一、肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究（论文文献综述）
张嘉敏[1]（2019）在《新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究》文中认为细胞移植技术的出现为多种疑难杂症的治愈提供了新的治疗手段,为患者带了新的希望。但细胞移植后,机体免疫系统对移植物的免疫排斥反应严重限制了其治疗效果。因此,开发新型免疫屏蔽材料是解决这个问题的关键。基于材料表面生物粘附触发免疫排斥反应的理论,本文成功设计并开发了多种新型的免疫屏蔽水凝胶材料,并利用该水凝胶材料包埋胰岛用于糖尿病小鼠的长效血糖调控。阴离子聚电解质海藻酸钠（Alginate）可在室温/体温条件下与二价阳离子（如Ca2+或Ba2+）交联形成水凝胶,在细胞包埋领域具有广泛应用。但由于自身的免疫原性,海藻酸盐水凝胶在植入后会引起异物反应（FBR）。受具有优异抗生物粘附性质的两性离子材料启发,本文首次发现二价阳离子的用量会显着影响水凝胶的电性,进而影响表面生物粘附行为。与两性离子材料一样,当水凝胶整体电荷接近中性时（Ca2+浓度0.54mM或Ba2+浓度0.9mM）,能克服其与生物分子的静电作用力和疏水作用力,从而防止蛋白、细胞、细菌等在其表面的粘附,且在小鼠皮下植入模型中也能减弱FBR。基于此发现,本文进一步利用聚阳离子电解质调控海藻酸钙凝胶电荷,开发出一种具有抗生物粘附性质的海藻酸钠-聚乙烯亚胺（Alg/PEI）聚电解质水凝胶。结果表明,在两种高分子质量比为1:0.045时,该水凝胶净电荷约为0,展现了优异的抗蛋白质、细胞、细菌的粘附的功能。植入到小鼠皮下能够避免FBR,植入3个月后仍没有明显的纤维包封囊形成。然后,本文使用此电荷均衡、具有免疫屏蔽能力的Alg/PEI水凝胶材料包埋400个胰岛用于糖尿病小鼠同种胰岛移植治疗。结果表明,包埋的胰岛在水凝胶中能够维持活性和正常的胰岛素分泌功能。而且,在移植到糖尿病小鼠腹腔后,能够成功实现对糖尿病小鼠血糖的快速（2天）、稳定,长期（>150天）的调控,与传统的海藻酸钙水凝胶相比,也具有显着的优势。最后,本文进一步的制备了 一种具有促血管化功能的免疫屏蔽HEP-Alg/PEI水凝胶微球,并包埋1000个大鼠胰岛后用于糖尿病小鼠异种移植治疗。结果表明,负载2%肝素的HEP-Alg/PEI微球能够在移植到皮下后,促进皮下血管生成,且不引起免疫排斥反应,并实现对糖尿病小鼠血糖稳定调控>180天。综上,本文针对机体对细胞移植物的免疫排斥问题,开发出具有抗生物粘附免疫屏蔽功能的水凝胶,并成功用于胰岛移植对糖尿病小鼠血糖调控,为新型免疫屏蔽材料的开发及其它种类细胞移植治疗带来了新的策略和方向。
严青[2]（2016）在《补肾活血方联合微囊化卵巢颗粒细胞移植对去卵巢大鼠血清FSH、LH及E2的影响》文中研究指明目的:探讨补肾活方联合微囊化细胞移植技术对大鼠生殖内分泌的影响。方法:将60只SD雌性大鼠随机分成6组:空白组（A组）、去卵巢组（B组）、微囊化GC细胞移植组（C组）、低剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组（D组）、中剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组（E组）、高剂量补肾中药+微囊化GC细胞移植组（F组）。治疗28天后处死大鼠并取材,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测治疗前后血清雌二醇（E2）、卵泡刺激素（FSH）及黄体生成素（LH）浓度。结果:B组体重及子宫指数低于其余五组,差异明显（P<0.05）,F组子宫指数高于B组,差异显着（P<0.05）,D、E、F组体重呈递增趋势,但差异不具有统计学意义（P>0.05）。卵巢摘除术后,与A组大鼠比较,B组大鼠血清E2的水平显着降低（P<0.01）,FSH、LH水平则显着升高（P<0.O1）;C组与B组比较,FSH、LH水平降低,E2的水平升高（P<0.05）;F组与A组比较,FSH和E2未见明显差异（P>0.05）;F组与C组比较,FSH、LH及E2水平均存在差异（P<0.05）。结论:与单纯移植微囊化GC细胞相比,补肾活血方联合微囊化细胞移植技术能改善去卵巢大鼠激素分泌状态,其作为临床中医药预防和治疗卵巢早衰的一种手段具有良好的应景前景。
贺颖[3]（2016）在《微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究》文中研究指明传统细胞微囊含大量冗余凝胶,移植体积大、移植部位受限,囊外营养导入和囊内治疗性分泌物导出困难。本文将细胞培养在微载体上,用双水相乳化法将其包裹在海藻酸-壳聚糖-海藻酸（ACA）共形微囊中,并探索其治疗肝损伤和骨质疏松两种疾病的可行性。研究包括3个部分:（1）微载体的ACA共形微囊制备与性能表征。制备Cytodex-3微载体的ACA共形微囊,与蛋白溶液共孵育探究其囊膜对牛血清白蛋白（BSA）、免疫球蛋白IgG的透过性,用球磨法和挤压法考察其在1个月内的机械稳定性,用原子力显微镜扫描微囊的表面形貌,测定其表面粗糙度。结果表明,0.3%、0.6%及1.2%（w/v）的壳聚糖溶液制备的共形微囊均能允许BSA透过,并阻隔IgG透过;3组微囊在1个月内均能耐受球磨法中的剪切力,且在挤压实验中表现出相似的应力-时间曲线,平均最大应力约为1.7-2.2 g,与传统微囊无明显差异;共形微囊的平均偏差粗糙度和均方根粗糙度分别为6.73±1.81 nm、8.23±2.03 nm,与传统细胞微囊相近。（2）Cytodex-3微载体/L02细胞复合物（microC/L02）的共形微囊治疗肝损伤症研究。制备microC/L02的ACA共形微囊,采用水溶性四唑盐法、5（6）-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯/碘化丙啶（CFDA-SE/PI）染色法考察微囊化后细胞的活性;酶联免疫吸附法（ELISA）和尿素酶-谷氨酸脱氢酶动力学法分别检测其体外培养上清液中的人白蛋白和尿素水平;将细胞微囊移植至对乙酰氨基酚所致的肝损伤大鼠模型中,在60天内检测移植组、模型组、正常组大鼠的血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（ALB）的水平;肝组织苏木精/伊红（HE）染色观察肝小叶中细胞形态。结果显示,微囊化后细胞存活良好,活性可在16 h内恢复正常;共形细胞微囊在体外可持续合成人白蛋白和尿素;移植细胞微囊后大鼠血清ALT、TBIL、ALB可在60天内维持正常水平;回收的移植微囊90%以上保持完整,细胞维持存活;HE染色显示移植组大鼠肝脏细胞坏死和水肿均明显少于模型组。（3）Cytodex-3微载体/胰岛素样生长因子1基因重组中国仓鼠卵巢细胞复合物（microC/rCHO-IGF-1）的共形微囊治疗骨质疏松症研究。制备microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊,采用水溶性四唑盐法、CFDA-SE/PI染色法考察微囊化后细胞的活性;ELISA法测定其培养上清液中IGF-1水平;将培养上清液与大鼠原代颅顶骨成骨细胞共同孵育,茜素红S染色法考察其促进成骨细胞分化的能力;细胞微囊移植后,在30天内测定移植组、去势组、假手术组的血清IGF-1水平;在移植30天时测定大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）的水平,采用双能X-射线吸收法测定大鼠股骨的骨密度值;进行大鼠股骨HE染色,评价骨组织形态。结果显示,共形微囊化后细胞存活良好,活性可在24h内恢复正常;体外培养时,共形细胞微囊可持续分泌IGF-1,培养上清液可促进原代大鼠颅顶骨成骨细胞钙化结节形成;移植后,共形细胞微囊可在30天内提高移植组大鼠的血清IGF-1水平;移植第30天,移植组和假手术组的大鼠血清ALP和磷水平显着低于去势组,说明移植的共形细胞微囊改善了去势大鼠的血清ALP和磷水平;移植组大鼠股骨的骨密度值显着高于去势组;90%以上的回收微囊保持完整,细胞维持存活;HE染色显示,移植组的骨小梁厚度和排列紧密度要优于去势组。综上所述,本文采用双水相乳化法制备了微载体/细胞复合物的ACA共形微囊,并分别以L02、重组细胞rCHO-IGF-1作为模型细胞,分别移植进行了治疗大鼠肝损伤和去势大鼠骨质疏松的研究,发现microC/L02的共形微囊具有改善肝损伤大鼠生化指标和肝组织形态的能力,microC/rCHO-IGF-1的共形微囊具有体内持续释放IGF-1,提高股骨的骨密度,改善股骨组织形态,从而减缓骨质疏松发生的能力。本研究为实现细胞微囊的囊径微化和功能强化提供了新思路。
郭欢,邵安良,程祥,高基民,徐丽明[4]（2016）在《生物人工肝用海藻酸钠/壳聚糖微囊的安全性和生物功能评价》文中研究表明目的:评价生物人工肝用海藻酸钠/壳聚糖微囊（AC微囊）的安全性和预期生物功能。方法:制备AC微囊,通过倒置电子显微镜、扫描电子显微镜（SEM）等对微囊的表面结构、密度、机械强度和物质通透性等进行综合表征;通过AC微囊的细胞毒性及溶血性能评价,考察其生物相容性;模拟其预期临床使用方式,用AC微囊包裹肝细胞,评价细胞的存活率和代谢活性:进一步考察微囊的预期生物功能。结果:SEM显示微囊表面具有微孔洞;微囊密度为（1.39±0.155）g·m L-1;180 r·min-1振摇24 h后其完整率在95%以上;微囊通透性试验显示10 min时人血清白蛋白释放率约为50%,90 min左右达到平衡状态。细胞毒性评价（MTT、LDH）的结果显示微囊浸提液与空白组相比细胞的相对活性没有显着性差异。血液相容性评价直接法显示溶血率为（1.36±0.211）%;浸提法的溶血率为（2.69±0.219）%,均低于标准限值（≤5%）。包裹的肝细胞均匀分布在微囊内,并且与未包裹的肝细胞相比其白蛋白和尿素合成量均有所提高。结论:本研究制备的AC微囊机械强度好,可允许小分子物质透过。微囊无明显细胞毒性,溶血率低,生物相容性良好;微囊化培养的细胞能够维持并提高肝细胞生存活性和代谢功能。本研究建立的规范性评价技术和试验方法为制定生物人工肝用AC微囊质量控制标准提供了技术支持,并为合理的科学监管提供依据。
邓伟[5]（2014）在《离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊稳定性能和扩散性能影响的研究》文中指出近年来,利用生物微胶囊技术作为细胞固定化的方法已经得到越来越广泛的关注。以天然多糖海藻酸钠和壳多糖为原料、以氯化钙为离子交联剂制备的微胶囊,由于具有优良的生物相容性、易于加工成型特性和可控物质传输特性等,成为生物微胶囊研究领域中最具特色的工作。但是,由于磷酸、谷氨酸、柠檬酸等分子中的酸根解离常数大于海藻酸,当采用钙离子对海藻酸钠进行交联时,所形成海藻酸钙凝胶中的钙离子易与磷酸、谷氨酸、柠檬酸等发生置换作用,导致海藻酸钙／壳多糖微胶囊过度溶胀,机械强度下降,易于破损,降低了生物微胶囊的应用效果。针对上述问题,本文采用脉冲电场制备工艺,以氯化钙、氯化钡、氯化锌、硫酸锰为四种不同的离子交联剂,与海藻酸钠溶液液滴进行交联反应,制备了四种不同的海藻酸盐／壳多糖微胶囊。通过比较不同离子交联剂对微胶囊机械稳定性能、物质扩散性能的影响,研究离子交联剂与海藻酸钠的作用机制,探寻交联性能更加稳定的离子交联剂,拓展海藻酸盐／壳多糖在生物、医药、食品、环境等领域中应用。主要研究结果如下：1.以Ca2+、Ba2、Zn2、Mn2+四种离子作为交联剂形成的微胶囊,均具有球形度优良、微胶囊表面光滑、粒径分布均匀、分散性好的特性。四种微胶囊在生理盐水中的稳定性强弱程度为：海藻酸钡微胶囊>海藻酸锌微胶囊>海藻酸钙微胶囊>海藻酸锰微胶囊。微胶囊稳定性与离子交联剂浓度呈正相关关系。2.实验考察了壳多糖分子量对不同离子交联的微胶囊稳定性的影响。采用分子量为60kDa、100kDa、200kDa的壳多糖分别与Ca2+、Ba2+、Zn2+、Mn2+四种离子交联的海藻酸盐凝胶珠反应成膜,实验发现,壳多糖分子量对微胶囊在生理盐水中的稳定性影响不大。与Mn2+交联样品相比,采用Ca2+、Ba2+、Zn2+三种离子交联剂形成的海藻酸盐凝胶珠与不同分子量壳多糖成膜反应后,形成的微胶囊在生理盐水中能够稳定存在。3.以牛血清白蛋白、卵清蛋白、木瓜蛋白酶、胰岛素为模型蛋白质,采用分子量为60kDa、脱乙酰度为95%的壳多糖与海藻酸盐凝胶珠成膜反应,考察Ca2+、Ba2+、Zn2、Mn2+四种离子交联形成的微胶囊对蛋白质分子的扩散性能。结果表明,分子量为67KDa的牛血清白蛋白分子可部分扩散进入海藻酸钙与海藻酸锌微胶囊；分子量为44KDa的卵清蛋白分子可扩散进入藻酸钡微胶囊。海藻酸锰微胶囊对蛋白质的通透性能最差,仅能使分子量为21KDa的木瓜蛋白酶扩散进入微胶囊内。4.成膜条件对Ca2+、Ba2+、Zn2+、Mn2+四种离子交联形成的微胶囊的通透性能具有显着影响。在20kDa-100kDa范围,增大壳多糖分子量,微胶囊对蛋白质分子的通透性降低,表明微胶囊膜致密程度增大；延长成膜反应时间,微胶囊膜厚度和致密程度增加,对蛋白质分子的通透性降低。因此,通过调节多聚糖分子量和覆膜时间,可以在一定范围调控微胶囊的通透性能。总之,以Ca2+、Ba2+、Zn2+、Mn2+四种不同离子作为交联剂对微胶囊的稳定性和通透性体现了调节作用,为海藻酸盐/壳多糖微胶囊在细胞固定化、药物控制释放、固定化酶反应器等领域中的应用提供了更多的选择。
王健,徐丽明,汤京龙,王硕,王春仁[6]（2014）在《基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊化肝细胞体内移植治疗肝衰竭大鼠的研究》文中研究说明本研究探讨海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸（A-PLO-A）和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸（B-PLO-A）两种新型微囊作为细胞移植载体的效果。两种微囊包裹小鼠肝细胞后,植入D-氨基半乳糖腹腔注射法制备的急性肝衰竭模型大鼠体内,观察大鼠死亡率,检测微囊内肝细胞的生长、增殖、代谢的情况,以及能否有效改善肝衰大鼠的肝功能。实验分为A-PLO-A空微囊、B-PLO-A空微囊、移植游离的肝细胞、A-PLO-A微囊化肝细胞、B-PLO-A微囊化肝细胞五组。研究结果表明,单纯的空微囊对肝衰大鼠病情无缓解作用,移植后两个空囊移植组3d死亡率均达到了100%。游离肝细胞组、A-PLO-A微囊化肝细胞组和B-PLO-A微囊化肝细胞组大鼠的ALT、AST、ALB水平均有所恢复,4周时微囊移植组的上述指标均优于游离肝细胞组,说明微囊化肝细胞移植有效缓解了肝脏损伤的程度,治疗效果好于游离肝细胞组。微囊化肝细胞组大鼠的存活率明显高于空囊移植组和游离肝细胞移植组;4周后回收的微囊表面光滑,无细胞包裹,无纤维化。研究结果提示基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊物理稳定性和生物相容性良好,适合作为肝细胞体内移植的载体。
刘聪[7]（2014）在《微囊化卵巢细胞的雌二醇和孕酮释放研究》文中研究说明妇女的卵巢功能在进入更年期后逐渐衰退,雌二醇（E2）和孕酮（P4）分泌水平下降,导致更年期综合症。临床上常用激素替代疗法（HRT）来缓解患者的症状,但是,该疗法频繁地用药给患者带来了经济负担,长期的HRT治疗还可能引起严重的副作用。本文研究卵巢细胞的微囊化与异体移植后体内E2和P4的释放,主要包括四部分：（1）以海藻酸钠和壳聚糖为材料,使用静电液滴发生法制备海藻酸-壳聚糖-海藻酸（ACA）微囊。通过改变静电液滴发生装置的针头内径、电极距离、电压和注射流速,摸索控制海藻酸钙凝胶微球直径的方法；以微囊膨胀率（Sw）作为机械强度的评价指标,研究壳聚糖浓度和交联反应时间对ACA微囊机械强度的影响；比较不同壳聚糖浓度制备的ACA囊膜的牛血清白蛋白（BSA）和γ-球蛋白的透过性能。结果显示,使用较小的针头内径,缩短电极距离,提高电压和降低注射流速,可以制备直径较小的海藻酸钙凝胶微球；ACA微囊的Sw在10分钟内随交联反应时间延长而降低,之后不再发生显着变化；：1.2%（w/v）壳聚糖溶液制备的ACA微囊具有较高的机械强度和较弱的BSA渗透性能；0.6%和0.3%（w/v）壳聚糖溶液制备的ACA微囊的机械强度和BSA渗透性能均无显着差异；三种浓度壳聚糖溶液制备的ACA囊膜对Y-球蛋白的阻隔能力无显着差异。（2）以非洲爪蟾作动物模型,研究ACA微囊化卵巢细胞异体移植后的E2和P4分泌能力。用免疫组化法检测原代培养非洲爪蟾卵巢组织细胞的卵泡刺激素受体（FSHR）和黄体生成素受体（LHR）；用孕马血清激素（PMSG）处理原代培养细胞48小时,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养液E2和P4浓度；用1.2%,0.6%和0.3%（w/v）壳聚糖溶液分别制备3组卵巢细胞ACA微囊,在培养28天内用CFDA-SE/PI处理并测算细胞成活率,检测培养60天内0.3%（w/v）壳聚糖组的培养液E2和P4浓度；将0.3%（w/v）壳聚糖溶液制备的卵巢细胞ACA微囊移植入去势雌性非洲爪蟾腹腔,ELISA法检测60天内血清的E2和P4水平。结果显示,原代非洲爪蟾卵巢细胞的FSHR和LHR免疫染色呈阳性,在20IU/mL的PMSG处理时,培养细胞的E2和P4分泌水平最高；制备ACA微囊的最适壳聚糖浓度为0.3%（w/v）；在体外培养条件下,ACA微囊化卵巢细胞保持60天的E2和P4分泌,并在移植后60天内显着提高了去势雌性非洲爪蟾血清E2和P4水平；移植后回收的微囊约90%保持完整和光滑。（3）大鼠卵泡颗粒细胞（GCs）和卵泡膜细胞（TCs）的共微囊化。用免疫组化法分别检测原代培养大鼠GCs和TCs的FSHR、LHR和CYP17A1;将GCs和TCs依不同数量比例混合并ACA微囊化,培养48小时后,检测培养液E2和P4浓度；将GCs和TCs数量比例为1：2的GCs/TCs微囊移植入去势雌性大鼠腹腔,检测60天内血清E2和P4水平。结果显示,GCs/TCs共微囊化显着提高了E2分泌水平,GCs/TCs数量比例为1：2时E2分泌水平最高,在移植后60天内将去势大鼠血清E2和P4维持在正常水平；移植后回收的微囊约90%保持完整和光滑。（4）建立模拟卵泡自然结构的卵巢细胞微囊化模式。微载体培养大鼠GCs （GCsMs）,分别制备包有GCs、GCs+TCs、GCsMs和GCsMs+TCs的ACA微囊并体外培养,WST-1法检测微囊化GCs和GCsMs在培养24小时内的生理活性；培养48小时后,检测培养液E2和P4浓度；将模拟卵泡（GCsMs+TCs微囊）移植入去势雌性大鼠腹腔,检测60天内血清E2和P4水平。结果显示,微囊化GCsMs的生理活性显着高于微囊化GCs；与其它三种微囊相比,模拟卵泡的E2分泌水平最高,移植后60天内将去势大鼠血清E2和P4维持在正常水平；移植后回收的微囊约90%保持完整和光滑。综上所述,本文以海藻酸钠和壳聚糖为囊材,用静电液滴发生法制备了卵巢细胞的ACA微囊,并分别在非洲爪蟾和大鼠上进行了同种异体移植实验,发现非洲爪蟾卵巢细胞微囊、大鼠GCs/TCs微囊,以及模拟卵泡在体外培养条件下都具有雌性激素分泌功能,移植后60天内能够持续释放E2和P4,为妇女更年期综合症的治疗开拓了新思路。
王健,冯晓明,柯林楠,王春仁[8]（2013）在《基于多聚鸟氨酸海藻酸微囊化人正常肝细胞系的体外培养》文中提出目的观察海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸（alginate-PLO-alginate,A-PLO-A）微囊和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸（Ba-alginate-PLO-alginate,B-PLO-A）两种微囊包裹人正常肝细胞系HL-7702细胞后,肝细胞形态和功能的变化,评价PLO对微囊化肝细胞的生物学行为的影响。方法采用优化的微囊制备条件,制备A-PLO-A微囊、B-PLO-A微囊,并包裹HL-7702细胞,观察肝细胞在基于多聚鸟氨酸的微囊中的生长增殖的情况及代谢产物浓度水平。结果A-PLO-A和B-PLO-A两种微囊包裹肝细胞后,体外培养1周,细胞均可在两种微囊内形成不同大小和形态的肝细胞聚集体,微囊光滑无破损现象,台盼兰染色计数的结果显示,包囊前细胞存活率为94%;A-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为92%,B-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为91%。两种微囊化HL-7702细胞各时间点ALB、BUN分泌量差异均无统计学意义。结论微囊囊膜的存在并未对具有贴壁生长和接触抑制性特征的HL-7702细胞的增殖和生理功能产生明显的不利影响。基于多聚鸟氨酸的新型海藻酸微囊在一定程度上可以满足微囊化肝细胞生存的需要,并可维持其正常的生理功能。
李建州[9]（2012）在《基于微囊悬浮流化床式反应器的肝细胞培养模式的研究》文中进行了进一步梳理背景肝衰竭是国际性的治疗难题。人工肝尤其是以培养肝细胞为基础的生物人工肝的不断发展与成熟为肝衰竭的治疗开辟了新的途径。到目前为止,国内外已有数个生物人工肝系统进入到Ⅰ-Ⅲ期临床试验,但将其应用到临床并推广使用,还存在诸多问题有待解决。其中首要问题是如何获得足够数量、高活性并且功能良好的肝细胞。因此,生物人工肝对肝细胞培养的规模和质量提出了更高的要求。目前已有多种培养技术被应用到生物人工肝的研究中,如微囊化培养、微载体培养、反应器培养,流化培养及共培养等技术。为了扬长避短,多种培养方式结合可能更有利于维持或提高肝细胞的功能和活性。本实验室前期已成功构建了基于微囊悬浮型流化床式反应器的新型生物人工肝系统,体外及动物实验的初步结果是我们相信微囊悬浮流化床式反应器能够为肝细胞大规模、高活性培养提供可靠的技术支持。目的本课题根据新型生物人工肝系统对肝细胞培养的要求,采用微囊化培养、共培养及流化培养技术相结合,旨在为新型生物人工肝提供足量高活性、功能良好的肝细胞。方法1.确定制备微囊的稳定条件,全面评价微囊的机械强度、物质通透性以及微囊内细胞的活性,为下一步的研究打下基础。2.构建基于微囊流化床式反应器的培养系统,以单层贴壁培养（2D）为对照,采用微囊静态培养（3D）、微囊共培养（3D-Co）、微囊流化培养（3D-F）、微囊流化共培养（3D-F-Co）等四种培养模式培养肝细胞,评价在不同模式下肝细胞的合成能力和药物代谢能力。3.采用蛋白质芯片、Realtime-PCR、Western Blot等技术初步研究肝细胞功能改变的机制。结果1.确定了两种不同直径（800μm,300μm）微囊的稳定制备条件,制备的微囊具有良好的机械强度和物质通透性,微囊化的肝细胞在培养过程中保持很高的活性。2.不同培养模式下肝细胞功能评价结果显示：微囊化培养相比单层贴壁培养优势明显；微囊共培养能够显着提高肝细胞的白蛋白合成能力和CYP1A2的活性；微囊流化培养能够显着提高肝细胞的合成能力和CYP1A2的活性；流化共培养在提高肝细胞的CYP3A4、CYP1A2的活性方面效果最显着。3. HepLi3细胞功能与肝肿瘤细胞系相近,微囊流化培养系统能够显着提高其合成功能和CYP3A4、CYP1A2的活性。4.蛋白芯片分析显示hPMSC细胞能够分泌多种细胞因子参与调节肝细胞的增殖、凋亡和功能的发挥；Realtime-PCR结果显示微囊化培养和共培养可显着提高肝细胞功能相关基因的表达水平；Western Blot结果显示肝细胞CYP2E1、CYP1A2的蛋白表达量增高,微囊流化共培养能够显着下调肝细胞内PKC,ERK及PKA的磷酸化水平及钙调蛋白的表达水平。结论1.基于微囊悬浮型流化床式反应器的培养系统能够维持并提高肝细胞活性和功能；微囊流化共培养为最佳的肝细胞培养模式。2.肝细胞功能的提高可能与间充质干细胞的旁分泌效应以及多条功能相关的磷酸化通路受到抑制有关。
王加祥,韩宝三,吴旭波,余松林,彭承宏[10]（2011）在《壳聚糖相对分子质量对微囊及包裹肝细胞活性的影响》文中提出目的观察壳聚糖相对分子质量对微囊机械强度和通透性及包裹肝细胞活性的影响。方法通过微囊搅拌实验比较中、低分子量壳聚糖形成的微囊的机械强度,比较2种微囊对异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）通透性,及细胞染色实验判断2种微囊包裹小鼠原代肝细胞活性的区别。结果微囊搅拌100 min后中分子量壳聚糖微囊破损率100%,低分子量壳聚糖微囊破损率5%,两种微囊机械强度差异有统计学意义（P<0.05）,微囊溶液中加入FITC-BSA15 min后,低分子量壳聚糖微囊内荧光强度为4 AU,中分子量壳聚糖微囊内荧光强度为1.5 AU,两种微囊对FITC-BSA的通透性差异有统计学意义（P<0.05）,低分子量壳聚糖形成的微囊包裹肝细胞培养1周后细胞染色实验显示微囊中活肝细胞数为100%,中分子量壳聚糖形成的微囊包裹的活肝细胞数约为40%,两者差异有统计学意义（P<0.05）。结论低分子量壳聚糖相对于中分子量壳聚糖更适合于作微囊的材料。
二、肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究（论文提纲范文）
（1）新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 细胞移植(Cell transplantation) |
| 1.1.1 细胞移植概述 |
| 1.1.2 细胞治疗的应用 |
| 1.1.3 细胞移植存在的问题 |
| 1.2 胰岛移植 |
| 1.2.1 糖尿病 |
| 1.2.2 传统治疗方法及存在问题 |
| 1.2.3 胰岛包埋技术 |
| 1.3 海藻酸钠在胰岛移植领域的研究进展 |
| 1.4 免疫躲避材料 |
| 1.4.1 生物粘附及异物反应 |
| 1.4.2 两性离子材料 |
| 1.5 本文主要研究内容 |
| 第2章 二价离子对海藻酸盐水凝胶抗生物粘附性质影响的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验试剂与材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 海藻酸盐水凝胶的制备 |
| 2.3.2 水凝胶表征 |
| 2.3.3 蛋白吸附测试 |
| 2.3.4 细菌粘附测试 |
| 2.3.5 动物实验 |
| 2.3.6 组织学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 含水量 |
| 2.4.2 机械性能测试 |
| 2.4.3 抗蛋白吸附能力测试 |
| 2.4.4 抗细菌粘附性质测试 |
| 2.4.5 组织学分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 电荷平衡的抗生物粘附聚电解质水凝胶的制备与表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验试剂与材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 海藻酸钠-聚乙烯亚胺(Alg/PEI)水凝胶的制备 |
| 3.3.2 Zeta电位测试 |
| 3.3.3 Alg/PEI水凝胶的基本表征 |
| 3.3.4 蛋白粘附测试 |
| 3.3.5 细胞毒性测试 |
| 3.3.6 细胞粘附测试 |
| 3.3.7 细菌粘附测试 |
| 3.3.8 血液相容性测试 |
| 3.3.9 小鼠皮下埋植 |
| 3.3.10 组织学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 Alg/PEI聚电解质水凝胶制备原理 |
| 3.4.2 Alg/PEI聚电解质水凝胶的基本表征 |
| 3.4.3 蛋白吸附测试 |
| 3.4.4 细胞粘附测试 |
| 3.4.5 血液相容性 |
| 3.4.6 细菌粘附测试 |
| 3.4.7 体内抗免疫反应评价 |
| 3.4.8 免疫组化分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 负载胰岛的Alg/PEI水凝胶颗粒用于1型糖尿病小鼠移植治疗的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验试剂与材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 胰岛分离及纯化 |
| 4.3.2 胰岛纯化后鉴定 |
| 4.3.3 水凝胶体内移植 |
| 4.3.4 胰岛包埋 |
| 4.3.5 胰岛体外活性检测 |
| 4.3.6 葡萄糖刺激胰岛素分泌功能测试(GSIS) |
| 4.3.7 胰岛移植及血糖含量监测 |
| 4.3.8 腹腔葡萄糖耐受测试(IPGTT) |
| 4.3.9 组织学及免疫学分析 |
| 4.3.10 数据分析方法 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 Alg/PEI水凝胶的体内相容性 |
| 4.4.2 胰岛在凝胶中的活性及功能检测 |
| 4.4.3 胰岛移植后的治疗效果 |
| 4.4.4 胰岛移植长期功能测试 |
| 4.4.5 组织学及免疫学分析 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 负载胰岛的促血管化抗生物粘附水凝胶微球用于治疗1型糖尿病小鼠的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验试剂与材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 负载肝素Alg/PEI水凝胶微球的制备 |
| 5.3.2 蛋白吸附测试 |
| 5.3.3 细菌粘附测试 |
| 5.3.4 血液相容性 |
| 5.3.5 包埋细胞存活率 |
| 5.3.6 肝素释放 |
| 5.3.7 大鼠胰岛提取 |
| 5.3.8 胰岛包埋 |
| 5.3.9 肝素Alg/PEI电中性水凝胶微球皮下移植 |
| 5.3.10 胰岛皮下移植及血糖含量监测 |
| 5.3.11 组织学分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 Alg/PEI水凝胶微球形貌及蛋白吸附测试 |
| 5.4.2 细胞相容性 |
| 5.4.3 细菌粘附测试 |
| 5.4.4 血液相容性 |
| 5.4.5 负载肝素的水凝胶微球形貌 |
| 5.4.6 体外肝素释放测试 |
| 5.4.7 快速血管化及免疫排斥反应 |
| 5.4.8 血糖调控 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 本文主要创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 致谢 |
（2）补肾活血方联合微囊化卵巢颗粒细胞移植对去卵巢大鼠血清FSH、LH及E2的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写索引 |
| 引言 |
| 第一部分 微囊化卵巢颗粒细胞的制备以及体外功能 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 大鼠卵巢颗粒细胞的获取 |
| 2.2 免疫组化法卵巢颗粒细胞鉴定 |
| 2.3 微囊化卵巢颗粒细胞的制备 |
| 2.4 微囊化卵巢颗粒细胞形态观察 |
| 2.5 微囊化颗粒细胞培养液中雌二醇（E_2）、孕酮(P)水平测定 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 卵巢颗粒细胞形态观察及鉴定 |
| 3.2 微囊化卵巢颗粒细胞形态观察 |
| 3.3 不同时间微囊化卵巢颗粒细胞培养液中E_2、P水平的测定 |
| 第二部分 补肾活血方联合微囊化颗粒细胞移植对去卵巢大鼠内分泌的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品 |
| 1.3 主要实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 微囊化颗粒细胞及空微囊的制备 |
| 2.2 药物的浓缩: |
| 2.3 动物模型制备及分组 |
| 2.4 一般情况观察 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3.实验结果与分析 |
| 3.1 大鼠一般情况的观察 |
| 3.2 大鼠体重及子宫指数的比较 |
| 3.3 补肾活血方联合微囊化卵巢颗粒细胞移植后大鼠血清中FSH、LH及E_2水平 |
| 第三部分 讨论 |
| 1.西医学对卵巢早衰的认识 |
| 2.中医学对卵巢早衰的认识 |
| 3.补肾活血方组方依据 |
| 4.卵巢颗粒细胞与激素分泌及卵泡发育的关系 |
| 5.微囊化技术的选择依据 |
| 6.实验结果及展望 |
| 第四部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A：综述 微囊化移植技术在医学领域的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 细胞的共形微囊 |
| 1.2 细胞的微载体培养 |
| 1.3 聚乙二醇(PEG)/葡聚糖双水相乳化系统 |
| 1.4 海藻酸-壳聚糖交联反应 |
| 1.5 本文的内容和意义 |
| 2 微载体的ACA共形微囊制备与性能表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 仪器与试剂 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 主要溶液配制 |
| 2.3.2 玻璃器皿的硅化与Cytodex-3微载体预处理 |
| 2.3.3 Cytodex-3的ACA共形微囊制备 |
| 2.3.4 Cytodex-3的共形微囊与BSA溶液共孵育 |
| 2.3.5 Cytodex-3的共形微囊与IgG溶液共孵育 |
| 2.3.6 挤压法测定共形微囊机械稳定性 |
| 2.3.7 球磨法测定共形微囊机械稳定性 |
| 2.3.8 原子力显微镜测定表面粗糙度 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 Cytodex-3共形微囊的BSA透过性 |
| 2.4.2 Cytodex-3共形微囊对IgG的阻隔能力 |
| 2.4.3 Cytodex-3共形微囊的机械稳定性 |
| 2.4.4 Cytodex-3共形微囊的囊膜表面形貌 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 microC/L02的ACA共形微囊治疗肝损伤研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞和动物 |
| 3.2.2 仪器 |
| 3.2.3 试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 主要溶液配制 |
| 3.3.2 L02细胞免疫荧光染色 |
| 3.3.3 L02细胞在Cytodex-3上的培养 |
| 3.3.4 microC/L02的ACA共形微囊制备及WST-1检测 |
| 3.3.5 microC/L02共形微囊的CFDA-SE/PI染色 |
| 3.3.6 microC/L02共形微囊的体外肝功能检测 |
| 3.3.7 肝损伤大鼠模型制备 |
| 3.3.8 microC/L02共形微囊移植 |
| 3.3.9 大鼠血清、肝组织样本采集与处理 |
| 3.3.10 移植共形微囊回收与CFDA-SE/PI染色 |
| 3.3.11 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 L02细胞鉴定 |
| 3.4.2 L02细胞在Cytodex-3上的生长 |
| 3.4.3 microC/L02共形微囊化后细胞的存活及活性变化 |
| 3.4.4 microC/L02共形微囊的白蛋白分泌和尿素合成水平 |
| 3.4.5 大鼠血清ALT、ALB和TBIL随共形微囊移植时间的变化 |
| 3.4.6 肝组织HE染色图 |
| 3.4.7 回收的移植微囊 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊治疗骨质疏松症研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞、菌株和动物 |
| 4.2.2 仪器 |
| 4.2.3 试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 主要溶液配制 |
| 4.3.2 真核表达载体pEGFP-N1-IGF-1的构建、鉴定与转化反应 |
| 4.3.3 重组质粒的扩增、抽提 |
| 4.3.4 重组pEGFP-N1-IGF-1质粒转染CHO细胞 |
| 4.3.5 细胞单克隆筛选 |
| 4.3.6 ELISA检测单克隆细胞株的IGF-1分泌 |
| 4.3.7 重组细胞rCHO-IGF-1的免疫荧光染色 |
| 4.3.8 重组细胞rCHO-IGF-1在Cytodex-3上的培养 |
| 4.3.9 microC/rCHO-IGF-1的ACA共形微囊制备及CFDA-SE/PI染色 |
| 4.3.10 microC/rCHO-IGF-1共形微囊的CCK-8检测 |
| 4.3.11 microC/rCHO-IGF-1共形微囊的IGF-1分泌 |
| 4.3.12 原代大鼠颅顶骨成骨细胞分离 |
| 4.3.13 原代大鼠颅顶骨成骨细胞鉴定 |
| 4.3.14 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清对成骨细胞的促分化作用 |
| 4.3.15 骨质疏松大鼠模型制备 |
| 4.3.16 共形微囊移植、采样与处理 |
| 4.3.17 统计学分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 重组pEGFP-N1-IGF-1质粒酶切鉴定 |
| 4.4.2 IGF-1测序图谱 |
| 4.4.3 重组细胞rCHO-IGF-1单克隆株的IGF-1表达 |
| 4.4.4 重组细胞rCHO-IGF-1的免疫荧光鉴定 |
| 4.4.5 重组细胞rCHO-IGF-1在Cytodex-3上的生长 |
| 4.4.6 microC/rCHO-IGF-1共形微囊化后细胞的存活及活性变化 |
| 4.4.7 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清中的IGF-1水平 |
| 4.4.8 原代大鼠颅顶骨成骨细胞的形态观察与ALP染色鉴定 |
| 4.4.9 microC/rCHO-IGF-1共形微囊培养上清促进成骨细胞的分化 |
| 4.4.10 大鼠血清ALP、钙、磷、IGF-1水平和股骨的骨密度值 |
| 4.4.11 回收的microC/rCHO-IGF-1共形微囊 |
| 4.4.12 大鼠股骨HE染色图 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 攻读硕士学位期间完成的论文 |
（4）生物人工肝用海藻酸钠/壳聚糖微囊的安全性和生物功能评价（论文提纲范文）
| 1实验材料 |
| 1.1仪器 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 溶液的配制 |
| 2.1.1 2.0% 海藻酸钠溶液 |
| 2.1.2 0.5% 壳聚糖溶液 |
| 2.1.3 微囊破囊液 |
| 2.1.4 模拟体液(SBF) |
| 2.2 AC微囊的制备 |
| 2.3 AC微囊的表征 |
| 2.3.1表面形貌观察 |
| 2.3.2 密度检测 |
| 2.3.3 机械强度检测 |
| 2.3.4 物质通透性检测 |
| 2.4 AC微囊的体外生物相容性评价 |
| 2.4.1体外细胞毒性评价 |
| 2.4.1.1微囊浸提液的制备 |
| 2.4.1.2MTT试验和LDH试验 |
| 2.4.2 溶血试验 |
| 2.5 微囊化肝细胞的活性和功能性评价 |
| 2.5.1 微囊化Hep G2 细胞制备和培养 |
| 2.5.2 微囊化肝细胞相对增殖率和活性评价 |
| 2.5.3微囊化肝细胞代谢活性评价 |
| 2.5.4微囊化肝细胞白蛋白合成能力评价 |
| 2.6统计学处理 |
| 3结果 |
| 3.1 AC微囊的表征 |
| 3.1.1形貌表征 |
| 3.1.2 微囊密度、机械强度和通透性 |
| 3.2 微囊体外细胞毒性评价 |
| 3.3 微囊体外溶血性能评价 |
| 3.4微囊化细胞的细胞活性及代谢活性评价 |
| 3.4.1微囊化Hep G2细胞活性评价 |
| 3.4.2 微囊化Hep G2 细胞尿素合成能力检测 |
| 3.4.3 微囊化Hep G2 细胞白蛋白合成量检测 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
（5）离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊稳定性能和扩散性能影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 固定化技术 |
| 1.1.1 细胞固定化培养的意义 |
| 1.1.2 固定化细胞的方法 |
| 1.2 生物微胶囊技术 |
| 1.2.1 生物微胶囊技术概况 |
| 1.2.2 生物微胶囊的技术优势 |
| 1.2.3 生物微胶囊的制备材料与制备方法 |
| 1.2.4 生物微胶囊的主要特性 |
| 1.2.5 生物微胶囊在应用中存在的问题 |
| 1.3 海藻酸盐/壳多糖生物微胶囊 |
| 1.3.1 海藻酸钠 |
| 1.3.2 壳多糖 |
| 1.3.3 海藻酸盐与壳多糖成膜机理 |
| 1.4 不同离子交联剂的选择 |
| 1.5 研究思路和工作目标 |
| 第二章 海藻酸盐/壳多糖微胶囊的制备和稳定性研究 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验装置和仪器 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊形态的影响 |
| 2.2.2 离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊微观形貌的影响 |
| 2.2.3 离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊平均粒径的影响 |
| 2.2.4 不同离子交联剂对微胶囊稳定性的影响 |
| 2.2.5 不同离子交联剂对微胶囊压缩应力的影响 |
| 2.2.6 离子交联剂浓度对生物微胶囊稳定性的影响 |
| 2.2.7 壳多糖分子量对不同离子交联微胶囊稳定性的影响 |
| 2.2.8 成膜反应时间对微胶囊机械稳定性的影响 |
| 2.2.9 离子交联微胶囊的尺寸与稳定性的相关性 |
| 2.3 小结 |
| 第三章 海藻酸盐/壳多糖微胶囊膜扩散性能的研究 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验装置和仪器 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 紫外-可见分光光度法测定蛋白质含量 |
| 3.2.2 不同离子交联剂对微胶囊通透性的影响 |
| 3.2.3 微胶囊膜对微胶囊通透性能的影响 |
| 3.2.4 壳多糖分子量对AC微胶囊通透性能的影响 |
| 3.2.5 成膜反应时间对AC微胶囊通透性能的影响 |
| 3.3 小结 |
| 第四章 结论 |
| 4.1 小结 |
| 4.2 文章不足之处和后续建议 |
| 4.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊化肝细胞体内移植治疗肝衰竭大鼠的研究（论文提纲范文）
| 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 大鼠肝衰模型的建立 |
| 1.2 小鼠原代肝细胞分离 |
| 1.3 微囊化肝细胞的制备 |
| 1.4 实验分组 |
| 1.5 动物死亡率的检测以及肝功能检测 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 相差显微镜观察 |
| 2.2 死亡率检测 |
| 2.3 肝功能检测 |
| 2.3.1 ALT变化 |
| 2.3.2 AST变化 |
| 2.3.3 ALB变化 |
| 2.4 显微镜观察移植后回收的微囊 |
| 3 讨论 |
（7）微囊化卵巢细胞的雌二醇和孕酮释放研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 雌激素替代疗法 |
| 1.2 卵巢器官和组织的移植 |
| 1.3 组织细胞的微囊化和移植 |
| 1.3.1 细胞微囊的性能要求 |
| 1.3.2 微囊化细胞研究现状 |
| 1.3.3 海藻酸-壳聚糖-海藻酸(ACA)微囊 |
| 1.3.4 静电液滴发生法 |
| 1.4 本文的内容和意义 |
| 2 ACA微囊制备条件的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 仪器与试剂 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 主要溶液配制 |
| 2.3.2 静电液滴发生法制备ACA微囊 |
| 2.3.3 海藻酸钙凝胶微球直径测定 |
| 2.3.4 ACA微囊的膨胀率(Sw)测定 |
| 2.3.5 ACA微囊在BSA溶液中孵育 |
| 2.3.6 ACA微囊在γ-球蛋白溶液中孵育 |
| 2.3.7 统计学分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 静电液滴发生法影响海藻酸钙凝胶微球直径的因素 |
| 2.4.2 交联反应时间和壳聚糖溶液浓度对ACA微囊膨胀率(Sw)的影响 |
| 2.4.3 ACA微囊的BSA透过性 |
| 2.4.4 ACA微囊对γ-球蛋白的阻隔能力 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 ACA微囊化非洲爪蟾卵巢细胞和移植 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 仪器 |
| 3.2.3 试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 主要溶液配制 |
| 3.3.2 雌性非洲爪蟾的去势 |
| 3.3.3 卵巢细胞的原代培养 |
| 3.3.4 PMSG处理原代培养非洲爪蟾卵巢细胞 |
| 3.3.5 原代非洲爪蟾卵巢细胞免疫组化染色 |
| 3.3.6 非洲爪蟾卵巢细胞的ACA微囊化和体外培养 |
| 3.3.7 体外培养ACA微囊化细胞的成活率检测 |
| 3.3.8 微囊化非洲爪蟾卵巢细胞WST-1检测 |
| 3.3.9 ACA微囊化非洲爪蟾卵巢细胞移植 |
| 3.3.10 非洲爪蟾血清样本的收集 |
| 3.3.11 ELISA法检测样本E2和P4浓度 |
| 3.3.12 移植微囊的回收和CFDA-SE处理 |
| 3.3.13 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 原代非洲爪蟾卵巢细胞形态观察 |
| 3.4.2 原代非洲爪蟾卵巢细胞鉴定 |
| 3.4.3 PMSG对非洲爪蟾卵巢细胞E2和P4分泌的影响 |
| 3.4.4 制备ACA微囊的壳聚糖浓度对非洲爪蟾卵巢细胞成活率的影响 |
| 3.4.5 非洲爪蟾卵巢细胞ACA微囊化后的生理活性变化 |
| 3.4.6 ACA微囊化非洲爪蟾卵巢细胞的体外E2和P4分泌能力 |
| 3.4.7 ACA微囊化非洲爪蟾卵巢细胞移植后的E2分泌 |
| 3.4.8 ACA微囊化非洲爪蟾卵巢细胞移植后的P4分泌 |
| 3.4.9 移植后回收的细胞微囊 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 共微囊化大鼠GCs/TCs的E2和P4体内释放 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 仪器 |
| 4.2.3 试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 主要溶液配制 |
| 4.3.2 大鼠GCs的原代培养 |
| 4.3.3 大鼠TCs的原代培养 |
| 4.3.4 大鼠GCs和TCs生长曲线制作 |
| 4.3.5 大鼠GCs和TCs免疫组化染色 |
| 4.3.6 大鼠GCs和TCs的共微囊化 |
| 4.3.7 GCs/TCs微囊的CFDA-SE处理 |
| 4.3.8 雌性大鼠去势 |
| 4.3.9 大鼠实验分组和细胞微囊移植 |
| 4.3.10 大鼠采血和血清样本制备 |
| 4.3.11 血清E2和P4水平检测 |
| 4.3.12 移植微囊的回收和CFDA-SE处理 |
| 4.3.13 统计学分析 |
| 4.4 结果和讨论 |
| 4.4.1 原代大鼠GCs和TCs的形态观察 |
| 4.4.2 原代大鼠GCs和TCs的鉴定 |
| 4.4.3 GCs/TCs微囊的形态 |
| 4.4.4 微囊内GCs和TCs数量比例对E2分泌的影响 |
| 4.4.5 微囊内GCs和TCs数量比例对P4分泌的影响 |
| 4.4.6 GCs/TCs微囊的异体移植对去势雌性大鼠E2分泌水平的影响 |
| 4.4.7 GCs/TCs微囊的异体移植对去势雌性大鼠P4分泌水平的影响 |
| 4.4.8 移植后回收的细胞微囊 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 模拟卵泡自然结构的大鼠GCs和TCs微囊化模式 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 仪器 |
| 5.2.3 试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 大鼠GCs和TCs的原代培养 |
| 5.3.2 玻璃器皿的硅化 |
| 5.3.3 大鼠GCs的微载体培养 |
| 5.3.4 微载体培养GCs的生长曲线制作 |
| 5.3.5 GCs、GCsMs、GCs+TCs和GCsMs+TCs微囊制备和体外培养 |
| 5.3.6 微囊化细胞的WST-1检测 |
| 5.3.7 大鼠实验分组和移植 |
| 5.3.8 ELISA法检测血清E2和P4水平 |
| 5.3.9 移植微囊的回收和CFDA-SE处理 |
| 5.3.10 统计学分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 大鼠GCs的微载体生长 |
| 5.4.2 微载体培养对微囊化GCs生理活性的影响 |
| 5.4.3 微囊化细胞在体外培养条件下的E2和P4分泌水平 |
| 5.4.4 异体移植模拟卵泡对去势雌性大鼠E2和P4分泌水平的影响 |
| 5.4.5 移植后回收的模拟卵泡 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（8）基于多聚鸟氨酸海藻酸微囊化人正常肝细胞系的体外培养（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 一、HL-7702细胞的培养 |
| 二、微囊制备及HL-7702细胞微囊化 |
| 三、微囊计数方法 |
| 四、微囊化人肝细胞系体外培养及功能分析 |
| 五、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、细胞形态 |
| 二、微囊形态 |
| 三、HL-7702细胞在微囊内生长状况 |
| 四、白蛋白和尿素氮释放量 |
| 讨论 |
（9）基于微囊悬浮流化床式反应器的肝细胞培养模式的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 目录 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
四、肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究（论文参考文献）
- [1]新型免疫屏蔽Alg/PEI水凝胶材料的制备及其用于胰岛移植领域的研究[D]. 张嘉敏. 天津大学, 2019(06)
- [2]补肾活血方联合微囊化卵巢颗粒细胞移植对去卵巢大鼠血清FSH、LH及E2的影响[D]. 严青. 湖南中医药大学, 2016(03)
- [3]微载体/细胞复合物的共形微囊治疗肝损伤和骨质疏松的研究[D]. 贺颖. 浙江大学, 2016(05)
- [4]生物人工肝用海藻酸钠/壳聚糖微囊的安全性和生物功能评价[J]. 郭欢,邵安良,程祥,高基民,徐丽明. 药物分析杂志, 2016(01)
- [5]离子交联剂对海藻酸盐/壳多糖微胶囊稳定性能和扩散性能影响的研究[D]. 邓伟. 西北大学, 2014(07)
- [6]基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊化肝细胞体内移植治疗肝衰竭大鼠的研究[J]. 王健,徐丽明,汤京龙,王硕,王春仁. 生物医学工程学杂志, 2014(03)
- [7]微囊化卵巢细胞的雌二醇和孕酮释放研究[D]. 刘聪. 浙江大学, 2014(01)
- [8]基于多聚鸟氨酸海藻酸微囊化人正常肝细胞系的体外培养[J]. 王健,冯晓明,柯林楠,王春仁. 北京医学, 2013(11)
- [9]基于微囊悬浮流化床式反应器的肝细胞培养模式的研究[D]. 李建州. 浙江大学, 2012(10)
- [10]壳聚糖相对分子质量对微囊及包裹肝细胞活性的影响[J]. 王加祥,韩宝三,吴旭波,余松林,彭承宏. 中华实验外科杂志, 2011(05)