的影响,我们用western blot和免疫组化方法检测了AQP2蛋白的表达量和表达部位。AQP2表达在肾脏内髓集合管顶端膜,免疫印迹在25KD处有一条蛋白带,在35-45KD处有一条糖基化蛋白带。我们发现与假手术组相比,心衰大鼠的肾脏内髓集合管中的AQP2显着增加（P<0.05）,而DEX预处理可以明显降低了AQP2的表达（P<0.05）。糖基化的AQP2表达了同样的趋势。我们通过免疫组化明确了AQP2的组织学定位,证实了WB的结果。4.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓质组织AQP3的表达V2R的激活可以调控AQP3向基底外侧膜穿梭,把主细胞的水重吸收入血液。和AQP2的实验方法相同,为了确定糖皮质激素对AQP3的影响,我们用western blot和免疫组化方法检测了它们的表达。AQP3表达在肾脏内髓集合管基底膜,免疫印迹在32KD处有一条蛋白带,在40-55KD处有一条糖基化蛋白带。我们发现AQP3在心衰大鼠内髓集合管的表达也较假手术组大鼠显着升高（P<0.05）,DEX明显下调AQP3的表达（P<0.01）糖基化的AQP3表达了同样的趋势。我们通过免疫组化明确了AQP3的组织学定位,确认WB的结果。第三部分糖皮质激素通过精氨酸加压素通路逆转心衰大鼠体内钠排泄目的:心衰时,V2R也可以激活钠通道,使肾脏内髓钠通道表达增加导致体内钠潴留。这部分实验我们通过对血清和糖皮质激素诱导激酶1（SGK1）、上皮钠通道（ENa C）、钠钾二氯共转运体（NKCC2）和钠钾ATP酶（NKA）的研究,确定糖皮质激素对心衰大鼠盐代谢的调节作用。方法:用定量Western Blot技术检测肾脏内髓SGK1的表达。用定量Western Blot技术检测肾脏内髓集合管ENa C、NKCC2和NKA的表达,免疫组织化学技术确定钠通道相关蛋白的表达部位。结果:1.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织α-ENa C的表达心衰伴稀释性低钠血症的大鼠肾脏ENa C表达丰度增加（P<0.05）。给予地塞米松预处理可以下调心衰大鼠肾脏ENa C的表达量（P<0.05）。而GR抑制剂RU486可以逆转地塞米松的这一作用（P<0.05）,提示地塞米松对ENa C的抑制作用是由糖皮质激素受体介导的。2.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织NKCC2的表达在心衰伴稀释性低钠血症的大鼠其肾脏内髓组织NKCC2的表达明显高于假手术组（P<0.05）。地塞米松预处理显着降低了心衰大鼠NKCC2的表达丰度（P<0.05）。但是,给予RU486的大鼠,并没有逆转地塞米松的这种作用（P>0.05）。这说明地塞米松对NKCC2的抑制作用可能没有通过经典的GS途径。3.糖皮质激素对心衰大鼠肾脏内髓组织NKA的表达没有影响与假手术组相比,结果显示CHF组NKA的表达与假手术组并没有统计学差异（P>0.05）。同样,地塞米松预处理对心衰大鼠NKA表达无影响（P>0.05）。4.糖皮质激素下调心衰大鼠肾脏内髓组织SGK1的表达我们发现心衰大鼠肾脏SGK1的表达量明显高于假手术组（P<0.05）。地塞米松预处理可以下调心衰大鼠肾脏SGK1的表达（P<0.05）。但是我们并没有发现GS抑制剂RU486可以逆转心衰动物SGK1的表达（P>0.05）。第四部分糖皮质激素通过促进大鼠体内胱抑素C的产生增加循环中胱抑素C的水平目的:胱抑素C是一种新的内源性GFR标记物。有报道称糖尿病、甲状腺疾病、急性肾损伤、癌症、心脏功能障碍以及甾体类药物对循环中胱抑素C的水平有显着影响。因此,我们设计了本研究,以确定糖皮质激素对循环和肾脏功能中胱抑素C水平的影响。方法:1.将SD大鼠随机分为3组,正常对照组（CON）、地塞米松组（DEX）、糖皮质激素抑制剂组（DEX+RU486）。2.菊粉清除率的测定。3.用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆和肾、脑、肠、肝、肺五种组织胱抑素C。结果:1.地塞米松对血浆胱抑素C水平和菊粉清除率的影响治疗2天后,给予地塞米松的大鼠血浆中胱抑素C水平明显高于对照组大鼠。GR拮抗剂RU486完全逆转了地塞米松对胱抑素C水平的影响。但三组间肾菊粉清除率无统计学差异。2.DEX对组织中胱抑素C的影响为了研究DEX对胱抑素C的影响,我们采集了肾、脑、肠、肝、肺五种器官组织匀浆。糖皮质激素治疗组大鼠的胱抑素C水平明显高于对照组。与血浆胱抑素C水平的结果一致,RU486也能抵消DEX对上述组织中胱抑素C的影响结论:1.心衰大鼠肾脏水钠排泄能力降低、心脏功能严重受损,导致水钠潴留和稀释性低钠血症。给予地塞米松治疗可以显着增加心衰大鼠的水钠排泄能力,恢复正常的血浆渗透压,纠正稀释性低钠血症。地塞米松还可以增加心衰大鼠左心室的收缩力,恢复正常的左室舒张末期压力,改善心衰大鼠的左心功能。地塞米松的排钠利尿和改善心功能作用可以被糖皮质激素受体抑制剂RU486所消除,提示这些效应是糖皮质激素受体介导的。2.心衰大鼠的血浆AVP水平和肾脏V2R表达均较正常大鼠显着升高。地塞米松预处理可以降低血浆AVP,下调肾脏V2R蛋白表达丰度。地塞米松对血浆AVP和肾脏V2R的下调作用可以被RU486消除。说明糖皮质激素可以抑制精氨酸加压素系统。3.心衰大鼠肾脏内髓集合管AQP2和AQP3的表达增加造成体内水排泄受损,地塞米松可以下调肾脏AQP2和AQP3的表达,增加肾脏对水的排泄。心衰时,肾脏ENa C和NKCC2的表达增加,造成钠排泄障碍。地塞米松可以下调肾脏ENa C和NKCC2的表达,增加钠的排泄。以上说明糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素途径调控下游水钠通道的蛋白表达,增加了心衰伴稀释性低钠血症大鼠的水钠排泄。4.糖皮质激素在不影响肾功能的情况下,可以促进组织中胱抑素C的产生,导致血清胱抑素C水平升高。
霍帅[9]（2020）在《高尿酸肾病患者血液代谢组学分析及肾茶治疗高尿酸肾病的实验研究》文中指出目的:越来越多的流行病学研究和分子研究证明,高尿酸血症可能是慢性肾脏病发生或进展至终末期肾病的独立危险因素。随着对高尿酸血症与肾脏损害关系及机制愈加深入的探究,高尿酸肾病已成为肾脏病领域研究的热点。然而,高尿酸肾病的代谢变化、肾脏损伤机制仍未阐明,降尿酸治疗的有效性也尚存争议。肾茶是在我国民间被广泛应用于泌尿系感染、尿路结石及慢性肾炎治疗的一种传统草药。许多研究已证实肾茶具有治疗高尿酸血症的功效,但其对于高尿酸肾病治疗效果及作用机理却鲜有报道。本研究通过对高尿酸肾病患者血液的代谢组学分析,探究高尿酸肾病患者的代谢特征;并通过肾茶治疗高尿酸肾病大鼠的实验研究,探究肾茶对高尿酸肾病大鼠的治疗效果及药效机制,本研究旨在进一步阐释高尿酸血症致肾脏损伤的分子机制,同时为肾茶在高尿酸肾病的临床应用提供理论依据。方法:1.代谢组学分析基于“中医体质与健康医学协同创新中心”项目的临床资料数据库,从生物标本库中筛选出符合高尿酸肾病诊断标准的血清样本30例,健康人群血清样本30例。采用超高效液相色谱-串联质谱测定法对血清样本进行代谢组学检测,分析高尿酸肾病患者与健康人群之间的差异代谢产物,探索其潜在生物标志物;结合其富集到的代谢过程、代谢通路及信号转导通路,分析高尿酸肾病患者肾损伤的潜在机制,并从中遴选相关通路在后续动物实验研究中进行验证。2.动物实验研究①高尿酸肾病大鼠模型的评价通过对高尿酸肾病动物模型相关文献的回顾分析,遴选出氧嗪酸钾联合尿酸灌胃的造模方式。将20只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组,模型A组,模型B组,模型C组,分别给予三个模型组大鼠含有低剂量（15mg/ml）、中剂量（30mg/ml）和高剂量（60mg/ml）尿酸的氧嗪酸钾（75mg/ml）混悬液,给予对照组大鼠0.3%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,灌胃量均为10ml/kg,连续4周。灌胃3周后,获取大鼠血液样本,灌胃4周后获取大鼠血液及肾脏组织标本,分离出血清用于检测血尿酸、尿素氮、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇,将肾脏组织标本制成石蜡切片并进行苏木素-伊红染色,观察大鼠肾脏病理形态学变化。确定高尿酸肾病大鼠成模条件,为后续的肾茶干预研究做准备。②肾茶治疗高尿酸肾病的药效研究基于①中探索出的高尿酸肾病大鼠造模方法。将40只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、高尿酸肾病模型组、肾茶低剂量组、肾茶高剂量组及别嘌呤醇组,采用边造模边干预的方式,每天上午给予对照组0.3%羧甲基纤维素钠溶液,其余各组给予造模药物。下午给予对照组、高尿酸肾病模型组纯水,分别给予肾茶低剂量组、肾茶高剂量组及别嘌呤醇组肾茶水煎剂3.125g/kg、肾茶水煎剂6.25g/kg及别嘌呤醇溶液50mg/kg。每次给药体积均为10ml/kg,灌胃5周。4周后,获取大鼠的血液标本,用代谢笼收集24h尿液标本。5周后,获取大鼠的血液标本、24h尿液标本及肾脏组织标本。上述标本分离出的血清用于检测血尿酸、尿素氮、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇,尿液上清用于检测尿尿酸、尿肌酐,并利用尿酸排泄分数公式估尿酸排泄情况:[（血肌酐×尿尿酸）/（血尿酸X尿肌酐）]×100%;肾脏组织标本制成石蜡切片并进行苏木素-伊红染色评估肾脏组织形态变化。③肾茶治疗高尿酸肾病的机制探讨基于高尿酸肾病患者血液代谢组学分析结果利用肾茶治疗高尿酸肾病药效研究中各组大鼠的肾组织,免疫组化法检测肾组织中CD68蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测促炎细胞因子IL-1 β、IL-6、TNF-α及MCP-1的基因表达,酶联免疫吸附测定法检测肾组织中的IL-1 β蛋白表达,评估高尿酸肾病大鼠肾组织炎症以及肾茶对肾组织炎症的影响;利用蛋白质印迹法、免疫组化法对代谢组学研究所筛选出的潜在信号转导通路进行验证,并观察肾茶对通路的调控作用。结果:1.代谢组学结果显示:①潜在生物标志物:相比健康人群,高尿酸肾病患者有32种差异代谢产物,其中特征变量投影重要性值大于1的有18种,可作为潜在的生物标志物,包括:升高的有氧化型色氨酸/苯丙氨酸、氧化型酪氨酸、尿酸、乳酸、柠檬酸、4,6-二羟基喹啉、溶血磷脂酰胆碱（16:1）、溶血磷脂酰胆碱（18:1）、尿苷、富马酸、琥珀酸、草酸,降低的有谷胱甘肽、谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽、亮氨酸、苯丙氨酸、3-羟基丁酸、左旋缬氨酸、L-色氨酸。②富集代谢过程及代谢通路:利用MetaboAnalyst4.0富集到28个代谢过程及21条代谢通路,它们分别是柠檬酸循环（TCA循环）、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、氨酰tRNA生物合成、丙酮酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成、丁酸代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、乙醛酸和二元酸代谢、酮体的合成与降解、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、色氨酸代谢、苯丙氨酸代谢、精氨酸生物合成、泛酸和辅酶A生物合成、丙酸盐代谢、糖酵解/糖异生、谷胱甘肽代谢、甘油磷脂代谢、嘧啶代谢、酪氨酸代谢、嘌呤代谢。③富集信号转导通路:利用Cytoscape2.5.3软件ClueGO富集到1942条通路,包括p38 MAPK信号通路、NIK/NF κB信号通路、ERK1/ERK2信号通路、免疫系统调节、IκB/NFκB信号通路、TNF信号通路、TGF β 1通路等,我们选择p38 MAPK及NFκB通路在动物实验研究中进行验证。2.动物实验结果显示:①给药诱导3周后,与对照组相比,尿素氮、血肌酐较对照组无显着变化（P>0.05）,三个模型组的高密度脂蛋白胆固醇均显着升高（P<0.05）,模型C组的总胆固醇及三个模型组的血尿酸水平均显着升高（P<0.05）,;4周后,与对照组相比,三个模型组的血尿酸水平显着升高（P<0.05）,三个模型组的尿素氮及模型A组的血肌酐无差异（P>0.05）,模型B组、模型C组的血肌酐明显升高（P<0.05）,模型B组的甘油三酯显着降低（P<0.05）。病理结果显示:模型A组中大鼠肾脏仅部分肾小管出现扩张,其病理评分与Con组之间差异无统计学意义（P>0.05）,模型B组和模型C组的肾小管扩张更为严重,伴肾小管上皮萎缩、刷状缘减少、细胞核数目减少及炎症细胞浸润,它们的病理评分均显着高于Con组（P<0.01）。②肾茶水煎剂干预高尿酸肾病大鼠4周,与对照组相比,高尿酸肾病模型组大鼠的尿量变化不显着（P>0.05）,血尿酸、尿素氮、血肌酐、尿尿酸、尿酸排泄分数及总胆固醇均显着升高（P<0.05）;与高尿酸肾病模型组相比,肾茶高剂量组大鼠的尿量高于模型组,但差异无统计学意义（P>0.05）,肾茶低剂量及高剂量组的血尿酸、尿素氮、血肌酐变化不显着（P>0.05）,肾茶高剂量组尿尿酸及尿肌酐较模型组均显着降低（P<0.05）,别嘌呤醇组的血尿酸、尿素氮、总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇显着降低（P<0.05）。干预5周,与对照组相比,高尿酸肾病模型组大鼠的尿量变化不显着（P>0.05）,血尿酸、尿素氮、血肌酐、尿尿酸均显着升高（P<0.05）,甘油三酯显着降低（P<0.05）;与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量及肾茶高剂量组大鼠的血尿酸降低,但差异无统计学意义（P>0.05）,肾茶低剂量组及肾茶高剂量组的尿素氮、血肌酐均出现显着降低（P<0.05）,肾茶高剂量组尿尿酸显着降低（P<0.05）,别嘌呤醇组的血尿酸显着降低而尿酸排泄分数显着升高（P<0.05）。病理结果显示,高尿酸肾病模型组肾小管明显扩张,伴肾小管上皮萎缩、刷状缘减少、细胞核数目减少及炎症细胞浸润,病理评分显着高于对照组（P<0.05）,与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量组、肾茶高剂量组的大鼠肾脏病理损伤程度明显减轻,病理评分均显着降低（P<0.05）,别嘌呤醇组大鼠的肾脏病理损伤无明显改善,病理评分与模型组间差异无统计学意义（P>0.05）。③肾茶水煎剂对高尿酸肾病大鼠肾脏炎症及相关调控通路p38 MAPK/NFκB蛋白表达的影响。免疫组化结果显示,与对照组相比,高尿酸肾病模型组大鼠肾间质中巨噬细胞浸润明显,CD68表达量显着升高（P<0.05）,与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量、肾茶高剂量组及别嘌呤醇组大鼠肾间质巨噬细胞浸润均出现明显减少,CD68的表达均显着减少（P<0.05）。实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,与对照组相比,高尿酸肾病大鼠肾组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1基因表达均显着升高（P<0.05）,与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量组IL-1β的基因表达显着减少（P<0.05）,肾茶高剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1基因表达均显着减少（P<0.05）,别嘌呤醇组IL-1 β、MCP-1的基因表达量显着减少（P<0.05）。酶联免疫吸附测定结果显示,与对照组相比,高尿酸肾病模型组大鼠肾组织IL-1β蛋白表达显着升高（P<0.05）,肾茶低、高剂量组及别嘌呤醇组的IL-1 β蛋白表达均显着减少（P<0.05）。蛋白质印迹结果显示,与对照组相比,高尿酸肾病大鼠肾组织总蛋白中的P-p38 MAPK、p-IκBα蛋白表达量及核蛋白中的P-NFκB含量均显着升高（P<0.05）;与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量组、高剂量组及别嘌呤醇组大鼠肾组织总蛋白中的P-p38 MAPK、p-IκBα表达量以及核蛋白中的P-NFκB含量均显着降低（P<0.05）。免疫组化结果显示,与对照组相比,高尿酸肾病大鼠肾组织中的P-NFκ B表达量显着升高（P<0.05）;与高尿酸肾病模型组相比,肾茶低剂量组、高剂量组及别嘌呤醇组大鼠肾组织中P-NFκB表达量显着降低（P<0.05）。结论:1.高尿酸肾病患者体内存在糖、脂、蛋白质代谢紊乱,主要涉及柠檬酸循环、糖酵解、脂肪酸代谢及氨基酸代谢等,并发现多个与氧化应激和肾脏损伤密切相关的潜在生物标志物。2.氧嗪酸钾（750mg/kg）联合中剂量（300mg/kg）、高剂量（600mg/kg）尿酸的混悬液诱导4周,可成功构建出高尿酸肾病大鼠模型。3.别嘌呤醇对高尿酸肾病大鼠的血尿酸具有改善作用,但对肾功能及肾脏病理损伤无明显改善;肾茶水煎剂可以保护高尿酸肾病大鼠肾功能并能改善其病理损伤。4.高尿酸肾病大鼠肾组织中p38 MAPK/NFκB通路激活,出现明显的肾脏炎症反应,肾茶水煎剂可通过抑制p38 MAPK/NFκB通路改善高尿酸肾病大鼠肾脏炎症反应。
吴济强[10]（2020）在《氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究》文中研究表明背景:阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）是最常见的睡眠呼吸紊乱类型,慢性间断性缺氧（CIH）是OSA的主要病理生理特征。近年来研究发现,单纯的OSA是慢性肾脏病（CKD）的独立危险因素。肾小管周毛细血管（PTC）丧失和肾脏纤维化是CKD的主要特征。大量的研究表明,血管紧张素II受体阻滞剂（ARBs）除了降低血压外,还具有减少PTC丧失,减轻肾脏细胞凋亡、抑制肾纤维化,延缓CKD进展的作用。但CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的分子机制及氯沙坦（losartan）的肾脏保护作用尚不完全清楚。目的:本课题通过OSA动物模型研究CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的病理机制,并了解氯沙坦干预对CIH肾脏损害的保护作用。进一步通过间断性缺氧（IH）细胞实验,初步探讨IH对肾小管上皮细胞（TEC）的损害及氯沙坦的干预作用。本研究内容分为三部分,第一部分探讨CIH诱导大鼠PTC丧失的机制及氯沙坦的保护作用。第二部分研究氯沙坦对CIH诱导的大鼠TEC凋亡、肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）、肾脏纤维化的干预作用;第三部分为IH对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡和损伤的影响及氯沙坦干预的体外研究。方法:第一部分:40只健康雄性Wistar大鼠,分为4组:对照组（Control）,CIH组,CIH+氯沙坦组（CIH+Losartan）、CIH+生理盐水组（CIH+NS）。大鼠在CIH环境下暴露6周后,腹主动脉内采血,检测肾功能;肾脏标本行HE染色观察TEC损害,透射电镜（TEM）检查TEC和PTC的超微结构改变;CD34免疫组化染色检测PTC密度;ELISA法检测肾脏血管紧张素II（Ang II）水平;分别用免疫组化、RT-qPCR、Western blotting检测肾脏缺氧诱导因子1-α（HIF-1α）、血管紧张素II 1型受体（AT1R）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）的表达。第二部分:在上述实验的基础上,Masson染色和天狼猩红染色评价肾脏纤维化程度;TUNEL染色评价TEC凋亡;通过免疫组化、RT-qPCR、Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达了解凋亡机制;免疫组化半定量检测转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、E-钙黏蛋白（E-cad）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,评价肾脏促纤维化因子的表达和肾小管上皮细胞EMT。RT-qPCR和Western blotting进一步检测肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA水平。第三部分:体外实验分为5组:对照组、IH组、IH+10-7mol/L Losartan组,IH+10-6mol/L Losartan组,IH+10-55 mol/L Losartan组。除对照组外,其余四组的HK-2细胞在IH环境下培养15小时。MTT法评价HK-2细胞活力;流式细胞术检测HK-2细胞凋亡水平;RT-qPCR、Western blotting检测HK-2细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3基因和蛋白的表达。结果:第一部分:与对照组比较,CIH引起大鼠血清胱抑素C水平增高,TEC呈空泡样变性,细胞明显增大;TEC核固缩、染色质边缘化、线粒体肿胀。CD34免疫组化和TEM检查显示,CIH促进PTC丧失、管腔狭窄。CIH增加大鼠肾皮质HIF-1α、Ang II、AT1R、VEGF、TSP-1的表达。氯沙坦预处理降低大鼠血清胱抑素C水平,减轻TEC损伤;增加PTC密度,减轻PTC管腔狭窄;降低肾皮质Ang II、AT1R、HIF-1α、VEGF、TSP-1表达水平。第二部分:与对照组相比,CIH引起大鼠肾脏TEC凋亡数明显增加,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值显着降低,Bax、Caspase-3表达显着增高;TGF-β1、CTGF、α-SMA表达增高,E-cad表达降低,肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化程度增加。氯沙坦预处理后TEC凋亡数降低,肾脏Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值增加,Bax、Caspase-3表达降低;TGF-β1、CTGF、α-SMA表达降低,E-cad表达增加,肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化明显减轻。第三部分:与对照组相比,IH组的HK-2细胞活力降低,细胞凋亡比例明显增加。与IH组相比,氯沙坦呈剂量依赖性减轻HK-2细胞凋亡。与对照组相比,IH组Bcl-2的表达和Bcl-2/Bax比值降低,Bax和Caspase-3表达升高。与IH组相比,氯沙坦预处理后Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值增加,Bax和Caspase-3表达降低,且呈剂量依赖性。结论:1.CIH激活大鼠肾内RAS,损害TEC,引起肾脏血管生成因子失衡,导致PTC丧失。氯沙坦通过下调肾脏RAS,改善PTC与TEC的相互影响,进而调节血管生成因子的平衡,减轻CIH诱导的大鼠PTC丧失。2.CIH诱导大鼠TEC凋亡,促进肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化。氯沙坦通过抑制TEC凋亡和肾小管上皮细胞EMT,继而减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化。3.IH诱导HK-2细胞凋亡增加,氯沙坦通过调节Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路,呈剂量依赖性抑制IH诱导的HK-2细胞凋亡。
二、锂导致大鼠慢性肾功能不全时肾小球毛细血管数目的改变（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、锂导致大鼠慢性肾功能不全时肾小球毛细血管数目的改变（论文提纲范文）
（1）虫草益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织RhoA/ROCK1信号通路的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 综述 |
| 1 慢性肾衰竭的中医学研究 |
| 1.1 慢性肾衰竭的中医病名研究 |
| 1.2 慢性肾衰竭的中医病因病机、辨证论治研究 |
| 1.3 中医药治疗慢性肾衰竭的研究 |
| 2 慢性肾衰竭的现代医学研究进展 |
| 2.1 慢性肾衰竭的流行病学研究 |
| 2.2 慢性肾衰竭的发病原因和机制研究 |
| 2.3 慢性肾衰竭的治疗进展研究 |
| 3 RhoA∕ROCK1信号通路的研究进展 |
| 3.1 RhoA∕ROCK1信号通路的概述 |
| 3.2 RhoA∕ROCK1信号通路与多种肾脏疾病 |
| 3.3 RhoA∕ROCK1信号通路与肾间质纤维化 |
| 实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 各组大鼠一般情况 |
| 1.1 实验过程中各组大鼠存活情况及分析 |
| 1.2 各组大鼠宏观表征变化情况 |
| 1.3 各组大鼠体重变化情况 |
| 1.4 各组大鼠尿量变化情况 |
| 2 生化指标 |
| 2.1 各组大鼠血清肌酐水平变化情况 |
| 2.2 各组大鼠血清尿素氮水平变化情况 |
| 2.3 各组大鼠24小时尿蛋白定量水平变化情况 |
| 3 各组大鼠肾脏脏器系数观察 |
| 4 各组大鼠肾脏组织病理形态学变化情况 |
| 4.1 各组大鼠肾脏大体形态学观察 |
| 4.2 HE染色 |
| 4.3 Masson染色 |
| 4.4 各组大鼠Masson染色肾间质纤维化面积统计结果 |
| 5 大鼠肾组织中PDGF-BB、ILK、ROCK1、COL-I、COL-Ⅲ蛋白表达的免疫组化检测 |
| 5.1 免疫组织化学人工判定结果 |
| 5.2 免疫组 织化学法检测各组大鼠PDGF-BB、ILK、ROC K1、COL - I、COL-III |
| 6 大鼠肾组织中RhoA、ROCK1、ILK、E-cadherin、a-SMA蛋白的WestnBlot检测 |
| 6.1 大鼠肾组织RhoA蛋白表达的WestenBlot检测 |
| 6.2 大鼠肾组织ROCK1蛋白表达的WestenBlot检测 |
| 6.3 大鼠肾组织ILK蛋白表达的WestenBlot检测 |
| 6.4 大鼠肾组织E-c adherin蛋白表达的WestenBl ot检测 |
| 6.5 大鼠肾组织a-SMA蛋白表达的WestenBlot检测 |
| 7 大鼠肾组织中RhoA、ROCK1、ILK、E-cadherin、a-SMAmRNA表达情况 |
| 7.1 大鼠肾组织RhoAmRNA表达情况 |
| 7.2 大鼠肾组织ROCK1mRNA表达情况 |
| 7.3 大鼠肾组织ILKmRNA表达情况 |
| 7.4 大鼠肾组织E-cadherinmRNA表达情况 |
| 7.5 大鼠肾组织a-SMAmRNA表达情况 |
| 讨论 |
| 1 实验设计 |
| 1.1 肾纤维化大鼠模型的建立及评价 |
| 1.2 对照药物的选择 |
| 1.3 选取指标的说明 |
| 1.4 检测方法的选择 |
| 1.5 检测时间点的选择 |
| 1.6 药物剂量的选择 |
| 2 虫草益肾方的组方研究 |
| 2.1 虫草益肾方前期研究进展 |
| 2.2 虫草益肾方组方分析 |
| 3 虫草益肾方对肾脏的保护作用 |
| 3.1 虫草益肾方对UUO模型大鼠一般情况的影响 |
| 3.2 虫草益肾方对UUO模型肾脏病理组织学的改变 |
| 3.3 虫草益肾方对UUO大鼠生化指标的影响 |
| 4 虫草益肾方对UUO大鼠RhoA∕ROCK1信号通路的影响 |
| 4.1 虫草益肾方对UUO大鼠RhoA、ROCK1的影响 |
| 4.2 虫草益肾方对UUO大鼠PDGF-BB的影响 |
| 4.3 虫草益肾方对UUO大鼠ILK的影响 |
| 5 问题与展望 |
| 结论 |
| 创新点说明 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（2）急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊PCI术后心功能的转归及影响因素分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 接受急诊PCI的STEMI患者不同射血分数组的临床特点 |
| 一、资料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 第二部分 接受急诊PCI的STEMI患者术后1年心功能转归 |
| 一、资料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 植入型心律转复除颤器在心肌梗死后心脏性猝死中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病的临床再研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 1 研究资料 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 终止试验、脱落病例标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 随机化分组 |
| 2.2 治疗方法 |
| 3 观察与随访 |
| 4 观察指标 |
| 4.1 安全性指标 |
| 4.2 疗效性指标 |
| 5 疗效评定标准 |
| 5.1 中医症候疗效评定标准:采用积分比法（尼莫地平法） |
| 5.2 临床疗效评定标准 |
| 5.3 不良反应 |
| 6 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 两组患者治疗前一般情况的比较 |
| 2 两组患者治疗前后UACR的比较 |
| 3 两组患者治疗前后血清SCr、eGFR、Cys-C的比较 |
| 4 两组患者治疗前后FBG、HbA1c的比较 |
| 5 两组患者治疗前后中医症状积分的比较 |
| 6 两组患者治疗前后中医单项症状的比较 |
| 7 两组患者中医临床症状体征总疗效的比较 |
| 8 两组患者临床总疗效的比较 |
| 9 两组患者肾功能不全、肾功能进展和终点事件发生率的比较 |
| 10 两组患者不良反应发生率的比较 |
| 讨论 |
| 1 现代医学对本病的研究 |
| 1.1 蛋白尿与DKD |
| 1.2 Cys-C与DKD |
| 1.3 RAAS与DKD |
| 2. 祖国医学对本病的研究 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.2 辨证论治 |
| 3 导师观点 |
| 4 芪蛭降糖胶囊组方分析及现代药理学研究 |
| 4.1 组方分析 |
| 4.2 现代药理学研究 |
| 5 芪蛭降糖胶囊疗效分析 |
| 5.1 减少尿蛋白 |
| 5.2 延缓早期肾功能进展 |
| 5.3 改善中医临床症状 |
| 6 本研究的意义、不足与展望 |
| 6.1 本研究的意义 |
| 6.2 本研究的不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 中药治疗糖尿病肾脏疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
（4）益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 动脉粥样硬化性肾病的中西医研究概况 |
| 参考文献 |
| 综述二 硫酸吲哚酚对多系统毒性作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 蛋白结合毒素的中西医治疗现状 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 益肾缓衰方对ARD小鼠小管间质纤维化的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 益肾缓衰方改善ARD小鼠小管间质纤维化的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验三 益肾缓衰方对IS刺激下血管内皮损伤的作用和机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（5）三七注射液作用于肠道黏膜屏障调节LPS/TLR4通路对CRF大鼠肾脏保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1 CKD的概念 |
| 2 CKD的流行病学调查现状 |
| 3 影响CKD的危险因素 |
| 4 肾纤维化与炎症反应 |
| 5 肠道菌群的概念及功能 |
| 6 肠道菌群微生态(肠黏膜生物屏障)与肾脏病关系概述 |
| 7 肠道微生态与肾脏病二者之间相互作用关系 |
| 8 炎症反应及肠道微生态在CRF进展中的作用 |
| 9 CKD的中医病因病机 |
| 10 中医对“肠肾轴”理论的认识 |
| 11 基于“肠-肾轴”,探讨三七治疗CRF的作用机制 |
| 第二章 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 6 存在的不足与展望 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肠道微生态调控与慢性肾脏疾病的中西医研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（6）异槲皮素预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立及IQ预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的肾功能及其相应肾脏组织学的保护作用 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 第一部分小结 |
| 第二部分 IQ预处理在肾缺血再灌注损伤中抗炎症反应的作用及其机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三部分 IQ预处理在肾缺血再灌注损伤中抗氧化应激的作用及其机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四部分 IQ预处理在肾缺血再灌注损伤中抗凋亡的作用及其机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 肾缺血再灌注损伤的病理生理过程及治疗的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间发表学术论文目录 |
| 英文缩略词及其中英文对照表 |
| 致谢 |
（7）肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
| 1 病因研究 |
| 2 发病机制研究 |
| 3 治疗与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
| 1 病名研究 |
| 2 病因病机研究 |
| 3 防治研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果和讨论 |
| 3 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
| 个人简历 |
（8）糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 糖皮质激素改善心衰大鼠水钠排泄和左心功能 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖皮质激素对心衰时精氨酸加压素通路的作用及分子生物学机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 糖皮质激素通过精氨酸加压素通路逆转心衰大鼠体内钠排泄 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 糖皮质激素通过促进大鼠体内胱抑素 C 的产生增加循环中胱抑素 C 的水平 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 糖皮质激素促利尿作用的机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）高尿酸肾病患者血液代谢组学分析及肾茶治疗高尿酸肾病的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1.1 高尿酸肾病的西医临床研究进展 |
| 1.1.1 流行病学 |
| 1.1.2 临床表现 |
| 1.1.3 药物治疗 |
| 1.2 高尿酸肾病与代谢组学研究 |
| 1.2.1 高尿酸血症的代谢组学研究 |
| 1.2.2 肾脏病的代谢组学研究 |
| 1.3 高尿酸肾病发病机制研究进展 |
| 1.3.1 肾小管间质炎症 |
| 1.3.2 肾小管细胞凋亡 |
| 1.3.3 肾小管EMT及间质纤维化 |
| 1.3.4 肾脏其他病变 |
| 1.4 高尿酸肾病动物模型研究进展 |
| 1.4.1 抑制尿酸酶活性法 |
| 1.4.2 腺嘌呤法 |
| 1.4.3 次黄嘌呤法 |
| 1.4.4 酵母法 |
| 1.4.5 尿酸法 |
| 1.5 高尿酸肾病的中医研究进展 |
| 1.5.1 病因病机 |
| 1.5.2 中医药治疗 |
| 1.6 肾茶的研究进展 |
| 1.6.1 肾茶治疗高尿酸血症的相关研究 |
| 1.6.2 肾茶治疗肾脏病的相关研究 |
| 第二部分 高尿酸肾病患者血液代谢组学研究 |
| 2.1 研究方案 |
| 2.1.1 样本及数据来源 |
| 2.1.2 高尿酸肾病的诊断标准 |
| 2.1.3 样本筛选标准 |
| 2.1.4 临床资料收集 |
| 2.1.5 代谢组学检测 |
| 2.1.6 数据处理及分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 样本基线资料 |
| 2.2.2 差异代谢产物 |
| 2.2.3 潜在生物标志物及相关通路 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 高尿酸肾病患者与健康人群基线资料对比 |
| 2.3.2 高尿酸肾病患者与健康人群的代谢差异 |
| 2.3.3 高尿酸肾病患者中异常的信号转导通路 |
| 2.4 结论 |
| 第三部分 实验研究 |
| 3.1 实验一 高尿酸肾病动物模型的评价 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 统计学方法 |
| 3.1.4 结果 |
| 3.1.5 结论 |
| 3.2 实验二 肾茶水煎剂治疗高尿酸肾病的药效学研究 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 统计学方法 |
| 3.2.4 结果 |
| 3.2.5 结论 |
| 3.3 实验三 肾茶对高尿酸肾病大鼠肾脏炎症的影响 |
| 3.3.1 实验材料 |
| 3.3.2 实验方法 |
| 3.3.3 统计学方法 |
| 3.3.4 结果 |
| 3.3.5 结论 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 高尿酸肾病大鼠模型的选择与探索 |
| 3.4.2 肾茶治疗高尿酸肾病大鼠的药效特点 |
| 3.4.3 肾茶通过p38 MAPK/NFκB通路调控肾脏炎症 |
| 3.5 问题与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1:动物随机分组（实验一） |
| 附录2:动物随机分组（实验二） |
| 附录3:英文缩略语表 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（10）氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩略词中引文对照表 |
| 第一部分 前言 |
| 1.阻塞性睡眠呼吸暂停和慢性肾脏疾病概述 |
| 2.OSA和 CKD的发病情况 |
| 3.OSA与 CKD的临床特点 |
| 4.OSA导致CKD的病理机制 |
| 4.1 直接途径-缺氧 |
| 4.2 间接途径 |
| 4.2.1 RAAS激活 |
| 4.2.2 交感神经兴奋性增强 |
| 4.2.3 氧化应激 |
| 4.2.4 高血压 |
| 4.2.5 内皮功能紊乱和动脉粥样硬化 |
| 5.CKD导致OSA的病理机制 |
| 5.1 上气道狭窄 |
| 5.2 化学感受性反射改变 |
| 第二部分 氯沙坦通过调节肾脏肾素-血管紧张素系统和血管生成因子减轻慢性间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要实验仪器 |
| 2.2 主要试剂与耗材 |
| 2.3 主要实验试剂配制 |
| 2.4 动物分组及间断性缺氧设备 |
| 2.4.1 动物来源 |
| 2.4.2 动物分组 |
| 2.4.3 间断性缺氧设备 |
| 2.5 慢性间断性缺氧实验 |
| 2.6 实验标本采集 |
| 2.7 肾脏功能检测 |
| 2.8 肾脏病理学检查 |
| 2.8.1 苏木精-伊红(HE)染色 |
| 2.8.2 免疫组化检测大鼠肾脏CD34、HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-表达 |
| 2.8.3 透射电镜检查 |
| 2.9 酶联免疫吸附测定法检测大鼠肾脏AngII的水平 |
| 2.10 RT-qPCR检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达 |
| 2.10.1 TRIzol法提取RNA |
| 2.10.2 检测RNA浓度 |
| 2.10.3 RNA反转录成c DNA |
| 2.10.4 RT-qPCR反应 |
| 2.10.5 结果分析 |
| 2.11 免疫印迹试验检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达 |
| 2.11.1 肾脏蛋白提取 |
| 2.11.2 BCA法检测蛋白质浓度 |
| 2.11.3 SDD-PAGE电泳 |
| 2.11.4 转模 |
| 2.11.5 封闭 |
| 2.11.6 一抗孵育 |
| 2.11.7 二抗孵育 |
| 2.11.8 曝光 |
| 2.11.9 蛋白表达检测 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 CIH和氯沙坦对大鼠体重和肾脏功能的影响 |
| 4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC损伤 |
| 4.3 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC超微结构损伤 |
| 4.4 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC超微结构损害 |
| 4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC丧失 |
| 4.6 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α表达 |
| 4.7 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏RAS激活 |
| 4.7.1 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏Ang II水平 |
| 4.7.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏AT1R表达 |
| 4.8 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏血管生成因子失衡 |
| 4.9 氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达 |
| 4.10 免疫印迹试验证实氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达 |
| 5.讨论 |
| 第三部分 氯沙坦通过抑制肾小管上皮细胞凋亡和上皮细胞-间充质转化减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 大鼠肾脏Masson染色 |
| 2.2 大鼠肾脏天狼猩红染色 |
| 2.3 TUNEL法检测大鼠肾小管上皮细胞凋亡 |
| 2.4 免疫组化检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA表达 |
| 2.5 RT-qPCR检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA mRNA表达 |
| 2.6 免疫印迹试验检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化 |
| 4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏肾小管上皮细胞凋亡 |
| 4.3 氯沙坦调节大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 表达 |
| 4.4 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF表达 |
| 4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT |
| 4.6 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达 |
| 4.7 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMAmRNA表达 |
| 4.8 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达的影响 |
| 4.9 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达的影响 |
| 5.讨论 |
| 第四部分 :氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡的体外实验研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 细胞 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要试剂与耗材 |
| 2.4 主要试剂的配制 |
| 2.5 细胞复苏 |
| 2.6 细胞传代 |
| 2.7 细胞计数 |
| 2.8 细胞冻存 |
| 2.9 实验分组及IH模型暴露细胞 |
| 2.10 倒置显微镜观察HK-2细胞形态 |
| 2.11 MTT法检测细胞存活 |
| 2.12 流式细胞术定量检测细胞凋亡 |
| 2.13 RT-qPCR检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达 |
| 2.14 免疫印迹试验检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 各组HK-2细胞形态学改变 |
| 4.2 氯沙坦减轻IH诱导的HK-2细胞活性降低 |
| 4.3 氯沙坦抑制IH诱导的HK-2细胞凋亡 |
| 4.4 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 mRNA表达 |
| 4.5 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 蛋白表达 |
| 5.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
四、锂导致大鼠慢性肾功能不全时肾小球毛细血管数目的改变（论文参考文献）
- [1]虫草益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织RhoA/ROCK1信号通路的影响[D]. 于珊珊. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [2]急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊PCI术后心功能的转归及影响因素分析[D]. 王宇. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(09)
- [3]芪蛭降糖胶囊治疗糖尿病肾脏疾病的临床再研究[D]. 刁珂. 山东中医药大学, 2020(01)
- [4]益肾缓衰方调控IS/AhR/NOX4通路改善动脉粥样硬化性肾病的机制研究[D]. 郭传. 中国中医科学院, 2020(01)
- [5]三七注射液作用于肠道黏膜屏障调节LPS/TLR4通路对CRF大鼠肾脏保护作用的机制研究[D]. 张之燕. 广西中医药大学, 2020
- [6]异槲皮素预处理对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究[D]. 梁苏东. 苏州大学, 2020(06)
- [7]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]糖皮质激素通过抑制精氨酸加压素通路逆转急性水负荷心衰大鼠稀释性低钠血症[D]. 朱晓冉. 河北医科大学, 2020(06)
- [9]高尿酸肾病患者血液代谢组学分析及肾茶治疗高尿酸肾病的实验研究[D]. 霍帅. 广州中医药大学, 2020(06)
- [10]氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究[D]. 吴济强. 兰州大学, 2020(01)