一、胚胎卵巢移植的现状及前景（论文文献综述）
邢彦彦[1]（2020）在《猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究》文中研究表明由于恶性肿瘤发病率逐年增加,发病年龄逐渐降低以及推迟生育年龄等原因,对生育力保存的需求急剧增加。相较于卵子和胚胎冻存,卵巢组织冻存后移植能够恢复卵巢内分泌功能和生育能力,并允许多个周期受孕,是目前最有希望的女性生育力保存方法,卵巢组织冷冻保存和移植获得的婴儿诞生,是人类生殖医学的里程碑,之后,各地相继有卵巢组织移植后婴儿出生的报道,并在近两年呈指数增加,迄今为止,全世界共有约130余例婴儿由卵巢组织冷冻移植后诞生。许多学者认为卵巢组织移植可作为一种行之有效的技术应用。卵巢组织冷冻有程序化冷冻和玻璃化冷冻两种方法。程序化冷冻已在临床上用于卵子和胚胎冷冻30余年。玻璃化冷冻在卵巢组织冷冻中是否优于程序化冷冻目前尚无定论,然而其用于卵子和胚胎冷冻的优越性已经被证明。由于玻璃化冷冻具有不需要昂贵仪器、冷冻过程中无冰晶形成等优点,有光明的应用前景。在过去的十年中,许多实验研究了不同的动物模型如狗、山羊、大鼠、小鼠等卵巢组织冷冻移植情况,然而,研究结果具有较大差异,基于这些实验结果,很难估计玻璃化冷冻过程造成的卵巢组织损伤程度。除物种差异外,移植物的大小、冷冻保护剂的选择等均会对移植效果产生影响。现有的关于冷冻及移植过程中卵泡丢失率的报道结果相差悬殊,缺乏详细分析。文献报道,相较于卵巢组织冷冻复苏,卵巢组织移植过程中可能丢失的卵泡更多,其原因主要为移植物在血供重新建立前缺血缺氧,然而在卵巢移植过程中卵泡丢失的具体程度仍缺乏详尽分析。卵巢组织移植较其他生育力保存方法有不可替代的优越性,因此,有良好的临床应用前景。然而,卵巢移植过程中的大量卵泡丢失,严重制约卵巢移植技术的发展。因此,如何促进新生血管形成,及早恢复移植物血供,是移植成功的关键。猪膀胱脱细胞基质膜（Urinary Bladder Matrix,UBM）是细胞外基质膜（Extracelluar Matrix,ECM）的一种,具有完整的活体组织细胞外基质的三维超微结构,以及生长因子、糖胺聚糖、粘连蛋白等生物活性成分,其中确认与组织粘附、促结合、抗凋亡、促增殖的成分有42种,目前已在临床上用于皮肤、脂肪、肌肉等组织的修复。干细胞在缺血及损伤性疾病的治疗中应用广泛。研究表明,干细胞能够促进血管形成和组织修复。脂肪间充质干细胞来源方便、增殖力强,不具有成瘤性,使用安全。近年来,有数篇关于干细胞用于卵巢移植的研究。这些研究证实,脂肪间充质干细胞在改善卵巢移植效果方面有良好的应用前景。然而,移植后的干细胞存活率较低,这阻碍了干细胞治疗技术的推广和应用。有文献研究表明,应用合适的生物支架可以提高干细胞存活率。而UBM能促进干细胞增殖和分化,我们尝试将干细胞接种在UBM上后用于大鼠卵巢自体移植,验证应用UBM是否会增加脂肪间充质干细胞的作用,进一步改善卵巢移植效果。第一部分大鼠卵巢玻璃化冷冻及自体移植对卵巢组织的影响目的:观察大鼠卵巢玻璃化冷冻复苏及自体移植过程对卵巢组织的影响,探讨冷冻和移植操作对卵巢产生影响的作用机制。方法:SD雌性大鼠随机分为正常对照组、冷冻组、移植组,移植组大鼠将两侧卵巢组织取出,一分为二分别移植于同侧肾背膜下,冷冻组将大鼠卵巢组织玻璃化冷冻复苏,将各组卵巢组织石蜡切片并HE染色,观察卵泡形态并卵泡计数;采用Tunel荧光染色技术,观察细胞凋亡情况;免疫组化方法观察各组VEGF阳性面积比。结果:正常对照组、冷冻组及移植组分别计数卵泡1231、1077、575个,移植组减少明显,移植组形态异常卵泡数较正常对照组增加明显（P<0.05）。凋亡检测中,冷冻组和移植组凋亡率较正常对照组显着增加（P<0.05）。VEGF在3组卵巢组织中均有表达,但冷冻组及移植组表达较正常对照组减少,差异有统计学意义。结论:卵巢组织冷冻或自体移植过程中均伴有卵泡丢失、VEGF表达下降。提高移植卵巢组织的VEGF表达,可能对促进移植物血管形成、提高卵巢移植效率有积极作用。第二部分UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用目的:验证UBM能促进移植卵巢新生血管形成,减少移植组织卵泡数量的丢失,改善移植效果,探讨其促进血管生成的作用机制。方法:1.8周龄SD大鼠行卵巢自体移植,根据术中处理方法不同分为5组:正常对照组、自体移植组、自体移植+UBM（UBM组）、自体移植+VEGF组（VEGF组）、去势组,其中,正常对照组用于卵泡计数比较,去势组仅用于血清激素水平比较。在自体移植后28天,行卵巢组织HE染色,观察细胞形态、卵泡计数;术后28天,ELISA测定血清FSH、AMH水平;分别于移植后7天和28天CD31染色,观察血管生成情况;自体移植后7天,Tunel及Masson染色观察凋亡和纤维化情况。2.将第3代人脐静脉内皮细胞分为对照组和UBM组,分别接种在六孔板上,UBM组预先将UBM铺在六孔板底,观察细胞增殖情况,并于接种后第1、3、5天行CCK8实验,检测细胞增殖情况;同时进行Western-blot和RT-PCR检测,探讨UBM体外促进血管生成的作用机制。3.8周龄SD大鼠行卵巢自体移植术,依据术中处理方法不同分为自体移植组和自体移植+UBM组（UBM组）,卵巢自体移植后7天,微血管CT成像比较两组移植卵巢血管生成情况,取出卵巢组织,行Western-blot和RT-PCR检测,探讨UBM在体内促进血管生成的作用机制。结果:1.自体移植组、UBM组、VEGF组卵泡均较正常对照组减少,（P<0.05）;UBM组原始卵泡及生长卵泡数量较单纯移植组均增加;UBM组FSH显着低于自体移植组及VEGF组（P<0.05）,AMH激素水平测定结果同FSH基本一致;同单纯移植组及VEGF组相比,UBM组CD31阳性表达率显着增加（P<0.05）;Tunel染色显示,与单纯移植组相比,UBM组、VEGF组凋亡细胞均减少（P<0.05）,且UBM组凋亡率最低,差异有统计学意义（P<0.05）;Masson染色结果:与单纯移植组相比,UBM组、VEGF组相对纤维化明显减少,且UBM组纤维化面积最小,差异有统计学意义（P<0.05）。2.CCK8实验:人脐静脉内皮细胞在UBM上增殖与对照组相比无统计学差异（P>0.05）;Western-blot和RT-PCR结果提示,UBM组人脐静脉内皮细胞KDR、Notch1、Ang2表达增加;术后7天,Western-blot和RT-PCR结果提示,UBM组KDR、Notch1、Ang2表达增加。体内和体外实验均表明,UBM上调KDR、Notch1、Ang2表达,促进血管形成。结论:UBM通过上调KDR、Notch1、Ang2表达,激活血管生成信号通路,通过促进血管形成改善卵巢移植效果,值得进一步研究和推广。第三部分脂肪间充质干细胞联合UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用目的:验证脂肪间充质干细胞能促进移植卵巢新生血管形成,改善移植效果;证明应用脂肪间充质干细胞联合UBM能进一步改善卵巢移植效果。方法:1.分离并制备大鼠脂肪间充质干细胞,经成脂、成骨实验鉴定其有多向分化的能力,通过流式细胞技术对其表面抗原进行测定。2.SD大鼠行卵巢自体移植,根据术中处理方法不同分为5组:正常对照组、自体移植组、自体移植+ADMSCs组（ADMSCs组）、自体移植+ADMSCs组+UBM组（联合组）、去势组,其中,正常对照组用于卵泡计数比较,去势组仅用于血清激素水平比较。在自体移植后28天,行卵巢组织HE染色,观察细胞形态、卵泡计数;术后28天,ELISA测定血清FSH、AMH水平;分别于移植后7天和28天CD31染色,观察血管生成情况;自体移植后7天,Masson染色观察纤维化情况。结果:1.成功制备大鼠脂肪间充质干细胞。2.同单纯移植组相比,ADMSCs组原始卵泡及生长卵泡数量均增加显着（P<0.05）,联合组原始卵泡数及生长卵泡个数较ADMSCs组均增加,差异有统计学意义（P<0.05）;同自体移植组相比,ADMSCs组及联合组FSH水平显着均降低（P<0.05）,AMH激素水平测定结果同FSH基本一致;CD31结果提示:ADMSCs组、联合组新生血管数量均较单纯移植组增加;Masson染色结果:联合组纤维化面积较单纯移植组减少明显,差异有统计学意义。结论:应用脂肪间充质干细胞可改善卵巢移植效果,UBM可促进脂肪间充质干细胞在移植部位的附着、定植,ADMSCs联合UBM可显着增加移植卵巢组织血供。
范东青[2]（2017）在《辅助生殖中卵巢反应性及妊娠结局预测指标的探讨》文中研究说明目的探讨辅助生殖中卵巢反应性及妊娠结局的预测指标方法回顾性分析本生殖中心2009年4月至2015年12月份1305例应用长方案IVF/ICSI-ET患者的临床资料,（1）根据患者获卵数将卵巢反应性分为低反应组（获卵数<5）,正常反应组（获卵数5-20）,高反应组（获卵数>20）,比较分析患者一般情况及妊娠结局。指标中有统计学差异的,进一步做ROC曲线来预测卵巢反应性。（2）探究AFC、FSH、FSH/LH、LH、age与获卵数的关系（3）age按<35岁,≥35岁分组;AFC按<4,4-9,≥10分组;E2按<292.8pmol/L,≥292.8pmol/L分组;FSH按<10U/L,≥10U/L分组;FSH/LH按<3,≥3分组。分析各项指标与IVF/ICSI受精、胚胎情况及妊娠结局的关系。结果（1）不同卵巢反应组患者的age、FSH、FSH/LH、AFC、周期取消率、体重指数,差异有统计学意义（P<0.05）,低反应组周期取消率高达49.2%,高反应组OHSS发生率可达11.2%。（2）不同卵巢反应组之间患者的累计妊娠率、活产率、流产率、双胎率差异均无统计学意义。（3）进一步分析预测卵巢反应性的指标:age、FSH、FSH/LH比值和BMI可预测卵巢低反应,其中age的预测价值最高;AFC和LH可预测卵巢高反应,其中AFC的预测价值最高;（4）周期取消率在AFC<4、FSH≥10U/L、FSH/LH≥3组时较高,差异有统计学意义。（5）正常受精率在age<35、E2<292.8 pmol/L、FSH≥10U/L或FSH/LH≥3组较高,差异有统计学意义;优质胚胎率在E2≥292.8 pmol/L或FSH≥10U/L组较高,AFC<4组显着低于AFC4-9和AFC≥10组,差异有统计学意义;胚胎种植率在age<35或AFC≥10组较高,差异有统计学意义。（6）当E2≥292.8 pmol/L且age≥35时,累计妊娠率仅为16.67%,与age<35组相比,差异有统计学意义。（7）各项指标及其分组流产率、双胎率、宫外孕率差异不显着。结论（1）在辅助生殖技术中,患者AFC、age、FSH、LH、BMI、FSH/LH六项指标相互影响,存在正相关或负相关。AFC能较好预测卵巢高反应性,age能较好预测卵巢低反应,但卵巢反应性不能预测妊娠结局（2）单一指标AFC、FSH、FSH/LH均能预测周期取消率;AFC不影响IVF/ICSI正常受精率;age不影响优胚率,却影响胚胎种植率;单一指标都不能预测累计妊娠率,但age与AFC或E2联合时,能预测累计妊娠率;本研究中各项指标均无法预测IVF/ICSI流产率。
龙爱专,赵淑云[3]（2016）在《免疫抑制剂在卵巢移植排斥反应中的应用研究进展》文中提出卵巢移植是治疗严重卵巢功能缺陷的有效方法,但是,因移植后强烈排斥反应,使移植后卵巢失活或存活率低,导致卵巢移植的发展缓慢,不能广泛运用。迄今为止,卵巢移植面临的最大问题仍是移植排斥反应,为克服排斥反应,各种免疫抑制制剂相继被研发,但一直没有得到有效解决。现对卵巢移植及免疫抑制剂的研究发展现状进行阐述。
徐晖[4]（2015）在《卵巢早衰的治疗现状及进展》文中提出卵巢早衰（POF）对妇女内分泌功能与生育能力具有严重影响,近年来其发病率呈逐年上升的趋势。如何有效改善卵巢功能、恢复生育力是治疗的关键,目前西医治疗方法主要包括激素替代治疗、赠卵移植、低温保卵技术、卵巢移植、免疫疗法、心理治疗等,在该病方面取得一定成绩,但尚未达到满意效果。近年来,干细胞与基因治疗在动物试验中取得一定进展,本文就卵巢早衰的治疗现状与研究进展进行综述。
凌卓[5]（2015）在《我国同种异体卵巢移植的临床应用中的医学伦理研究》文中研究指明研究背景器官移植是世界上目前治疗终末期疾病最有效的手段,它在挽救患者生命、延长寿命、改善生活质量和提高生命价值等方面做出了巨大贡献。因此,器官移植技术甚至被誉为20世纪的“医学之巅”。据有关数据显示,1998年我国开展肾移植的医院就有68家,仅一年共进行肾移植3596例；到2000年有108家医院开展肾移植,移植数量达4830例；截止2007年6月底,已有164家由国家卫生部批准开展器官移植,每年完成肝脏移植达3000余例。全球完成器官移植数已超过一万余例。而最为罕见的卵巢移植,由中山医科大学首先开展,自1980年至今也已成功完成了9例。器官移植从曾经的遥不可及,到如今的广泛应用,其正面效果白不待言,从科学的角度看,这是科技发展的必然结果；但是从伦理学的角度看,器官移植这一技术在恩泽人类,给诸多终末期患者带来莫大福祉的同时,却也引发了技术进步与伦理道德的碰撞,使得器官移植的受体、供体及医护人员等都陷入了不同的伦理困境。当前,制约器官移植技术发展的不再是技术的空白,“器官来源短缺”是该项技术发展的“瓶颈”外,随之带来的伦理学问题及争论,也直接影响到了该项技术的广泛应用和发展。关于器官移植的伦理问题,有人指出,一系列的伦理难题将会使该项技术发展陷入无奈之中,也会使人类伦理背负起了沉重的十字架,其中主要涉及器官移植供受双方的利益和相应权利的保障及道德评判问题等,引起了公众广泛的争议和讨论。尽管学术界已经做了诸多探讨研究,指出移植技术在临床应用中存在的伦理问题和社会问题的同时,也给出了相应的解决方法和对策。如武贝博《异体移植的伦理学思考》中提出,活体器官捐献遭受的伦理质疑,知情同意及自愿捐献是否能够完全实现的伦理问题,器官捐献的商业化问题等；王海艳等在《活体器官移植的伦理审视》中提出了树立新的义利观、死亡观等观念、强化正确的的舆论导向及建立健全相关的法律法规等解决办法。但是,随着器官移植的应用、普及,尤其是新型技术的应用,新的伦理问题又将层出不穷。卵巢移植是器官移植的新领域。卵巢是作为女性特有生殖器官,是产生生殖细胞的重要场所,同时也是重要的内分泌器官,与维持女性正常生理功能有着密切关系。卵巢先天发育不足或缺失、卵巢早衰、病理性卵巢切除、恶性肿瘤放疗后卵巢功能丧失等导致女性内分泌失调甚至不孕,给众多病患带来了严重的身心损害。随着器官移植技术的日趋成熟,卵巢移植技术也随之发展并取得突破性进展,对此类疾病的治疗将更加有效,但同时也会引发的活体、胎儿或者死尸供体的利用的争议以及受体所生子女的归属等一系列伦理学问题也随之突显。因此,文章从现实社会背景出发,在总结器官移植伦理、异体器官移植伦理等的基础上,提出了同种异体卵巢移植中将面临的伦理问题并进行分析,表明个人的观点及态度,提出相应的解决建议和对策。研究目的器官移植技术作为一种科学、理性的治疗手段,在临床应用中难以会给人类带来一定的伦理困惑。而卵巢做为女性的生殖器官,在移植技术的应用中更是敏感,更易于引发争论。如果由器官（卵巢）移植所引发的伦理问题不能被公众充分深刻认识找到有效解决方法的话,必将会阻碍移植工作顺利开展和医学伦理体系不断的完善。因此,本文的研究目的是试图从科学的角度对器官（卵巢）移植加以阐述,以解众惑。从伦理学的角度做出实质性努力,利用科学的知识来加强医患沟通；弘扬正确的传统理念以增强人们捐献的意愿或者治疗的信心；通过伦理学的分析来广泛宣传扩大器官捐献的社会基础等,逐步获得社会的认同和支持,尽快确立异体器官移植的基本伦理原则,不断提升公民的伦理道德思想、尽快完善伦理委员的建设制度、加强针对器官移植医学伦理专题的研究、完善器官移植从业人员的职业道德机制,设置合理的供体补偿机制,建立健全器官移植相关的法律法规,保证我国异体卵巢移植工作的健康有序开展。研究意义器官移植以人为受体、以治疗为目的的器官移植,是为了治疗疾病而将健康的器官移植给急需的患者,即是用健康的器官去置换被损害、丧失功能而无法挽救的器官的医治手段。如何全面评价器官移植技术,理性的看待和解决其引发的一系列伦理问题以及如何从人类一般的道德理性中寻找伦理依据,证明器官移植技术的“可行性”是器官移植伦理研究的重大课题。曾有人提出“科学无禁区”,主张科学技术的发展不应受伦理道德的约束。而实践证明,技术与道德具有相关性,如生命科技的发展带来的克隆人,显然这一科技带来的结果引起了人们的恐慌,人们希望通过伦理道德为生命科技（克隆技术）设立一个伦理禁区。因此,科技是有禁区、有约束的。科学技术与伦理道德是一个矛盾共同体。科学技术的飞速发展给人类的生存和发展带来巨大福音的同时,也引发科学技术与伦理道德的冲突,同时伦理道德对科学技术的发展有着不容忽视的作用。所以二者相互影响、相互制约,共同推进人类社会的发展；伦理道德对科技发展的约束旨在引导科技的健康发展,调节负面影响；科技的发展则不停的冲破伦理道德的约束,开辟新领域,同时促进伦理道德的发展。器官移植作为一项新型科学技术的应用,从开始的茫然无序到今天的规范执行,正是技术的不断突破和伦理道德规范相互促进的结果。但是有人认为,如今器官移植最大的难题已不是技术的制约,而是伦理道德问题。因此,本研究试图从器官移植的一个方面,即卵巢移植技术的临床应用及研究,探讨该项技术的发展所带来的一系列伦理问题,从供体、受体及医务工作者等多方面分析所面临的伦理问题,并站在如何解决器官移植伦理问题的角度,提出解决问题的对策,推进我国器官移植事业的顺利发展,创造良好的社会舆论环境、伦理环境,促进卵巢等新型移植技术的不断开发及应用意义重大。研究方法1.文献引证法：异体卵巢移植临床操作的医学机理、技术原理、动物实验结果、临床应用记录、随访记录等相关资料、医学伦理规范的理论原则和依据及其相关的法律法规都需要参考大量的相关材料。2.问卷调查法：通过对公众对器官捐献的认知问卷调查,了解公众对器官移植、器官捐献及补偿机制等的看法及态度,为伦理分析提供有力的佐证。3.抽象法与描述法结合：理论的研究离不开科学抽象分析和归纳分析,因此要结合现实情况和历史传统文化、社会状况等相关因素进行具体的归纳描述。4.正反比较研究法：通过归纳总结找到伦理问题的正反两方面的意见并在此基础上做出个人判断,提出相关的对策。5.逻辑与历史相统一的方法：将历史描述与逻辑推理相结合从而对异体卵巢移植中存在的伦理冲突进行综合分析。研究结果及结论1954年美国成功实施第一例肾脏移植手术以来,器官移植手术已经在全球广泛开展,中国累计开展的肾脏、心肺、肝脏等器官移植手术已经超过10万余例、我国肾移植技术已达到国际先进水平,胚胎器官移植处于国际领先地位。卵巢移植正是在这种大环境下培育出的新技术。本研究在简单介绍器官移植的研究背景后,阐述了器官移植的涵义及其伦理,以及同种异体卵巢涵义和移植方式,提出了当前卵巢移植发展的理论、现实依据,认为当前同种异体卵巢移植面临的问题有：第一：卵巢捐献来源为活体供体时,面临着活体器官来源短缺的问题。活体卵巢移植的成功率大多发生在同卵双生姐妹间,其次是亲姐妹、母女,再次为配型成功的器官捐献志愿者。目前,大多数人不愿意做出捐献,一方面是受到封建礼教思想影响,秉承“身体发肤,受之父母,不敢毁伤,孝之始也”的伦理训条,加上卵巢本属于特殊的生殖器官,捐献后许多人可能会怀疑“移植后所生的孩子是不是自己的”；另一方面,如果捐献卵巢给他人需要承受的来自父母、兄弟姐妹、亲朋好友、社会舆论等各方面的压力,因此大多无果而终。活体卵巢移植技术具有可行性,但也具较有高的风险性。如活体器官移植供体将面临手术创伤、手术并发症甚至死亡、器官储备功能损失、手术期间经济损失等问题,以及以上问题带来的心理压力和社会舆论压力等。因此,在考虑进行活体器官移植时,应遵循以下原则：（1）知情自愿原则；（2）生命价值原则；（3）利益及风险并存原则。第二：胎儿的卵巢组织作为移植供体时,可能会诱发堕胎、胎儿器官商业化以及非法买卖胎儿器官等一系列社会及伦理问题。例如有些父母可能会因为经济原因而怀孕、堕胎、继而出卖胎儿或胎儿器官,不法犯罪分子会以孕妇为作案目标实施窃取胎儿的犯罪行为。因此,加快推进胎儿器官移植的立法十分必要。第三：公民生前或其死后家属做出的捐献决定是推进尸体器官移植的关键所在。在我国由于传统文化观念的束缚,相关法律不健全以及器官捐献系统不完善等原因,明确表示愿意死后捐献器官或遗体的人并不多,同意卵巢捐献的实际案例更是鲜有听闻。另外,在尸体器官的摘取上,由于目前我国存在心死亡和脑死亡两套不同的诊断标准,一定程度上不利于尸体器官的及时采集,大大降低了器官移植的成活率。因此,促进公众思想观念的转变,科学地确定死亡时间,完善器官捐献系统和相关法律法规是提高尸体器官利用率的关键。第四：卵巢移植手术与其他器官移植手术一样,都需要通过ABO血型相配、HLA配型、交叉配合及淋巴毒试验等对器官供体与受体进行免疫相容性的检测,而患者年龄、患者医疗配合程度、社会价值以及经济支付能力等社会因素也应该被考虑进来。另外,移植受体不仅要面对手术本身带的巨大痛苦,其心理上也承受了巨大压力。一方面患者有可能因为自己无法生育而痛苦不堪,甚至自责,迫切的想要通过手术完成自己做母亲的愿望,却又担心其丈夫不予理解,害怕父母、兄弟姐妹、亲朋好友、社会舆论等而最终放弃手术；另一方面,如果手术成功,未来将能够顺利怀上孩子,那么可能会疑惑这个还是是不是自己亲生的,这些问题严重影响着手术是否能顺利开展。因此,对患者的心理及疑惑进行疏导,破除情感障碍等有助于手术的顺利开展。第五：对于不存在生育要求的卵巢移植患者,一般不会涉及血缘关系和辈分的改变问题,因此在伦理上不会引起严重争议。但是以生育为目的的异体卵巢移植可能产生严重的伦理、道德问题。因此,受体生育的子女的问题应该被考虑进来。第六：卵巢移植的应用在我国刚刚步入临床研究阶段,是一项创新技术,它不仅与医生的聪明才智、知识积累、临床技术和经验息息相关,与患者、医生所处的社会文化环境密不可分。成功实施一台卵巢移植手术无疑能提高医生的技术水平、扩大医生及医院的知名度和影响力,同时也会给医务人员提出了严格的道德要求。尤其是在新技术的应用尚无严格的准入制度及审查标准的情况,更需要医务人员遵从职业道德规范,一切以病人为中心,以“不伤害”原则为底线,深思熟虑,避免急功近利。面对种种困境,笔者在总结前人的研究成果基础上,结合本研究提出的实际问题,提出了加强灵活宣传教育,破除思想情感上的障碍；建立健全器官移植法律制度,填补相关领域的法律空白；确立新死亡判定标准,提高供体器官质量；设置合理的补偿机制,提高公众的捐献积极性；提高医务从业人员的职业道德素质,保障患者的合法权益；加快完善伦理委员会建设,加强器官移植伦理专题研究等建议,旨在为器官移植事业的发展提供理论依据,为卵巢移植技术的应用创造良好的社会舆论环境,不断取得新的突破。创新与不足首先,器官移植由来已久,国外对于器官移植的伦理问题已有诸多研究及探讨,但我国对器官移植伦理方面的研究仍相对较少且不够精细。卵巢移植技术是器官移植的新领域,由于该技术在临床尚未广泛应用,人们的关注较少,本研究在总结国内外卵巢移植技术的研究进展的成果基础上提出了卵巢移植可能引发的伦理问题。其次,尽管国内对器官移植的研究大多是从立法角度、捐献的激励机制、技术层面等方面的研究,但是涉及较细化的卵巢移植技术及伦理研究相对较少。本文通过对目前国内外异体器官移植的伦理问题进行梳理,找出异体卵巢器官移植最突出的伦理问题,分析问题产生的原因并表明个人的态度,试图寻求解决的途径,为卵巢移植技术的进一步发展提供伦理依据,力求在技术与伦理冲突中找到平衡点。但是,由于当前国内外关于器官移植的伦理研究的文献居多,而对于异体移植及卵巢异体移植的文献较少,相关的理论仍待进一步佐证。同时,由于缺乏临床随访案例,文章缺乏强有力的说明证据,所提出的伦理问题是否全面、解决对策是否完全合理等有待进一步探讨。
曹胜[6]（2014）在《补肾对冻存后自体移植小鼠卵巢功能影响的研究》文中研究表明卵巢冷冻移植技术对女性生殖细胞的保存和利用具有应用价值。近年来发展迅速。在该领域,中医药研究尚在起步阶段。本实验目的：研究补肾对冻存后自体异位移植卵巢卵泡存活和卵泡发育的影响并探讨其作用机制。方法：本研究以肾主生殖理论为指导,将小鼠冷冻复苏卵巢自体异位移植,异位移植小鼠随机分为六组,分别为五子衍宗丸组（五子组）、左归丸组（左归组）、右归丸组（右归组）、PMSG组、模型组和正常组,并采取术前、术后和全程用药3种不同给药方式,以同期模型组为对照,移植后7、21和35天回收移植卵巢组织,采用组织学、免疫组化、体外成熟、体外受精和实时定量PCR等方法对冻存后自体异位移植卵巢卵泡生长、卵母细胞发育和相关基因表达进行研究。结果如下：一补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢体内发育的影响本次实验摘除卵巢再移植小鼠246只,摘除冻存移植卵巢492个。有效回收卵巢338个,冻存移植卵巢总有效回收率为68.70%。移植卵巢7d、21d和35d,各组卵巢回收率与模型组比较表明：五子衍宗丸显着提高冻存卵巢自体异位移植后的存活率（p<0.01）；移植前使用五子衍宗丸提高冻存后自体异位移植卵巢的存活率（p<0.05）；PMSG提高冻存卵巢自体异位移植后的存活率（p<0.05）。卵巢自体异位移植第7天,各组冻存后自体异位移植卵巢都未观察到窦状卵泡和排卵前卵泡,移植第21天和第35天,自体异位移植卵巢观察到原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡等各级卵泡生长,五子衍宗丸组最显着。自体异位移植卵巢组织经VEGF免疫组化方法检测,移植第七天,自体异位移植卵巢组织皮质及其外周组织VEGF表达有不同程度的增加。移植21天和35天,在各级卵泡细胞和颗粒细胞之外的间质细胞VEGF有增强表达。TUNEL细胞凋亡原位检测（FITC标记）冻存后自体异位移植卵巢组织,7d组中,细胞凋亡阳性表达面积广泛,21d和35d组中,随着移植卵巢卵泡逐渐生长,凋亡阳性细胞的表达区间逐步缩小,间质是凋亡阳性细胞的主要表达部位。卵巢移植后第21天,五子衍宗丸组血清雌二醇（3.26±0.17ng/ml）水平最高,且与模型组、左归组和右归组比较有统计学差异（p<0.05）,表明五子衍宗丸较左、右归丸能够更好的促进自体异位移植卵巢组织卵泡发育。二补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢卵母细胞体外发育的影响自体异位移植卵巢第21天和第35天,各组冻存后自体异位移植卵巢共回收卵母细胞64枚和69枚,仅五子衍宗丸组回收有GV期和MⅡ期卵母细胞,细胞形态与正常组回收卵母细胞一致。各组卵母细胞数量与模型组比较,表明五子衍宗丸、右归丸和PMSG提高冻存卵巢自体异位移植后卵母细胞数量（p<0.05）；随给药次数增加,五子衍宗丸和右归丸促进移植卵巢功能进一步恢复,数量增加（p<0.05）。本次实验,五子衍宗丸组未成熟卵母细胞经体外培养后发育到MⅡ期,成熟卵母细胞经体外受精,发育到2-细胞和桑葚胚阶段。表明五子衍宗丸不仅提高冻存卵巢自体异位移植后卵母细胞数量,还可有效恢复冻存后自体异位移植卵巢卵母细胞的发育能力。三补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢卵泡生长发育相关基因表达的影响冻存移植卵巢和正常卵巢均可检测到目的基因GDF-9、AMH、FSHR、LHR、VEGF、 Ang2、Bax、Bcl-2、fas和fasl mRNA的表达。通过检测各组目的基因,与模型组比较,通过细胞凋亡Bcl-2/Bax通路和血管新生调节通路,五子衍宗丸改善早期冻存后自体异位移植卵巢卵泡细胞的生存状态和发育能力；通过卵泡生长和分化相关通路,五子衍宗丸、右归丸改善晚期自体异位移植卵巢卵泡细胞的生存状态和发育能力;五子衍宗丸和右归丸保护冻存后自体异位移植卵巢原始卵泡储备力；移植前使用五子衍宗丸有效保护早期小鼠自体异位移植卵巢卵泡生殖发育能力。结论：补肾可填精衍宗,肾精足,则肾气充,气血盛,从而保护冻存后自体异位移植卵巢的生殖功能和内分泌功能。
王兴玲[7]（2013）在《家兔和人卵巢组织冷冻复苏及异种移植的实验研究》文中认为近年来,随着社会的发展,生活水平的提高,人们对自身健康及生殖质量日益关注,对生殖能力的保存提出了越来越高的要求,由此极大地促进了学者们对人类卵巢组织冻存技术的研究和临床应用的探索。2008年,WHO调查发现140万例新增肿瘤患者中近70万是女性,<40岁育龄妇女占8%。放、化疗及手术等治疗有效地治疗了患者的疾病并延长了生命,但大剂量放疗、化疗和卵巢手术可导致年轻女性生殖力的丧失。保存女性生殖能力的方法有：取卵并行体外受精后胚胎冷冻、取卵后卵子冷冻、卵巢组织冷冻。因胚胎冷冻及卵子冷冻需要进行促排卵、取卵等较长周期的治疗,影响和延误恶性肿瘤患者的治疗,且只适用于已婚女性,因此应用受到限制。而卵巢组织冷冻保存不需要对卵巢进行药物刺激促排卵,在手术及化疗前直接切除卵巢组织进行冷冻,不影响患者自身原有恶性肿瘤及疾病的化疗及放疗,对女性生育储备的生殖内分泌功能保存有着重要的意义,为此类患者提供了一种补偿方法。20世纪50年代初,Parkes将大鼠卵巢组织切片慢速冷冻保存于-79℃的甘油盐水混合液中,快速解冻复苏后自体移植,之后观察到移植的卵巢组织出现卵泡生长发育,大鼠恢复了内分泌功能。20世纪90年代,卵巢组织冷冻随着冷冻科学技术的发展和改进以及各种抗冻剂的出现,发展非常迅速,不断有小鼠、绵羊和非人类哺乳类动物卵巢组织冷冻实验研究报道,并有冻融卵巢组织移植成功的案例。绵羊与人类卵巢无论是卵巢组织结构及排卵周期均较为相似,因此绵羊卵巢组织冻融并移植后获得成功的妊娠,为人类卵巢组织冻融技术的发展和应用提供了有意义的模型,并奠定了坚实的实验基础。Donnez J在腹腔镜下对一例何杰金氏患者自体原位移植了冻存6年的卵巢组织,随访发现该患者术后半年就恢复了月‘经周期,并有周期性排卵及黄体生成,术后11个月HCG测定和B超证实患者成功妊娠,并顺利分娩。我国开展卵巢组织冷冻技术还处于摸索阶段,陈子江等研究冷冻人卵巢皮质,观察卵巢皮质内各级卵泡形态及卵巢组织体外培养获得了一定的经验。卵巢组织冷冻保存的优势在于其可冷冻卵巢皮质原位未成熟的始基卵泡,因其具有相对静止、体积小、缺乏透明带及皮质颗粒的特性,容易耐受冷冻及复苏造成的损伤,成功的卵巢组织冷冻和复苏,可保存卵巢组织中大量结构完整、具有生存活力及发育能力的原始卵泡,从而开辟了一条卵巢早衰和恶性肿瘤患者的治疗新途径。有效的卵巢冷冻保存及复苏技术是建立卵子库的基本前提,复苏后卵巢组织的成功移植对女性生育力的保存及恢复具有重要意义。为了拯救面临威胁和濒危动物,保存基因多样性,世界各地基因组储存中心正在收集和冷冻来自这些动物的卵巢组织。卵巢冷冻保存及复苏还存在许多有待解决的问题,虽然在鼠类和大型灵长类动物中卵巢组织冷冻保存技术已有后代出生并获得了阶段性的研究成果,但用于人类卵巢组织的冷冻保存及复苏移植技术还存在许多问题,难以充分有效地的运用于临床,其关键难点包括确立最适宜的卵巢组织冷冻保存方案,因为冷冻过程中各个环节均有许多因素会影响卵巢组织的冻融效果,如组织切块的大小,所选择的冷冻方法、冷冻保护剂的种类及浓度、冷冻和复苏过程、操作人员的技术水平、硬件设备条件等,目前尚无定论的减少冷冻损伤的最佳冷冻方案。卵巢组织复苏移植后的成活情况是决定生殖能力能否恢复的关键。影响移植成功的因素有很多,首先是移植后局部灌注损伤：Aubard等学者在羊卵巢组织自体移植模型实验中发现,只有5%的原始卵泡在移植后能够存活,分析原因可能是移植后的卵巢未行血管吻合,自身无血供,而移植局部的血管再生至少需要48小时,在此期间由于血供不足可能对卵巢造成了不可逆的损伤,如何保护移植组织不受缺血缺氧损害是卵巢组织冻融后移植亟待解决的一个问题；其次是最适宜移植部位的确立：迄今为止,国内外研究尚无最适宜卵巢组织移植的最佳部位定论,但能确认的是最适宜的移植部位必须具备能为组织的植入和成活发育提供良好条件、并且方便卵泡的检测和穿刺取卵的部位；最后是卵巢组织同种自体移植后的安全性问题的解决：卵巢组织的冷冻和移植的不断进步,为癌症患者恢复其自身卵巢功能和保存生育能力带来了新的希望。但卵巢组织移植仍然存在着一定的风险。冻融卵巢组织同种移植多数是为了对恶性肿瘤患者的生育能力进行保存,因此有学者质疑,移植恶性肿瘤患者的冷冻卵巢组织中是否存在微小癌灶,从而导致移植后肿瘤细胞发生播散或者再复发。MuellerA等实验研究发现大鼠卵巢经同种异位移植后,发生性索间质瘤的几率达100%。关于移植组织安全性的监测,Dror等研究表明采用RT-PCR（?）邕够敏感的检测到癌症患者卵巢组织内残存的微小病灶,从而提高移植的安全性。因此,在决定移植前,采用先进的检测手段如聚合酶链反应(PCR、FISH、基因芯片等技术,检测移植卵巢组织内残存的微小病灶,以降低卵巢移植所带来的肿瘤细胞转移风险,有利于提高卵巢组织移植的有效性和安全性。关于卵巢组织冷冻、复苏、移植研究所采用的标本,人类卵巢组织冻存研究标本大多来自于因卵巢疾患而需要进行妇科手术的病人,由于她们年龄一般都比较大,卵巢中某些区域整群卵泡已经耗尽,同时合并有子宫内膜异位囊肿等卵巢病变,所以很难获得足够数量的卵泡标本,而且人类卵巢组织的冷冻、复苏、移植涉及诸多伦理问题,所以实验标本的获得非常珍贵而有限,实验数据不够充沛。有研究显示种属间卵巢原始卵泡没有明显差异,本实验前期选择家兔卵巢组织来进行研究,是由于其低廉的价格,广阔的来源,较短的繁殖周期,且人类与家兔卵巢始基卵泡中卵母细胞的大小及进入减数分裂的卵母细胞微细结构基本相似。在前期家兔卵巢冻存研究基础上,我们又对来自卵巢手术剥离的人类卵巢组织标本进行了冷冻、复苏和移植的研究。本研究分四个部分,即家兔卵巢组织冷冻复苏的实验研究、家兔卵巢组织异种异位移植的实验研究、人卵巢组织冷冻复苏的实验研究、人卵巢组织异种异位移植的实验研究四个阶段。通过采用不同冷冻程序（慢速程序化法、快速玻璃化法）、不同冷冻载体（麦管法、微滴法、坚硬表面法）、不同冷冻试剂及配伍方法（二甲基亚砜DMSO、乙二醇EG、丙二醇PROH）等分别对家兔及人卵巢组织进行了冷冻、复苏、体外培养、异体移植的系统研究,以期寻找适宜的卵巢组织冷冻复苏方案及移植部位,为临床开展人类卵巢组织冷冻及移植提供实验数据参考,为建立卵巢组织冷冻库奠定基础。第一部分：家兔卵巢组织冷冻复苏的实验研究研究目的采用不同冷冻保护剂（PROH、DMSO及EG）单独或联合应用于程序化或玻璃化法对家兔卵巢组织进行冷冻并复苏,观察复苏后卵巢组织中各级卵泡形态、卵巢组织Ⅱ型跨膜酪氨酸激酶受体（c-kit）和增殖细胞核抗原（ki67）以及主要组织相容性复合体类抗原（MHC-2）表达的变化,从而判断各种冷冻方案对家兔卵巢组织形态学、细胞增殖活性、卵巢组织抗原性的影响,以探讨相对适用于卵巢组织的冷冻复苏方案。研究方法及结果1四种不同冷冻复苏方法对家兔卵巢组织形态学的影响1.1研究对象及分组：选择清洁级性成熟雌性日本大耳白兔12只,随机分为四组,麻醉后开腹取其卵巢组织并切成lxlxlmm3块,按随机方法分组将家兔卵巢组织块分别进行慢速程序化（分A2及B2两个亚组,冷冻剂分别采用PROH、 DMSO）及快速玻璃化（分C2及D2两个亚组,冷冻剂分别采用DMSO+PROH、 DMSO+EG）冷冻并复苏；冷冻前每组各取少量新鲜卵巢组织块做为对照组（A1、B1、C1、D1）。1.2研究内容：通过卵巢组织学检测,观察新鲜对照组及各冷冻复苏组卵巢组织内各级卵泡比例、形态结构及正常形态率等变化。1.3研究结果1.3.1新鲜及冷冻复苏家兔卵巢组织形态学特点：来自各组家兔的新鲜卵巢组织切片中,显微镜下共计数各级卵泡1236枚,其中始基卵泡所占比率（88.2%）及其正常形态率（91.4%）均最高,初级卵泡及次级卵泡比率分别为8.4%和3.4%；计数来自三组冷冻复苏卵巢组织切片中的卵泡共954枚,其中始其卵泡857枚,占89.8%,初级卵泡占7.3%,次级卵泡仅占2.8%。1.3.2采用不同冷冻程序和冷冻剂处理后家兔卵巢组织各级卵泡形态学的变化：冷冻组中,以PROH慢速程序化冷冻组始基卵泡的形态正常率最高,达80.1%,明显高于DMSO程序化组（70.5%）及两组玻璃化组（DMSO+PROH及DMSO+EG组分别为67.6%,69.7%）,差异有统计学意义；将各冷冻组所观察到的各级卵泡合并计算,其中始基卵泡形态正常率（72.7%）,明显高于初级卵泡的形态正常率（55.7%）,因次级卵泡总数极少,所以未行统计学分析。1.3.3冷冻复苏前后家兔卵巢组织结构变化：镜下观察冷冻前家兔卵巢组织内可见排裂规则的卵巢间质细胞紧密包裹的各级卵泡。所有冷冻复苏组卵巢组织均可见以初级卵泡和次级卵泡为主的受损情况,这些卵泡与周围间质细胞分离,但始基卵泡受影响较小；各冷冻组卵巢间质细胞排裂紊乱、连接疏松,形成裂隙。2程序化及玻璃化冷冻对家兔卵巢抗原性及卵泡细胞增殖活性的影响2.1研究对象及分组：选择9只4-5月龄清洁级性成熟雌性日本大耳白兔,随机分为3组（新鲜对照组、PROH慢速程序化冷冻组、DMSO+EG’决速玻璃化冷冻组）,获取卵巢组织方法如前所述,切块待用。2.2研究内容2.2.1家兔卵巢组织相容性抗原（MHC-2）的表达：应用SP免疫组化法检测上述新鲜组及经两种冷冻方法处理后家兔卵巢组织MHC-2抗原表达的变化,通过观察MHC-2抗原的平均吸光度值,判断冷冻对卵巢组织抗原性的影响。2.2.2冷冻复苏对各级卵泡细胞增殖活性的影响：分离新鲜对照组及冷冻复苏组卵巢组织内大、小卵泡（直径分别为100-150μm及300-500μm）,对其进行体外培养后,采用3H标记的胸腺嘧啶核苷掺入试验（3H-TdR）,移入液闪瓶中上机测其脉冲信号数（cpm）,判断冷冻复苏对各级卵泡细胞增殖活性的影响。2.3研究结果2.3.1PROH程序化与DMSO+EG玻璃化冷冻法对家兔卵巢MHC-2表达的影响：免疫组化结果显示MHC-2主要表达于卵巢间质细胞和次级卵泡卵母细胞的胞膜,而始基卵泡及初级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞均无表达；玻璃化冷冻组较程序化组和新鲜对照组卵巢组织MHC-2抗原的平均吸光度值明显降低；程序化组与新鲜对照组平均吸光度值无明显差异。2.3.2PROH程序化与DMSO+EG玻璃化冷冻法对家兔卵泡细胞增殖活性的影响：通过3H-TdR掺入试验检测各组卵泡细胞增殖活性发现,程序化及玻璃化冷冻组与新鲜卵巢组小卵泡的cpm值差异无统计学意义,而冷冻组大卵泡的cpm值明显降低；两冷冻组间差异无统计学意义。3.不同玻璃化冷冻载体对家兔卵巢组织c-kit和W67表达的影响3.1研究对象及分组：选择12只4-5月龄清洁级性成熟雌性日本大耳白兔,按是否冷冻及玻璃化冷冻所选择的载体不同随机分为4组：新鲜对照组（A组）、麦管法玻璃化冷冻组（B组）、微滴法玻璃化冷冻组（C组）、坚硬表面法（SSV）玻璃化冷冻组（D组）。玻璃化冷冻试剂采用EG+DMSO;获取家兔卵巢组织方法如前所述,将卵巢组织切块待用。3.2研究内容：通过对冻融卵巢组织的组织学观察,并采用免疫组化法检测冻融卵巢组织Ⅱ型跨膜酪氨酸激酶受体（c-kit）和增殖细胞核抗原（Ki67）表达,判断冷冻对卵巢组织增殖活性及发育潜能的影响。3.3研究结果：采用免疫组化检测家兔新鲜及冻融卵巢组织,结果显示各级卵泡内卵母细胞的胞膜和/或胞浆中ki67蛋白均出现呈棕黄或棕褐色的阳性表达；与新鲜组相比较,经麦管法、微滴法、SSV法冷冻处理后Ki67和c-kit阳性率表达率差异无统计学意义。结论1. PROH慢速程序化冷冻方法用于家兔卵巢组织冷冻获得了较高的始基卵泡正常形态率及细胞增殖活性,可能是一种较好的冷冻方法。2.玻璃化方法虽使始基卵泡形态正常率降低,但也能使始基及初级卵泡卵母细胞保持良好的增殖活性,并可降低家兔卵巢组织抗原性,可能会减轻复苏后卵巢组织移植的免疫排斥,加之该技术操作简便,费用低廉,可能会有良好的应用前景。3.程序化冷冻及玻璃化冷冻对形态结构完整的小卵泡细胞增殖活力影响不明显,而大卵泡增殖活性明显下降。第二部分：家兔卵巢组织异体异位移植的实验研究研究目的在前期研究基础上,选择低浓度配伍比的DMSO+EG做为冷冻保护剂,玻璃化冷冻家兔卵巢组织,将新鲜及冷冻复苏后卵巢组织块分别移植于去势裸鼠颈部皮下,观察接受移植后裸鼠动情周期、激素分泌、子宫形态变化及移植物变化,以评价冷冻效果。研究方法1研究对象及分组选择清洁级性成熟雌性日本大耳白兔4只,取其卵巢组织处理后切块,分三组用于新鲜组织观察、新鲜移植、冷冻复苏移植；移植宿主采用8-10周龄的SPF级性成熟雌性Nu/Nu裸鼠36只,分4组（每组9只）,除正常对照组外,其余三组均切除双侧卵巢去势,之后分别用于新鲜组织移植、冻融组织移植及去势对照组。2研究方法2.1卵巢组织冷冻复苏方法：采用低浓度比二甲基亚砜（DMSO）+乙二醇（EG）作为冷冻保护液,通过坚硬表面铜块（SSV）法对卵巢组织进行玻璃化冷冻后快速复苏。2.2卵巢组织移植：麻醉裸鼠后,消毒并切开裸鼠左侧颈部皮肤,眼科镊分别夹取新鲜或冻融家兔卵巢组织多点移植于颈部皮下,缝合并标记移植部位。2.3家兔卵巢组织冷冻复苏后移植的效果评价2.3.1裸鼠阴道脱落细胞学观察：每天观察各组裸鼠阴道涂片上皮细胞变化以判断裸鼠动情周期恢复及持续时间。2.3.2裸鼠血中雌激素测定：全部正常对照组及部分移植组裸鼠有动情周期出现；去势未移植组无动情周期。分别测定对照组、去势组及移植后出现动情周期的裸鼠血清雌激素（E2）水平,判定卵巢功能情况。2.3.3裸鼠子宫形态学观察及移植物观察：移植35天后,切除各组裸鼠完整的子宫,分别于肉眼及镜下观察其形态学变化；切开新鲜及冷冻卵巢移植组裸鼠颈部皮肤,取出移植物,进行组织学观察。研究结果1裸鼠动情周期情况正常对照组裸鼠全部有规律的动情周期；新鲜移植组9个裸鼠中7个出现动情周期,冷冻移植组9个中6个出现动情周期,两移植组裸鼠恢复动情周期天数无差异,正常及移植组动情周期持续天数无差异。2裸鼠血中雌激素水平测定测定全部出现动情周期的裸鼠和去势裸鼠血中E2水平,两移植组恢复动情周期的裸鼠血中E2水平与正常对照组无明显差异,均明显高于去势组。3裸鼠子宫形态学观察去势组裸鼠子宫明显有别于有动情周期的裸鼠子宫,呈萎缩、苍白状,内膜薄,腺体少,表面被覆立方或者单层扁平上皮细胞；而正常对照及移植组裸鼠子宫色泽红润而有弹性,形态饱满,内膜厚且腺体粗大、量多,腺细胞胞浆丰富,内膜表面被覆单层高柱状或假复层上皮细胞。4卵巢组织移植物形态学观察取出裸鼠颈部皮下移植物进行观察,新鲜移植组与冷冻移植组移植物肉眼可见大部分长成淡黄色圆形或椭圆体,体积增大明显,移植物柔软,部分移植组织块表面出现凹凸不平的串珠状突起。存活的移植物镜下可见毛细血管生成,皮质内可见到各级卵泡及闭锁卵泡。结论采用低浓度DMSO+EG玻璃化冷冻法能够较好地保存卵巢组织的结构和功能,新鲜及冻融后的家兔卵巢组织裸鼠异种异位移植后能够存活,并具有内分泌功能。第三部分：人卵巢组织冷冻复苏的实验研究研究目的以不同浓度配伍的DMSO+EG做为玻璃化冷冻保护剂,分别以麦管法、微滴法及SSV法对人卵巢组织进行玻璃化冷冻,通过观察冷冻前后人卵巢组织中卵泡形态学变化、细胞凋亡率检测及复苏后卵巢组织体外培养上清液E2测定,评价不同冷冻复苏方案的效果。研究方法1研究对象2008.7-12月共收集20例因卵巢疾病而行腹腔镜手术的患者剥离的卵巢囊肿壁上残留组织,利用患者手术切除的废弃组织进行研究,该研究通过伦理委员会审核,并经患者知情同意。将收集到的卵巢组织切成约lxlxlmm3的组织块待用。2研究内容2.1卵巢组织冷冻及复苏：通过采用不同浓度的DMSO和EG制备两组玻璃化试剂（低浓度Ⅰ组,高浓度Ⅱ组）。将卵巢组织块分别在平衡液中和两种玻璃化冷冻液中浸泡暴露一定的时间后,再分别将卵巢组织块通过微滴法、麦管法和SSV法进行玻璃化冷冻,快速复温后进行组织学检查及体外培养。2.2复苏后人卵巢组织体外培养：定期收集组织培养上清液进行E2测定,14d后捞出卵巢组织块,固定染色行组织学检测。2.3人卵巢组织冷冻复苏效果判断：2.3.1冷冻前后卵巢组织中卵泡形态学分析：在卵巢组织块冷冻前后和体外培养14d后,观察各组卵巢组织结构及卵泡形态变化,计数正常形态和异常改变的卵泡比率,检测卵巢皮质内卵泡密度与分布以及各级卵泡的比例变化。2.3.2冻融卵巢组织各种细胞凋亡情况：采用DNA断裂原位末端标记法检测（Tunel）试剂盒,从DNA水平上检测冻融后卵巢组织内各种细胞凋亡情况。2.3.3卵巢组织体外培养上清液中雌二醇的检测：每48小时采集卵巢组织体外培养上清液,离心后保存在-80℃的冰箱中,以RIA法测定上清液中E2水平。结果1冷冻前后人卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例变化DMSO+EG高浓度配伍Ⅱ组原始卵泡正常形态率（43.7%）较新鲜对照组（75.5%）及低浓度Ⅰ组（69.4%）明显下降,三组间各级卵泡所占比例无明显差异,均以始基卵泡比例最高。2冷冻复苏后人卵巢组织结构形态学变化新鲜人卵巢组织间质细胞排裂致密而规则,卵巢皮质中间质细胞紧密包裹各级卵泡。经两种不同配伍比例的玻璃化冷冻液处理并分别采用三种载体冷冻保存的人卵巢组织复苏后对始基卵泡影响不明显,但可见卵巢组织内部分间质细胞排列紊乱,疏松甚至出现分离。3人卵巢组织各类细胞冷冻复苏后凋亡情况冻融后人卵巢组织中各级卵泡中都没有出现阳性表达的棕色或棕褐色凋亡细胞；而卵巢组织内间质细胞的细胞核内发现有凋亡细胞。经单因素方差分析,玻璃化冷冻各组卵巢组织内间质细胞凋亡率与新鲜对照组相比,差异无统计学意义。4各冷冻组复苏后卵巢组织体外培养液中E2的变化低浓度配伍Ⅰ组各载体组卵巢组织培养液中E2的分泌水平均高于高浓度配伍组Ⅱ各载体组,其中SSV法载体间差异更显着,而各冷冻组内载体间差异无统计学意义。结论1.人卵巢组织内始基卵泡对冷冻损伤的耐受性高于初级卵泡。2.低浓度的冷冻保护剂配合SSV法玻璃化冷冻方案对保存人卵巢组织的效果较佳。第四部分：人卵巢组织异种异位移植的实验研究研究目的在前期研究基础上,采用低浓度比DMSO+EG做为冷冻保护剂,通过SSV法对人卵巢组织进行玻璃化冷冻复苏,并将人卵巢复苏组织块多点移植至去势裸鼠颈部皮下,观察接受移植的裸鼠阴道脱落细胞学、血E2分泌及子宫形态学变化,以判断冷冻效果。研究方法1研究对象及分组2009.11～2010.3,收集20例因卵巢疾病而行腹腔镜手术的患者剥离的卵巢囊肿壁上残留组织,利用患者手术切除的废弃组织进行冷冻复苏及异体移植研究,并在短期内处死移植裸鼠进行观察,对冷冻及移植效果进行评价,未对患者造成任何伤害,该研究通过伦理委员会审核,并经患者知情同意。将收集到的卵巢组织切成约1×1×1mm3的小块待用。移植宿主采用健康性成熟Nu/Nu裸鼠,按是否移植分为四组（正常对照组、新鲜移植组、冻存移植组、去势组）,后三组裸鼠切除双侧卵巢去势。2研究内容2.1冷冻及复苏：采用低浓度比DMSO+EG通过SSV法对卵巢组织进行玻璃化冷冻,快速复温法进行复苏。2.2卵巢组织移植方法：分别将新鲜及冻融复苏后人卵巢组织多点移植于相应组别裸鼠左侧颈部皮下。2.3观察指标：2.3.1裸鼠阴道脱落细胞学观察：移植术后第5天起每日对裸鼠阴道细胞学检测观察动情周期。2.3.2裸鼠血雌激素水平测定：分别于动情期采集移植组裸鼠血测定血清E2水平,判定卵巢功能情况；去势裸鼠于处死前采血检测。2.3.3裸鼠子宫形态观察及移植物收集：甲醛固定切除的各组裸鼠子宫,切片染色后于光镜下观察子宫内膜腺体和间质的形态；切开移植组裸鼠颈部移植部位寻找卵巢组织移植物。结果1移植后裸鼠动情周期恢复情况正常对照组阴道细胞呈持续规律的动情周期性变化,新鲜移植组中4/9裸鼠恢复动情周期,冷冻移植组3/9裸鼠恢复动情周期；去势组阴道有核上皮细胞和角化细胞逐渐消失,白细胞大量增加,脱落细胞未见周期性变化。新鲜移植组裸鼠首次恢复动情周期时间[（19.0±1.6）d]稍早于冷冻移植裸鼠[（22.3±1.2）d],但两组动情周期持续天数[（5.0±0.8）、（5.8±1.2）d]与正常对照组[（4.8±0.7）d]比较,差异无显着性意义。2移植组裸鼠子宫形态学变化移植组小鼠子宫增粗红润,弹性好,与正常对照组相似。移植组与正常组裸鼠子宫湿重明显重于去势对照组。光镜下观察,正常对照组及移植组裸鼠子宫内膜间质疏松,内膜腺体粗大、量多,腺细胞呈高柱状,胞浆丰富,有假复层上皮细胞。与之相反,去势组裸鼠子宫变细变薄,外观苍白,内膜萎缩变薄,间质致密,腺体数量少,腺腔较小,腺细胞呈静止期表现。恢复动情周期的移植组裸鼠虽有动情周期出现并有与正常对照组相近的E2分泌水平,但颈部移植部位却未寻找到明显移植物。3裸鼠血清平均E2水平新鲜与冷冻移植组有动情周期的裸鼠血清平均E2水平与正常对照组无明显差异,均显着高于去势裸鼠组。结论1.采用低浓度比DMSO+EG冷冻剂SSV法玻璃化冷冻人卵巢组织,复苏后行异体异位移植可获得与新鲜卵巢组织移植相同的效果。2.人卵巢组织异体异位裸鼠颈部皮下无血管吻合移植能够存活并恢复裸鼠动情周期及内分泌功能。
刘艳丽[8]（2011）在《大鼠肉芽组织内卵巢组织自体移植的实验研究》文中研究说明目的：目前国内外大量实验研究和初步的临床应用证实通过自体移植卵巢有可能恢复患者生育能力和内分泌功能。然而,移植后缺血缺氧再灌注损伤仍然是阻碍移植卵巢功能恢复的关键因素。Israely等研究发现将卵巢组织移植到伤口愈合过程中的肉芽组织内,能减少组织的缺血损伤时时间。本实验将SD雌性大鼠新鲜卵巢组织分别自体移植到下肢根部肌肉内和预制的肌层创面肉芽组织内,并给予外源性促性腺激素,从组织学、新生血管免疫组化等方而进行评价：1)自体异位移植卵巢组织存活的可行性；2)不同时间创面肉芽组织对卵巢组织存活及移植物新生血管生成情况的影响；3)外源性促性腺激素对移植卵巢卵泡发育的影响；通过以上研究探索如何降低卵巢组织移植后的缺血缺氧损伤,为临床提供实验依据。方法：本实验选用SD雌性大鼠100只,周龄23-27d,体重50-60g。分为五组：第1组：移植到下肢根部肌肉内（即对照组）,第1I组：移植到移植前2天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内；第Ⅲ组：移植到移植前3天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内；第Ⅳ组：移植到移植前4天预制的下肢根部肌层创面肉芽组织内：第V组：移植到移植前5天预制的下肢根部肌层创而肉芽组织内。各组双侧卵巢去势后移植到双侧下肢肌肉组织或不同时间预制的肌层肉芽组织内,移植一周后回收单侧移植卵巢,石蜡包埋,5μm连续切片,HE染色,显微镜观察各组移植卵巢卵泡的结构和数量；化学发光法测定各组血清中雌二醇的的水平；免疫组化法检测移植卵巢新生血管VEGF, CD31标记血管内皮细胞,计数微血管密度,并观察VEGF和CD31表达的相关性；回收单侧移植卵巢后,给予外源性促性腺激素,观察外源性促性腺激素对异位移植卵巢组织的作用及时移植卵巢卵母细胞的形态及数量的影响。结果：1.组织学观察异位移植卵巢HE染色,肉芽组织各组原始卵泡数显着高于肌肉组,有统计学意义（P<0.05）。3天肉芽组织组中原始卵泡计数最高,与2、5天肉芽组织内比较有统计意义（p<0.05）。2.雌二醇检测结果卵巢移植后一周在给予外源性促性腺激素前及之后,2、3、4天肉芽组织各组雌二醇水平高于肌肉组,有统计学意义（P<0.05）。3天肉芽组织组中雌二醇最高,与2、4、5大肉芽组织内比较有统计意义（P<0.05）。3.免疫组化检测结果（1）VEGF阳性细胞数：3、4天肉芽组织内VEGF表达显着高于肌肉组,有统计学意义（P<0.05）；3天肉芽组织内VEGF表达最高,与其余组比较有统计学意义（P<0.05）。（2）MVD值：2、3、4天肉芽组织内MVD值较肌肉组高,有统计学意义（P<0.05）。（3） VEGF和ICD31表达相关性分析：移植物中VEGF表达与MVD值之间呈正相关关系（r=0.493,p<0.01）。4.卵母细胞检测结果所有移植物中均可分离到卵母细胞。3天肉芽组织内卵母细胞数较肌肉组高,有统计学意义（p<0.05）。肌肉组中均为GV期,未发现MII期卵母细胞。肉芽组织组中不但可分离到GV期卵母细胞,还可见卵母细胞生发泡破裂或MⅡ期卵母细胞。结论：1.卵巢组织异位移植后可以恢复卵巢甾体激素的分泌功能和卵泡生长发育。2.肉芽组织组VEGF和CD31的表达较肌肉组升高,且在3天肉芽组织内表达达到最高值,推测在移植卵巢前3天在移植部位作手术创面,可以显着增加移植部位的新生血管。3.外源性的促性腺激素能促进异位移植卵巢卵母细胞的成熟和发育,卵母细胞形态未见异常。4.肉芽组织各组中发现有MⅡ期卵母细胞,而肌肉组中未见,推测肉芽组织内的环境可能更有利于异位卵巢的生长和卵母细胞的发育。
周冬梅[9]（2010）在《小鼠卵母细胞体外成熟与转基因小鼠卵巢移植研究》文中研究说明在生命科学研究蓬勃发展的今天,实验动物在科学研究中的作用日益突出。小鼠是应用最为广泛的实验动物之一,C57BL/6J品系小鼠作为一种近交小鼠,因其遗传背景稳定,成为生殖生物学、肿瘤学、生理学、免疫学和遗传学研究中常用的品系,大多数转基因小鼠均以C57BL/6J小鼠为遗传背景制作出来。如何对这些基因工程小鼠进行科学保种,建立一套有效的小鼠种质资源保存方案显得尤为重要。目前,利用体外受精技术结合胚胎冷冻保存对小鼠进行资源保存已经得到长足的发展,而卵母细胞体外成熟属于体外胚胎生产的基础环节,卵巢异体原位移植也是保存雌性小鼠生殖功能并获得自然妊娠子代的有效手段,两者都是小鼠资源保种工作中必不可缺的基础环节；在研究不孕症治疗模型方面也有着广阔的应用前景。因此,研究小鼠卵母细胞体外成熟及卵巢移植具有重要的实际意义。本实验以C57BL/6J小鼠为研究对象,旨在通过对该品系小鼠卵母细胞体外成熟体系的研究提高体外成熟卵子受精后的卵裂率及胚胎的继续发育能力,通过卵巢异体原位移植得到自然妊娠,产生供体卵巢后代,为小鼠种质资源保存奠定基础,为相关的实验研究提供参考。1.小鼠卵母细胞体外成熟研究本试验以C57BL/6J小鼠为研究对象,研究小鼠卵母细胞体外成熟与体外受精的多种影响因素,包括PMSG处理、小鼠周龄、培养液、卵巢组织液（mOTF）添加、培养时间、卵丘细胞、激光破膜和精子获能时间等,旨在建立适当方法以获得试管小鼠。以小鼠卵母细胞体外培养成熟、体外受精后的卵裂率来评价成熟效果。结果表明：（1）PMSG处理对小鼠卵母细胞体外成熟具有促进作用,处理组的卵裂率显着高于对照组（73.10%对68.73%,P<0.05）；（2）4-9周龄小鼠分离到的未成熟卵母细胞不仅数量多,而且无论卵丘-卵母细胞复合体（COC）还是裸卵（DO）其卵子成熟后比其他组具有更高的卵裂率,虽然1年龄小鼠卵裂率与4-9周龄无差异,但其卵巢上分离得到的卵子数量显着少于4-9周龄（14枚／只对116枚／只）；（3）3种培养液添加胎牛血清（FBS）后,M16培养液比DMEM和MEM-α更适合小鼠卵母细胞的体外成熟,3组卵裂率分别为51.56%、45.58%和38.10%；（4）在M16+FBS基础上添加小鼠卵巢组织液（mOTF）能显着提高卵子成熟效果,添加或不添加mOTF所获卵裂率分别为80.07%和51.56%,两组间差异显着（P<0.05）；（5）卵母细胞体外成熟培养时间以18h为最佳；（6）COC比起DO有更好的成熟效果和较高的卵裂率,卵裂率分别为79.82%和53.86%,两组有显着差异（P<0.05）；（7）体外成熟的裸卵,在体外受精前,挑选有pbI的卵子进行激光破膜后的卵裂率都明显较不处理组为高（69.91%对58.75%；P<0.05）；（8）精子获能4h,可提高卵子体外受精卵裂率,显着高于传统上2h获能的卵裂率（83.87%对49.51%；P<0.05）。本试验结果表明,选择4周龄C57BL/6J小鼠,腹腔注射10IU/只PMSG处理48h后,分离卵母细胞以M16+10%FBS+10%mOTF培养18h,并以获能4h的精子进行体外受精,为小鼠卵母细胞最佳体外成熟方案,所获卵裂率与体内成熟卵母细胞对照组卵裂率无显着差异（85.14%对90.19%；P>0.05）。将获得的2-细胞进行胚胎体外培养获得囊胚发育,进行胚胎移植后成功获得2只试管小鼠。2.卵巢异体原位移植研究本研究以3个转基因品系小鼠及其背景鼠作为研究对象,转基因小鼠Ptet-mPTA1与LAP/rtTA的背景鼠为近交系小鼠C57BL/6J,HBV-x小鼠的背景鼠为封闭群小鼠ICR/JCL。试验以此3个品系的转基因小鼠作为卵巢供体,异体原位移植到其背景鼠的卵巢包膜内,移植前切除1/2-2/3受体卵巢,饲养2个月后与背景鼠的雄鼠合笼,自然怀孕生产出子代,采集子代中尾尖提取基因组,结合PCR、电泳检测目的基因。出现阳性条带者判定为来源于供体卵巢,阴性判定为来源于受体卵巢。结果表明：（1）4只10日龄Ptet-mPTAl小鼠作为供体,卵巢移植给4只背景鼠,4只均成活、怀孕并产仔；基因检测表明,有阳性子代出现；4只10日龄LAP/rtTA小鼠作为供体,卵巢移植给4只背景鼠,4只均成活、怀孕并产仔,经基因检测证明有阳性子代出现；10日龄和4周龄HBV-x品系小鼠分别移植4只和17只,均成活,其中19只怀孕并产仔,经基因检定,无阳性结果出现；（2）对无阳性后代出现的受体解剖发现,卵巢移植体未得到生长,有的甚至坏死,有的与周围组织粘连、无血供或移植体丢失；（3）对有阳性结果出现的受体小鼠,进行解剖发现,移植体在卵巢包膜内有生长、有血供,显微镜下分离移植体,能观察到有卵泡生长,能够分离到未成熟的卵母细胞,包括COC和DO,按卵母细胞体外成熟的方法对分离到的卵母细胞进行体外成熟培养并作体外受精,能够得到形态正常的2-细胞胚胎,两组卵裂率分别为59.57%和52.08%。
韩雪莹[10]（2010）在《大鼠胚胎卵巢原位移植和皮下移植后形态和功能研究》文中进行了进一步梳理目的：探讨大鼠胚胎卵巢原位移植、皮下移植后内分泌功能的恢复情况,建立胚胎卵巢原位移植模型,以备日后进一步研究胚胎卵巢原位移植后,受体自然生育能力的恢复以及产生子代安全性问题。方法：采用胎龄18-19天雌性Sprague Dawley（SD）胎鼠作为卵巢供体,将日龄40-50天的雌性SD大鼠（40只）随机分为原位移植组、皮下移植组、阴性对照组（去势对照组）和阳性对照组（正常对照组）,每组各10只,按组别予不同处理,术后第40天观察移植卵巢发育及组织学情况,并测定各组雌二醇、孕激素水平。结果：术后第40天原位移植组、皮下移植移植卵巢明显增大,两组移植卵巢以及阳性对照组卵巢在光镜下可见大小不等的各级发育卵泡、黄体组织,而阴性对照组未见卵巢组织；检测原位移植组、皮下移植组、阳性对照组以及阴性对照组雌二醇水平分别为：107.4±10.02 pm01/L、106.73±9.67pmol/L、111.81±4.36pmol/L、46.58±7.74pmol/L；孕激素水平为：11.86±2.39ng/ml、11.60±1.13ng/ml、12.06±0.72 ng/ml、3.02±0.64ng/ml.经统计学分析,原位移植组与皮下移植组间雌孕激素水平无显着性差异（p>0.05）,且与阳性对照组间均无显着性差异（p>0.05）,而以上三组雌孕激素水平与阴性对照组相比有显着性差异（p<0.01）。结论：1、大鼠胚胎卵巢原位移植可恢复内分泌功能且具有排卵功能；2、大鼠胚胎卵巢原位移植与皮下移植效果相当,且原位移植在恢复受体自然生育能力方面更有优势。3、为进一步研究大鼠胚胎卵巢原位移植后其自然生育能力的恢复以及产生子代安全性问题而建立动物模型是可行的。
二、胚胎卵巢移植的现状及前景（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胚胎卵巢移植的现状及前景（论文提纲范文）
（1）猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 大鼠卵巢组织玻璃化冷冻及自体移植对卵巢组织的影响 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 脂肪间充质干细胞联合UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 女性生育力保存研究进展 |
| 参考文献 |
| 论文发表与获奖情况 |
| 致谢 |
（2）辅助生殖中卵巢反应性及妊娠结局预测指标的探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 促排卵过程中预测卵巢反应性指标的探讨 |
| （一）资料与方法 |
| （二）结果 |
| （三）讨论 |
| 第二部分 辅助生殖中妊娠结局预测指标的探讨 |
| （一）资料与方法 |
| （二）结果 |
| （三）讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词表 |
| 实验设计 大鼠卵巢移植 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（3）免疫抑制剂在卵巢移植排斥反应中的应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 免疫抑制剂研究进展 |
| 1.1 糖皮质激素 |
| 1.2 抗代谢药 |
| 1.3 环磷酰胺 |
| 1.4 钙调磷酸酶抑制剂 (CNI) |
| 1.5 抗体制剂 |
| 1.5.1 利妥昔单抗 (rituximab) 是一种针对B淋巴细胞表面标志CD20的抗体, 能够通过补体依赖的细胞毒作用清除B淋巴细胞。 |
| 1.5.2 巴利昔单抗和达珠单抗是IL-2受体α单链的单克隆抗体, 可以阻断Th细胞白介素-2 (IL-2) 受体而发挥免疫抑制效应。 |
| 1.5.3 抗淋巴细胞球蛋白能选择性地与T淋巴细胞结合, 在补体参与下使外周淋巴细胞裂解, 且对T细胞的作用较强或封闭淋巴细胞表面受体使抗体失去识别抗原的能力。 |
| 2 免疫抑制剂在组织器官移植中的运用 |
| 2.1 肝脏移植 |
| 2.2 心脏移植 |
| 2.3 肾脏移植 |
| 2.4 卵巢移植 |
| 3 结语与展望 |
（4）卵巢早衰的治疗现状及进展（论文提纲范文）
| 1卵巢早衰治疗现状 |
| 1.1激素替代治疗(hormonereplacementtherapy,HRT) |
| 1.2赠卵移植 |
| 1.3低温保卵技术 |
| 1.4卵巢移植 |
| 1.5免疫疗法 |
| 1.6心理治疗 |
| 2治疗进展 |
| 2.1干细胞治疗 |
| 2.2基因治疗 |
| 3总结 |
（5）我国同种异体卵巢移植的临床应用中的医学伦理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 国内外研究综述 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 创新点 |
| 第二章 相关理论概述 |
| 2.1 相关概念界定 |
| 2.2 卵巢移植的方式 |
| 2.3 开展同种异体卵巢移植的必然性 |
| 第三章 同种异体卵巢移植的伦理依据 |
| 3.1 仁爱是同种异体卵巢移植的情感基础 |
| 3.2 尊重生命是同种异体卵巢移植的根本要求 |
| 3.3 知情自愿原则是同种异体卵巢移植的基本原则 |
| 3.4 禁止器官买卖是同种异体卵巢移植的法律支持 |
| 3.5 交叉交换移植为同种异体卵巢移植提供了现实依据 |
| 第四章 同种异体卵巢移植存在的伦理问题 |
| 4.1 卵巢移植供体的伦理问题 |
| 4.2 卵巢移植受体的伦理问题 |
| 4.3 卵巢移植受体所生育后代的伦理问题 |
| 4.4 实施卵巢移植医务工作者的伦理问题 |
| 第五章 同种异体卵巢移植的伦理问题的解决对策 |
| 5.1 加强灵活宣传教育,破除思想情感上的障碍 |
| 5.2 建立健全器官移植法律制度,填补相关领域的法律空白 |
| 5.3 确立新死亡判定标准,提高供体器官质量 |
| 5.4 设置合理的补偿机制,提高公众的捐献积极性 |
| 5.5 提高医务从业人员的职业道德素质,保障患者的合法权益 |
| 5.6 加快完善伦理委员会建设,加强器官移植伦理专题研究 |
| 第六章 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）补肾对冻存后自体移植小鼠卵巢功能影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写名词索引 |
| 引言 |
| 一、补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢体内发育的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验设计 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据处理及分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠术后一般状态观察 |
| 2.2 补肾对自体异位移植卵巢存活及回收率的影响 |
| 2.3 补肾对自体异位移植卵巢及邻近区域形态变化的影响 |
| 2.4 补肾对自体异位移植卵巢重量的影响 |
| 2.5 补肾对自体异位移植卵巢卵泡发育的影响 |
| 2.6 补肾对自体异位移植卵巢组织VEGF表达水平的影响 |
| 2.7 补肾对自体异位移植卵巢细胞凋亡的影响 |
| 2.8 补肾对自体异位移植卵巢合成雌二醇的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 补肾影响冻存后自体异位移植卵巢回收率 |
| 3.2 补肾影响冻存后自体异位移植卵巢存活状态 |
| 3.3 补肾影响冻存后自体异位移植卵巢卵泡发育 |
| 4 小结 |
| 二、补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢卵母细胞体外发育的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验设计 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据处理及分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 自体异位移植卵巢卵母细胞形态学观察 |
| 2.2 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞发育的影响 |
| 2.3 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞体外培养的影响 |
| 2.4 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞回收的影响 |
| 3.2 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞体外培养的影响 |
| 3.3 补肾对自体异位移植卵巢卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响 |
| 4 小结 |
| 三、补肾对冻存后自体异位移植小鼠卵巢卵泡生长发育相关基因表达的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验设计 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 数据处理及分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 补肾对移植卵巢血管生成相关基因表达的影响 |
| 2.2 补肾对移植卵巢卵泡闭锁相关基因表达的影响 |
| 2.3 补肾对移植卵巢卵泡生长相关基因表达的影响 |
| 2.4 补肾对移植卵巢卵泡分化相关基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 补肾对移植卵巢血管生成相关基因表达影响的机理 |
| 3.2 补肾对移植卵巢卵泡闭锁相关基因表达影响的机理 |
| 3.3 补肾对移植卵巢卵泡生长相关基因表达影响的机理 |
| 3.4 补肾对移植卵巢卵泡分化相关基因表达影响的机理 |
| 4 小结 |
| 四、总结 |
| 1 结论 |
| 1.1 冻存和自体异位移植影响移植卵巢存活以及卵巢功能 |
| 1.2 补肾显着提高冻存后自体异位移植卵巢的存活能力 |
| 1.3 补肾促进冻存后自体异位移植卵巢组织的卵泡发育 |
| 1.4 补肾保护冻存后自体异位移植卵巢原始卵泡储备力 |
| 1.5 补肾提高冻存后自体异位移植卵巢卵母细胞体外发育能力 |
| 1.6 小鼠冻存后自体异位移植卵巢对PMSG具有反应能力 |
| 2 创新点 |
| 3 展望 |
| 五、文献研究 |
| 1 卵巢组织冷冻保存与移植的应用 |
| 1.1 人类生殖医学领域的应用 |
| 1.2 应用于生物物种保护和利用 |
| 1.3 为卵泡发育研究提供模型 |
| 2 卵巢组织冷冻保存 |
| 2.1 冷冻保存方法 |
| 2.2 影响冷冻保存的因素 |
| 3 卵巢组织移植 |
| 3.1 同种移植 |
| 3.2 异种移植 |
| 3.3 影响卵巢移植的因素 |
| 4 肾主生殖 |
| 4.1 理论研究 |
| 4.2 现代研究 |
| 5 方药研究 |
| 5.1 右归丸 |
| 5.2 左归丸 |
| 5.3 五子衍宗丸 |
| 5.4 在辅助生殖领域的应用 |
| 致谢 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 作者在读期间公开发表的学术论文 |
（7）家兔和人卵巢组织冷冻复苏及异种移植的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词汇对照表 |
| 引言 |
| 第一部分：家兔卵巢组织冷冻复苏的实验研究 |
| 1 研究对象及实验材料 |
| 2 研究内容及研究结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 附图 |
| 第二部分：家兔卵巢组织异体异位移植的实验研究 |
| 1 研究对象及材料 |
| 2 研究方法及内容 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附图 |
| 第三部分：人类卵巢组织冷冻复苏的实验研究 |
| 1 研究对象及材料 |
| 2 研究方法及内容 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附图 |
| 第四部分：人卵巢组织异体异位移植的实验研究 |
| 1 研究对象及材料 |
| 2 研究方法及内容 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 附录三 |
| 综述 卵巢组织玻璃化冻存及移植的研究现状与应用前景 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 在学期间发表的论文和科研成果 |
（8）大鼠肉芽组织内卵巢组织自体移植的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符合说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、卵巢组织自体移植后卵巢存活及新生血管表达的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 试剂与仪器 |
| 1.1.3 试剂的配置 |
| 1.1.4 动物分组 |
| 1.1.5 手术方法 |
| 1.1.6 卵巢组织移植后的观察与取材 |
| 1.1.7 卵巢组织的组织学检查 |
| 1.1.8 统计学处理 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 动物及移植物的存活 |
| 1.2.2 组织学切片结果 |
| 1.2.3 性激素结果 |
| 1.2.4 免疫组化检测结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 卵巢的生理功能 |
| 1.3.2 自体异位移植卵巢的可行性 |
| 1.3.3 移植后卵巢组织的血管重建 |
| 1.4 小结 |
| 二、外源性促性腺激素对异位移植卵巢卵泡发育的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 试剂与仪器 |
| 2.1.3 动物分组和卵巢移植 |
| 2.1.4 促性腺激素处理 |
| 2.1.5 血液的采集 |
| 2.1.6 移植物卵母细胞的分离与形态学观察 |
| 2.1.7 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 术后一般状态观察 |
| 2.2.2 移植体的生长与发育 |
| 2.2.3 性激素结果 |
| 2.2.4 移植物卵母细胞的分离与形态学观察 |
| 2.2.5 卵母细胞计数 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（9）小鼠卵母细胞体外成熟与转基因小鼠卵巢移植研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 简写及缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 小鼠卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 1. 哺乳动物卵母细胞体外成熟研究简史 |
| 2. 小鼠卵母细胞体外成熟的研究现状 |
| 3. 影响小鼠卵母细胞体外成熟的因素 |
| 3.1 孕马血清促性腺激素(PMSG)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2 小鼠周龄与卵丘细胞对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3 体外成熟液及添加因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4 卵泡液对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.5 小鼠精子获能对卵母细胞体外受精的影响 |
| 4. 小鼠卵母细胞的成熟鉴定 |
| 4.1 显微镜下形态学分析卵母细胞的成熟度 |
| 4.2 卵母细胞成熟的亚细胞结构变化 |
| 4.3 体外受精判断卵母细胞的成熟度 |
| 5. 小鼠卵母细胞体外成熟仍存在的问题 |
| 参考文献 |
| 第二章 小鼠卵巢移植研究进展 |
| 1. 卵巢移植的研究简史与现状 |
| 1.1 卵巢移植的部位 |
| 1.2 移植卵巢的状态 |
| 1.3 卵巢移植的分类 |
| 2. 卵巢移植部位的血管重建 |
| 3. 卵巢移植效果的评价 |
| 3.1 形态学与组织学观察 |
| 3.2 移植卵巢血管重建的检测 |
| 3.3 卵巢移植受体激素代谢变化的检测 |
| 3.4 卵巢移植受体的生殖系统变化 |
| 3.5 移植卵巢卵母细胞的分离 |
| 3.6 自然交配检测卵巢移植受体繁殖力 |
| 4. 影响卵巢移植的因素 |
| 4.1 技术因素 |
| 4.2 非技术因素 |
| 5. 卵巢移植的前景与存在问题 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第三章 小鼠卵母细胞的体外成熟与体外受精 |
| 摘要 |
| 1. 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器设备与器械 |
| 1.3 主要试剂和药品 |
| 1.4 试剂的配制 |
| 2. 方法 |
| 2.1 嘴吸式移卵针制备 |
| 2.2 雌鼠的激素处理与卵母细胞分离培养 |
| 2.3 体外受精 |
| 2.4 胚胎体外培养及胚胎移植 |
| 2.5 实验设计 |
| 2.6 数据统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 PMSG处理对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2 小鼠周龄对卵母细胞成熟受精的影响 |
| 3.3 卵丘细胞对卵母细胞成熟效果的影响 |
| 3.4 基础培养液及卵巢组织液对小鼠卵母细胞成熟的影响 |
| 3.5 培养时间对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.6 小鼠DO的体外成熟培养 |
| 3.7 激光破膜对小鼠DO体外受精的影响 |
| 3.8 精子获能时间对小鼠卵母细胞体外受精效果的影响 |
| 3.9 体外成熟卵母细胞与正常体内成熟卵母细胞发育能力的比较 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 激素处理对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 4.2 小鼠卵母细胞体外成熟的培养液及添加因子 |
| 4.3 透明带激光破膜对成熟卵子的辅助受精作用 |
| 4.4 精子活力对卵子体外受精卵裂率的影响 |
| 参考文献 |
| 第四章 转基因小鼠卵巢异体原位移植试验 |
| 摘要 |
| 1. 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要试剂和药品 |
| 1.4 试剂的配制 |
| 2. 方法 |
| 2.1 供试试验小鼠的基因检测 |
| 2.2 卵巢移植手术 |
| 2.3 试验设计 |
| 3. 结果 |
| 3.1 供试小鼠的基因检测 |
| 3.2 三个品系转基因鼠卵巢移植子代检测结果对比 |
| 3.3 受体的剖检 |
| 3.4 分离移植体上卵母细胞进行体外成熟并作体外受精 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 卵巢移植供体的选择 |
| 4.2 供试小鼠的基因检测 |
| 4.3 移植部位的选择与卵巢移植后血供的重新建立 |
| 4.4 近交系与封闭群的选择 |
| 4.5 卵巢移植后卵子体外成熟与体外受精 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）大鼠胚胎卵巢原位移植和皮下移植后形态和功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 术后处理 |
| 2.5 研究方法 |
| 2.6 统计分析方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 实验动物术后情况 |
| 3.2 各组术后腹腔内情况 |
| 3.3 各组雌二醇、孕激素水平 |
| 3.4 各组卵巢组织学检查结果 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 胚胎卵巢原位移植可行性 |
| 4.2 胚胎卵巢原位移植与皮下移植效果比较 |
| 4.3 建立胚胎卵巢原位移植动物模型是可行的 |
| 4.4 卵巢移植展望及相关问题 |
| 第五章 结论 |
| 第六章 参考文献 |
| 第七章 附图 |
| 综述 胚胎卵巢移植研究现状 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
四、胚胎卵巢移植的现状及前景（论文参考文献）
- [1]猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究[D]. 邢彦彦. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [2]辅助生殖中卵巢反应性及妊娠结局预测指标的探讨[D]. 范东青. 大连医科大学, 2017(08)
- [3]免疫抑制剂在卵巢移植排斥反应中的应用研究进展[J]. 龙爱专,赵淑云. 世界最新医学信息文摘, 2016(90)
- [4]卵巢早衰的治疗现状及进展[J]. 徐晖. 中国现代医生, 2015(21)
- [5]我国同种异体卵巢移植的临床应用中的医学伦理研究[D]. 凌卓. 南方医科大学, 2015(03)
- [6]补肾对冻存后自体移植小鼠卵巢功能影响的研究[D]. 曹胜. 成都中医药大学, 2014(07)
- [7]家兔和人卵巢组织冷冻复苏及异种移植的实验研究[D]. 王兴玲. 郑州大学, 2013(10)
- [8]大鼠肉芽组织内卵巢组织自体移植的实验研究[D]. 刘艳丽. 天津医科大学, 2011(04)
- [9]小鼠卵母细胞体外成熟与转基因小鼠卵巢移植研究[D]. 周冬梅. 南京农业大学, 2010(06)
- [10]大鼠胚胎卵巢原位移植和皮下移植后形态和功能研究[D]. 韩雪莹. 中南大学, 2010(03)