一、肝细胞生长因子的研究进展（论文文献综述）
葛文燕[1]（2021）在《人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化》文中研究指明近年来,多种肝脏疾病的发病率逐渐升高,严重影响着人们的健康。目前,治疗终末期肝病的有效方法是供体肝移植和肝细胞移植,但肝供体的缺乏使这两种方法的开展都面临着巨大的挑战。因此,开发可再生的肝细胞来源是一个亟待解决的问题。人多能干细胞具有自我更新以及分化为多种细胞类型的潜能,成为了产生肝脏样细胞的理想细胞来源之一。近年来,将多能干细胞分化为肝脏样细胞的研究有了诸多进展,但该领域仍存在一些问题,例如:得到的肝脏样细胞异质性高;培养系统中存在异种动物产品及昂贵的生长因子,难以满足临床和大规模生产的要求;肝脏细胞的功能和成熟度都有待提高。在本课题中,我们将人胚胎干细胞到肝细胞过程中的中间阶段——定型内胚层细胞在体外扩增和纯化,形成内胚层祖细胞系,并将其继续分化为肝脏样细胞。利用这种方法可以降低分化细胞的异质性,减少移植后的致瘤风险,也有利于分化机制的研究。此外,结合化学小分子筛选,我们建立了内胚层祖细胞扩增和高效分化的新体系,去除了对生长因子的依赖。结果显示,利用新体系分化获得的肝细胞,与基于生长因子分化体系获得的肝细胞形态相似,可以表达高水平的肝脏特异性标志物,并具有糖原合成和脂质代谢等生物学功能。综上所述,这项研究优化并建立了内胚层祖细胞系培养的新体系,为体外大规模的肝细胞生产提供了基础,为肝脏发育过程及机制研究提供了平台,并且有助于促进肝脏样细胞在临床上的应用。
芮雪[2]（2021）在《HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究》文中指出鹿茸的周期性完全再生能力是其他哺乳动物器官所不具备的,在再生医学和生物医学被认为是适合的模型。鹿茸的生长与再生能力主要是基于干细胞的分裂,在创伤条件下,其微环境变化对鹿茸干细胞的影响可能是促进鹿茸再生及快速生长发育的重要原因。HGF/c-Met信号通路可在非炎症条件介导干细胞靶向分布,研究表明HGF、c-Met基因在组织损伤、创伤愈合等过程中起到重要作用。本研究利用分子生物学技术克隆获取塔里木马鹿茸HGF基因全长序列,通过实时荧光定量和免疫组化试验,检测创伤鹿茸组织修复及再发育过程中HGF与c-Met基因的表达,分析确定HGF与c-Met基因对鹿茸组织修复的影响,为鹿茸再生作用机制和哺乳动物组织创伤修复提供理论补充。试验利用RACE技术获得塔里木马鹿茸的HGF基因全长序列2461 bp,ORF为2193 bp,编码730个氨基酸,5′UTR为156 bp,3′UTR为112 bp。通过序列比对同源性分析结果显示:塔里木马鹿与牛（Bos taurus）;山羊（Capra hircus）;中国水牛（Bubalus bubalis）;绵羊（Ovis aries）;单峰骆驼（Camelus dromedarius）;野猪（Capra hircus）;狗（Canis lupus familiaris）;白鼬（Mustela erminea）;大熊猫（Mustela erminea）;猎豹（Acinonyx jubatus）;进行比对,同源性分别为97.93%,97.83%,97.80%,97.72%,95.72%,94.98%,94.44%,94.25%,94.11%,93.83%,塔里木马鹿HGF基因与牛同源性最高,且构建进化树发现塔里木马鹿与牛亲缘关系较近。通过qRT-PCR技术检测了HGF和c-Met基因在损伤与健康塔里木马鹿茸组织中的表达,结果显示两基因在茸皮、间充质、软骨和骨组织中表达趋势一致,其中在茸皮和骨组织的表达量极显着高于间充质和软骨组织（P<0.01）,但在软骨和间充质组织中表达量低,且差异不显着（P>0.05）;与健康鹿茸组织相比,HGF和c-Met基因在损伤茸茸皮组织中的表达量极显着降低（P<0.01）,而在损伤茸间充质组织表达量极显着增加（P<0.01）,在损伤茸软骨和骨组织表达量没有显着差异（P>0.05）;HGF和c-Met基因随鹿茸组织修复进程表达量逐渐增加,且差异显着（P<0.05）。试验通过免疫组化检测了HGF和c-Met在损伤与健康塔里木马鹿茸不同组织中的蛋白表达情况,分析发现两基因在损伤茸茸皮组织中阳性反应明显减弱,在损伤茸骨组织中没有明显差异,在间充质和软骨组织中阳性反应较弱。综上所述,HGF和c-Met基因在损伤茸间充质组织中表达量均极显着高于健康茸组织。初步推测HGF和c-Met基因可诱导鹿茸间充质干细胞的增殖和分化,对损伤后塔里木马鹿茸的修复及再发育有促进作用。
周怡驰[3]（2021）在《柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究》文中指出中国是肝病大国,多种肝病高发,肝纤维化作为肝病研究和治疗的重要领域,越来越受到重视。肝纤维化是肝脏修复肝损伤引起的异常结缔组织增生和细胞外基质过度沉积的病理改变。肝纤维化存在于大多数慢性肝病中,是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,甚至可持续进展为肝硬化、肝癌,给患者生命健康带来严重威胁。研究肝纤维化的病因及发病机制、寻找有效的治疗靶点,对于阻止肝病的发展、维护患者的生命健康有很大的意义。近年来,肝纤维化的病理分子生物学机制、临床诊疗技术等取得了长足发展。但目前西医对于抗纤维化疗效尚不确切,缺乏有效的治疗手段。中医药治疗肝纤维化具有确切的优势,已有多种注册适应证为肝纤维化的中成药上市。柴芪益肝方由导师胡世平教授所创,是治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的经验方,前期临床和实验研究发现对肝纤维化有较好疗效,但其作用机制尚不清楚。胡教授现任北京中医药大学深圳医院党委书记,广东省名中医,全国基层名老中医师承项目指导老师,深圳市地方级领军人才,获评“南粤最美中医”,从事中医药防治慢性肝病的临床与科研工作30多年,擅长中医、中西医结合治疗肝脏疾病,形成了独特的学术思想体系。目的结合临床回顾性研究、网络药理学预测和动物实验探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的疗效与作用机制,为该方的进一步开发应用提供依据,并分析总结导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想及其在柴芪益肝方组方思路中的应用。方法1、临床研究:通过回顾性研究方法,收集2018年1月1日至2021年2月3日期间在北京中医药大学深圳医院肝病科门诊及住院部诊断为慢性乙型肝炎患者的病例资料,并筛选出符合本研究标准的慢性乙型肝炎肝纤维化肝郁脾虚型患者。根据患者所服药物分为常规治疗组和CQYG组,收集所有患者治疗12个月前后的指标,包括主要指标:肝脏硬度值（LSM）、纤维化-4指数（FIB-4）、天门冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数（APRI）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量;次要指标:谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,总胆红素（TBiL）,谷氨酰转酞酶（GGT）,白蛋白（ALB）,将所有检测指标进行治疗前后的组内与组间比较。2、网络药理学:检索 TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction、OMIM、Gene Cards等数据库,筛选CQYG治疗肝纤维化的活性成分和潜在作用靶点。借助Cytoscape软件和String数据库,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络和蛋白互作PPI网络,并进行拓扑学分析,筛选关键药效分子和核心靶点。运用Autodock vina软件进行分子对接,并基于R语言对作用靶点进行GO和KEGG富集分析。3、动物实验:选取50只6周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机抽取10只分别纳入空白对照组（CTL）、肝纤维化模型组（Model）、柴芪益肝方低剂量组（CQYG-L）、柴芪益肝方高剂量组（CQYG-H）和水飞蓟素治疗组（Silymarin）,共5组。四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）腹腔注射建立小鼠肝纤维化模型:除空白对照组外,其余各组小鼠腹腔注射含15%CCl4的橄榄油5ml·kg-1,每周2次,连续注射8周。从造模第1天起,柴芪益肝方低、高剂量组小鼠分别灌胃给予0.37 g·kg-1·d-1、0.74 g·kg-1·d-1的柴芪益肝方,水飞蓟素组给予100 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束,摘取所有小鼠肝脏、收集血清,对各组小鼠肝组织进行HE、天狼星红、Masson染色;用自动生化分析仪检测血清AST和ALT的含量;ELISA法检测肝组织中MDA、SOD、GSH-Px和Hyp水平;免疫组化法检测肝组织中α-SMA、Collagen I、Vimentin的表达;免疫荧光法检测肝组织中Ki67+和Lgr5+细胞;提取各组肝组织RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot分别检测肝纤维化小鼠肝组织中NF-κB、TGF-β/Smad、Wnt/β-Catenin信号通路相关靶标mRNA和蛋白表达。结果1、临床研究:共纳入符合标准的患者203人,其中,常规治疗组纳入101人,年龄最大者76岁,最小22岁,平均年龄（41.34±0.90）岁;CQYG组纳入102人,年龄最大者67岁,最小27岁,平均年龄（43.13±0.78）岁,两组年龄无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。（1）无创肝纤维化指标（LSM、FIB-4、APRI）在两组患者自身治疗前后比较,以及治疗后的组间比较,均无显着性差异（P>0.05）,但两组治疗后LSM均较治疗前有降低趋势。（2）两组患者自身前后比较,乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量和乙肝病毒表面抗原（HBsAg）治疗前和后均无显着性差异（P>0.05）;CQYG组较常规治疗组治疗后HBsAg显着性降低（P<0.05）,CQYG组治疗后HBV-DNA定量和HBsAg较治疗前均有下降趋势。（3）两组患者自身治疗前后血清肝功能指标（ALT、AST、GGT、TBiL、ALB）均在正常范围内,治疗后组间比较肝功能均无显着性差异（P>0.05）。2、网络药理学预测:共获得121种CQYG治疗肝纤维化的潜在活性成分和257个对应的作用靶点,并筛选出14种关键药效分子及28个核心靶点。点度中心性值前10的核心靶点和关键药效分子具有较好的结合活性。GO和KEGG结果主要涉及炎症反应、氧化应激、成纤维细胞增殖、内皮细胞增殖、调节脂质代谢活动、血管生成、肝再生等生物学过程及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等。3、动物实验研究:与模型组相比,CQYG各组和水飞蓟素组小鼠肝组织形态和胶原沉积较模型组改善,水飞蓟素组和CQYG-H小鼠血清ALT、AST水平均显着降低（P<0.01）;CQYG高剂量组肝组织MDA和Hyp的含量显着低于模型组（P<0.05）,SOD和GSH-Px含量显着高于模型组（P<0.05）;免疫组化结果显示,CQYG组和水飞蓟素组α-SMA、CollagenI、Vimentin阳性表达区域较模型组少;免疫荧光结果显示,柴芪益肝方组Ki67阳性细胞和Lgr5阳性细胞数量均较模型组有增多趋势;CQYG组肝组织中p-NF-κBp65、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达水平较模型组显着降低（P<0.05）;与模型组相比,CQYG-H 肝组织 CollagenI、TGF-β、TNF-α、IL-1βmRNA 的表达水平以及 Collagen I、α-SMA、TIMP-1、TGF-β、磷酸化 Smad2/3、Smad2/3、Smad4、Wnt3a、β-Catenin 蛋白表达均较模型组有不同程度降低,而MMP-9、Smad7蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。结论1、临床研究:柴芪益肝方加减联合常规治疗有降低慢乙肝肝纤维化患者肝脏硬度值、HBV-DNA和HBsAg含量的趋势,且在降低HBsAg定量上优于单纯常规治疗。2、网络药理学:柴芪益肝方可能通过槲皮素、白藜芦醇、山奈酚等活性成分作用于丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白Jun等靶点,以及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、Rap1信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等,调节肝脏炎症反应、氧化应激、细胞增殖、肝再生等生物学过程发挥治疗肝纤维化的作用。3、动物实验研究:柴芪益肝方能显着减轻四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化,其作用机制可能减轻氧化应激反应、抑制NF-κB介导的炎症信号通路,下调炎症细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的释放,减轻肝脏炎症,并通过调节TGF-β/Smad、Wnt3a/β-catenin信号通路,抑制肝星状细胞的活化,调节MMP-9和TIMP-1活性平衡,减少细胞外基质α-SMA、Collagen I、Hyp的合成,促进ECM降解相关。4、“推陈致新”学术思想:导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想核心在于顺应人体本身的正气祛邪之势和气血津液各自的新陈代谢过程,协助人体自然排邪,促进疾病向愈。在肝纤维化治疗上,通过“推陈致新”,加强气化动力、调节气机升降,使病理产物消除的同时,人体气血津液正常化生。
刘皎皎[4]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中研究说明目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
陈乞[5]（2021）在《地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的作用及机制研究》文中认为背景和目的:慢性乙型肝炎相关肝癌发病率及病死率逐年上升。目前肝癌发病机制虽有多种假说,但确切机制至今尚未明确是其妨碍提高防治水平的关键科学问题。多年来防治肝癌的策略主要集中于抗病毒和肝癌细胞本身,忽略了人体内在宿主因素的影响。随着肝癌微环境概念的提出,其作为影响肝癌发生发展的关键因素,逐渐引起研究者的重视。慢性肝病的肝脏炎症和纤维化形成的异常肝再生微环境促进肝癌的发生发展。因此研究通过改善肝再生微环境降低肝癌发生,抑制其进展及转移,具有极大的临床参考价值和深远的科学意义。本文结合临床试验和体外实验两部分,旨在探讨地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的作用及机制:第一部分,观察地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生率及发生风险的影响。第二部分,揭示共培养条件下TGF-β1活化肝星状细胞LX2与EMT/MET失衡的相关机制,分析其对肝癌细胞HCCLM3增殖、凋亡和侵袭能力的影响,探讨地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境、调控EMT/MET失衡和TGF-β/Smad信号通路紊乱以防治肝癌发生发展的机制。方法:1.本试验通过对前期完成的针对HBeAg阴性慢乙肝的随机对照临床试验（中国临床试验注册中心注册号:Chi CTR-TRC-12002962）的单用地五养肝胶囊或单用恩替卡韦或二者联用治疗时间达到48周的患者,进行长达108月前瞻性随访观察（恩替卡韦随访期间不停药）,每6个月检测患者血常规、肝肾功能、凝血功能、乙肝两对半定量、血清HBV DNA水平和甲胎蛋白（AFP）。主要观察评价指标:观察随访期间终点事件肝癌的发生率。次要观察指标:观察随访期间慢乙肝患者生化学及病毒学应答。其中,肝癌累积发病率采用使用乘积限法（Kaplan-Meier）统计,并通过时序检验（log-rank）方法进行比较。2.体外实验通过建立TGF-β1诱导激活的人肝星状细胞LX-2与人肝癌细胞株HCCLM3的共培养模型,模拟肝癌的肝再生微环境。实验分为LX2对照组（LX2-NS）、共培养模型组（Co-culture model）、共培养DWYG组（Co-culture DWYG）,并给予地五养肝胶囊含药血清进行干预,通过CCK-8、流式细胞术、Transwell侵袭实验等细胞生物学方法观察共培养条件下活化人肝星状细胞LX2对肝癌细胞HCCLM3增殖、凋亡、侵袭能力的影响,通过Western Blotting、q RT-PCR等分子生物学方法研究共培养条件下活化人肝星状细胞LX2与EMT/MET失衡的机制,分析这一过程中TGF-β/Smad信号通路的Smad2、Smad3、TβRI、Smad7等m RNA和蛋白表达规律,探讨地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境、调控EMT/MET失衡和TGF-β/Smad信号通路紊乱以防治肝癌发生发展的机制。结果:（1）入组基线资料及随访时间比较:对符合纳入标准的170例患者随机分为三组,其中A组为地五养肝胶囊治疗组（56例）,口服地五养肝胶囊;B组为地五养肝胶囊联合恩替卡韦治疗组（57例）,同时应用地五养肝胶囊和恩替卡韦;C组为恩替卡韦对照组（57例）,口服恩替卡韦,对治疗周期达到48周的患者进行108月随访。入组时各组患者在年龄、性别、血常规（包括中性粒细胞NEU、淋巴细胞LYM、中性粒细胞与淋巴细胞比值NLR以及血小板计数PLT）、PT国际标准化比值INR、肝功能包括（ALT、AST、GGT、ALB、TP、TBIL）及血清HBV-DNA水平无显着性差异（P>0.05）。随访从2012年1月1日至2021年1月11日,共随访108个月,平均随访时间84.03个月,中位随访时间94.00个月。地五养肝胶囊组的平均随访时间和中位随访时间分别为90.75个月、99.00个月,地五养肝胶囊联合恩替卡韦组的平均随访时间和中位随访时间分别为78.82个月、92.50个月,恩替卡韦组的的平均随访时间和中位随访时间分别为82.78个月、91.00个月。共计随访患者151例,总计失访率为11.18%（19/170）。其中,地五养肝胶囊组完成随访48例,地五养肝胶囊联合恩替卡韦组完成随访50例,恩替卡韦组完成随访53例,三组失访率依次为14.29%（8/56）、12.28%（7/57）、7.02%（4/57）,失访率组间比较无显着差异（P>0.05）。（2）地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者生化学应答的比较:将不同干预方案的三组患者血生化结果进行分析,发现三组组间比较,ALT、AST水平无明显差异（P>0.05）。其他相关ALP、TP、ALB、GELO、TBIL、DBIL、IBIL等生化指标,在三组间比较差异不显着（P>0.05）。三组随访患者血生化指标分别与入组时相比,发现三组随访患者肝功能ALT、AST均较前下降（ALT:23.50±15.40 vs 34.70±17.51,25.96±27.45 vs35.87±18.07,28.18±20.30 vs 40.25±21.20;AST:22.08±5.87 vs 28.72±11.24,23.11±11.17 vs 31.91±11.61,27.57±16.85 vs 33.72±14.35）,差异具有统计学意义（P<0.01）,而ALP、TP、ALB、GELO、TBIL、DBIL、IBIL等生化指标,较前入组时相比无明显差异（P>0.05）。（3）地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒学应答的比较:不同治疗方案的各组患者HBV DNA水平均较入组时明显下降（P<0.05）。HBV DNA水平在随访的三组间组间差异无统计学意义（P>0.05）。各组HBs Ag水平分别与入组时相比,三组HBs Ag水平较前明显降低（P<0.05）。随访结果显示,三组患者中HBs Ag下降>1500 IU/ml依次为34.21%（13/38）、35.71%（10/28）、28.57%（8/28）,经统计学分析三者差异无意义（P>0.05）。（4）地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝癌累积发病率影响:随访至108月,采用Kaplan-Meier（乘积限法）法绘制肝癌发病生存曲线,并计算地五养肝胶囊组、地五养肝胶囊联合恩替卡韦组、恩替卡韦组随访发生肝癌事件的累积发病率依次为0%（0/48）、2%（1/50）、11.32%（6/53）,然后采用时序检验Log Rank（Mantel-Cox）进行分析检验,结果显示:三组患者肝癌累积发病率具有差异（P<0.05）。其中,地五养肝胶囊组肝癌累积发病率（0%）明显低于恩替卡韦阳性对照组（11.32%）（P<0.05）。地五养肝胶囊联合恩替卡韦组肝癌累积发病率（2%）低于恩替卡韦阳性对照组（11.32%）（P<0.05）。地五养肝胶囊组肝癌发病率（0%）低于地五养肝胶囊联合恩替卡韦组肝癌发病率（2%）,但差异无统计学意义（P>0.05）。提示相对于单独应用恩替卡韦抗病毒治疗,单用地五养肝胶囊或联合应用恩替卡韦均可显着降低HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝癌发病率。（5）TGF-β1诱导LX2活化以及LX2/HCCLM3共培养体系中LX2的形态学观察:LX2活化前形体不规则呈多边星形,胞突生长不发达,细胞间连接紧密;经TGF-β1（10ng/ml）诱导激活后,细胞体积增大,胞突伸展,细胞间连接疏松,细胞增殖速度加快;与人肝癌细胞HCCLM3共培养后LX2胞伪足更加伸展,呈拉伸状两极生长,细胞增殖明显增快。（6）筛选DWYG含药血清最佳给药浓度:采用CCK-8法检测不同浓度DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3增殖能力的影响。实验结果显示:与对照组相比,随着5%、10%、15%、20%等不同含药血清浓度的升高,各组细胞测得的A450值逐渐下降,HCCLM3细胞增殖活力明显下降（P<0.01）,细胞增殖抑制率逐渐增高（P<0.01）,选取10%为最佳实验用血清含药浓度。（7）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3增殖的影响:（1）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3增殖的影响:与M3对照组A450值（0.69±0.03）相比,共培养模型组（0.75±0.01）HCCLM3细胞增殖活力增强（P<0.01）。与M3对照组A450值（0.69±0.03）相比,共培养DWYG组（0.65±0.01）HCCLM3细胞增殖活力下降（P>0.05）。与共培养模型组A450值（0.75±0.01）相比,共培养DWYG组（0.65±0.01）HCCLM3细胞增殖活力显着降低（P<0.01）。由此可见,共培养模型组HCCLM3增殖率（111.45%）,显着高于M3对照组细胞增殖率（100%）,而共培养DWYG组HCCLM3细胞增殖率（90.77%）显着低于共培养模型组（111.45%）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可能促进肝癌细胞HCCLM3的增殖,DWYG含药血清可能抑制LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3增殖。（2）LX2/HCCLM3共培养体系中LX2的增殖:与LX2对照组（0.62±0.02）相比,共培养模型组（0.71±0.02）LX2细胞增殖活力显着增加（P<0.01）。与LX2对照组（0.62±0.02）相比,共培养DWYG组（0.63±0.01）LX2细胞活力无显着性差异（P>0.05）。与共培养模型组（0.71±0.02）相比,共培养DWYG组（0.63±0.01）LX2细胞增殖能力下降（P<0.01）。与LX2对照组（100%）相比,共培养模型组具有更高细胞增殖率（120.35%）。与共培养模型组（120.35%）相比,共培养DWYG组LX2细胞增殖率（90.77%）显着下降。提示LX2/HCCLM3共培养体系可能促进人肝星状细胞LX2的增殖,DWYG含药血清具有抑制LX2/HCCLM3共培养体系中LX2增殖的作用。（8）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3及LX2两种细胞凋亡的影响:（1）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系HCCLM3细胞凋亡的影响:根据流式细胞仪检测结果显示,与M3对照组（7.52±0.17）相比,共培养模型组（6.23±0.54）细胞凋亡率明显下降（P<0.01）。与M3对照组（7.52±0.17）相比,共培养DWYG组（24.02±0.25）细胞凋亡率显着升高（P<0.01）。与共培养模型组（6.23±0.54）相比,共培养DWYG组（24.02±0.25）细胞凋亡率显着升高（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系抑制HCCLM3的凋亡,而DWYG含药血清可促进LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3的凋亡。与M3阴性对照组（6.23±0.54）相比,M3DWYG组（24.02±0.25）细胞凋亡率显着升高（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系抑制HCCLM3的凋亡,而DWYG含药血清可促进LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3的凋亡。（2）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系LX2细胞凋亡的影响:与LX2对照组（6.37±0.32）相比,共培养模型组（5.15±0.29）凋亡率明显下降（P<0.01）。与LX2对照组（6.37±0.32）相比,共培养DWYG组（7.36±0.37）细胞凋亡升高（P<0.01）。与共培养模型组（5.15±0.29）相比,共培养DWYG组（7.36±0.37）细胞凋亡显着升高（P<0.01）。表明LX2/HCCLM3共培养体系可一定程度上抑制LX2细胞的凋亡,DWYG含药血清可减弱该抑制作用从而促进LX2/HCCLM3共培养体系中人肝星状细胞LX2的凋亡。（9）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系中HCCLM3侵袭能力的影响:与M3对照组（104.00±4.18）相比,共培养模型组（148.80±4.09）HCCLM3侵袭能力明显增强,差异具有统计学意义（P<0.01）。与M3对照组（104.00±4.18）相比,共培养DWYG组（78.00±6.60）侵袭能力下降（P<0.01）。与共培养模型组（148.80±4.09）相比,共培养DWYG组（78.00±6.60）细胞侵袭力显着下降（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可增强HCCLM3侵袭能力,而DWYG含药血清可降低由共培养体系诱导的高HCCLM3侵袭能力。（10）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系LX2细胞EMT相关m RNA的表达的影响:采用RT-PCR检测技术检测EMT相关E-cadherin、Vimentin m RNA的表达,统计结果显示:与LX2对照组相比,共培养模型组E-cadherin m RNA的表达下降（P<0.01）,Vimentin m RNA表达明显升高（P<0.01）。与LX2对照组相比,共培养DWYG组E-cadherin m RNA的表达增加（P<0.01）,Vimentin m RNA的表达无显着性差异（P>0.05）。与共培养模型组相比,共培养DWYG组E-cadherin m RNA的表达明显增加（P<0.01）,Vimentin m RNA的表达明显降低（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可明显促进LX2细胞Vimentin m RNA的表达,抑制E-cadherin m RNA的表达,而DWYG含药血清则促进LX2/HCCLM3共培养体系中LX2细胞E-cadherin m RNA的表达,抑制Vimentin m RNA表达。（11）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系LX2细胞EMT和TGF-β/Smad信号通路相关m RNA的表达的影响:通过实验检测LX2细胞TGF-β/Smad信号通路相关Smad2、Smad3、TβRI、Smad7 m RNA的表达情况,结果分析显示:与LX2对照组相比,共培养模型组Smad2、Smad3、TβRI m RNA的表达升高,Smad7 m RNA表达下降（P<0.01）。与LX2对照组相比共培养DWYG组TβRI m RNA的表达下降（P<0.01）,Smad7 m RNA表达上升（P<0.01）,Smad2、Smad3m RNA表达下降（P>0.05）。与共培养模型组相比,共培养DWYG组Smad2、Smad3、TβRI m RNA的表达下降（P<0.05）,Smad7 m RNA表达上升（P<0.05）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可明显促进LX2细胞Smad2、Smad3、TβRI m RNA的表达,降低Smad7 m RNA的表达,而DWYG含药血清则可促进LX2/HCCLM3共培养体系LX2细胞Smad7 m RNA的表达,抑制Smad2、Smad3、TβRIm RNA表达。（12）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系EMT相关蛋白的表达的影响:与LX2对照组相比,共培养模型组E-cadherin蛋白的表达下降（P<0.01）,Vimentin蛋白表达明显升高（P<0.01）。与LX2对照组相比,共培养DWYG组E-cadherin蛋白的表达增强（P<0.01）,Vimentin蛋白的表达无显着性差异（P>0.05）。与共培养模型组相比,共培养DWYG组E-cadherin蛋白的表达增加（P<0.01）,Vimentin蛋白的表达降低（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可明显促进LX2细胞Vimentin蛋白的表达,抑制E-cadherin蛋白的表达,而DWYG含药血清则促进LX2/HCCLM3共培养体系E-cadherin蛋白的表达,抑制Vimentin蛋白表达。（13）DWYG含药血清对LX2/HCCLM3共培养体系TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达的影响:通过实验检测LX2细胞TGF-β/Smad信号通路相关Smad2、Smad3、TβRI、Smad7蛋白的表达情况,结果分析显示:与LX2对照组相比,共培养模型组Smad2、Smad3、TβRI蛋白的表达升高,Smad7蛋白表达下降（P<0.01）。与LX2对照组相比,共培养DWYG组Smad2、Smad3、TβRI蛋白的表达下降,Smad7蛋白表达上升（P<0.01）。与共培养模型组相比,共培养DWYG组Smad2、Smad3、TβRI蛋白的表达下降,Smad7蛋白表达上升（P<0.01）。提示LX2/HCCLM3共培养体系可明显促进LX2细胞Smad2、Smad3、TβRI蛋白的表达,降低Smad7蛋白的表达,而DWYG含药血清则可促进LX2/HCCLM3共培养体系LX2细胞Smad7蛋白的表达,抑制Smad2、Smad3、TβRI蛋白表达。结论:（1）根据170例地五养肝胶囊治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎RCT临床试验资料,随访至108月,单用地五养肝胶囊组与单用恩替卡韦组和联合用药组在生化学应答、病毒学应答方面疗效相当。单用地五养肝胶囊或者联用恩替卡韦能显着降低肝癌发病率。（2）构建的活化的LX2与HCCLM3共培养体系模拟的肝癌肝再生微环境可促进LX2和HCCLM3增殖活力,抑制LX2和HCCLM3凋亡,增强HCCLM3细胞侵袭能力,其机制可能通过激活TGF-β/Smad信号通路促进EMT。DWYG含药血清能显着抑制共培养体系中的LX2和HCCLM3增殖,促进LX2和HCCLM3凋亡,降低HCCLM3细胞侵袭能力,其机制可能是通过抑制TGF-β/Smad信号通路过度激活、调节EMT/MET失衡,改善肝癌肝再生微环境,发挥防治肝癌发生发展的作用。
曹献[6]（2021）在《肝宁方对小鼠肝癌癌前病变炎症微环境影响的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:肝宁方在实际临床应用中,对肝病患者具有良好的治疗效果,具有研究价值和意义,本研究目的是通过研究肝宁方对二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DEN）联合四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导建立原发性肝癌癌前病变小鼠模型炎症微环境的影响,以期阐明肝宁方对肝癌癌前病变的防治作用机制。方法:60只周龄6-8周,重量为（18±22）g的KM雄性小鼠,适应性饲养一周后,随机分为四组（15只）:对照组、模型组、肝宁方组、护肝片组。除对照组,其余各组进行CCl4溶液灌胃和DEN腹腔注射联合造模,同时每天进行药物灌胃。于16周末（肝癌癌前病变期）将小鼠进行禁食取材,眼眶采血,摘取脾脏、肝脏。记录各组间肝的外观、癌前结节的数目及大小;称量肝脏、脾脏、体重;检测小鼠血清肝功能ALT、AST、GGT、TBIL水平;肝脏病理检查;酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测血清中小鼠血清IL-6、IL-1β、AFP、TNF-α、GPC-3、TSGF和Ki67含量;蛋白质印迹法（Western Blot,WB）检测TLR4、NF-κB蛋白表达。结果:1.一般情况:与对照组相比,模型组、肝宁方组、护肝片组在造模第4周开始出现进食量减少,精神萎靡,掉毛,急躁易怒等表现,第8周部分出现腹水,尾部出现皮下出血点,行动迟缓。与模型组相比,肝宁方组和护肝片组程度均好于模型组,一般状态好。2.体重指数:与对照组相比,模型组、肝宁方组、护肝片组体重显着下降（P<0.01）;与模型组相比,肝宁方组、护肝片组体重显着增加（P<0.05）;肝脏指数、脾脏指数:与对照组相比,模型组、肝宁方组、护肝片组肝脏指数和脾脏指数显着增加（P<0.01）,与模型组相比,肝宁方组肝脏指数和脾脏指数显着下降（P<0.01）,护肝片组肝脏指数和脾脏指数下降（P<0.05）。3.病理:小鼠肝脏形态,模型组小鼠肝脏组织质地粗糙,色泽暗沉,表面密布大小不等白色增生结节（0.2-3cm）肉眼可见,与模型组相比,肝宁方组和护肝片组,结节分布密度低,直径小,肝脏色泽较好。肝组织HE染色,模型组小鼠肝细胞出现水肿、坏死,成巢状,细胞核出现核异型性（核大、双核、多核）,细胞密度增高,汇管区间质增生,纤维组织增多;结节包膜明显,与周边肝脏组织界限清楚,肝小梁结构不规则。与模型组相比,肝宁方组细胞变性坏死程度轻,纤维组织增生程度较轻,细胞较少出现核异型,护肝片介于两者间。4.肝功能:与对照组相比,模型组、肝宁方组、护肝片组肝功能ALT、AST、GGT、TBIL显着升高（P<0.01）,与模模型组相比,肝宁方组肝功能ALT、AST、GGT、TBIL显着降低（P<0.01）,护肝片组肝功能ALT、AST、GGT、TBIL降低（P<0.05）。5.炎症因子:与对照组相比模型组、肝宁方组、护肝片组IL-6、IL-1β、TNF-α显着升高（P<0.01）,与模型组相比肝宁方组IL-6、IL-1β、TNF-α水平显着降低（P<0.01）,护肝片组IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低（P<0.05）。6.肿瘤相关因子:与对照组相比模型组、肝宁方组、护肝片组AFP、GPC-3、TSGF和Ki67显着增高（P<0.01）,与模型组相比肝宁方组、护肝片组AFP、GPC-3、TSGF和Ki67显着降低（P<0.05）。7.与对照组相比模型组、肝宁方组、护肝片组TLR4、NF-κB蛋白表达显着增加（P<0.01）,与模型组相比,肝宁方和护肝片组TLR4、NF-κB蛋白表达显着下降（P<0.05）。结论:1.肝宁方对DEN诱导的小鼠肝癌癌前病变有抑制作用2.肝宁方可抑制TLR4、NF-κB的表达,改善肝癌癌前病变的炎症微环境,其可能通过TLR4/NF-KB信号通路发生作用。
潘志华[7]（2021）在《LIM激酶1核定位促进肝细胞癌进展及抗EGFR治疗耐受的机制研究》文中提出研究背景和目的:肝细胞癌（HCC）是一种常见的消化系统恶性肿瘤,其病死率在世界范围内占恶性肿瘤第二位。尽管新兴的分子靶向和免疫治疗已经被应用于肝细胞癌,但治疗效果仍然有限。了解肝细胞癌进展分子机制和寻找新治疗策略的需求仍然迫切。方法:从癌症基因组图谱数据库（TCGA public database）中筛选出LIM激酶1（LIMK1）,通过免疫组织化学染色（IHC）、免疫荧光染色（IF）和western blot实验检测LIMK1在肝细胞癌患者标本和肝细胞癌细胞系中的表达情况,分析LIMK1的表达水平与亚细胞定位与肿瘤分期、转移和预后等临床病理参数之间的关系。分别过表达和干扰LIMK1在肝细胞癌细胞核中的表达,应用平板克隆实验、transwell体外侵袭实验、CCK8细胞增殖实验和划痕愈合实验来观察核内LIMK1对肝细胞癌体外侵袭表型的影响。通过生物信息学分析、western blot实验、免疫荧光染色、细胞免疫共沉淀实验（Co-IP）、染色质免疫共沉淀实验（ChIP）、双荧光素酶报告实验和荧光实时定量PCR（qRT-PCR）实验分析研究LIMK1在肝细胞癌细胞中核定位及核内功能的分子机制。应用western blot实验、免疫荧光染色（IF）、裸鼠皮下成瘤实验、裸鼠尾静脉注射肺定植实验和免疫组织化学染色（IHC）研究西妥昔单抗（cetuximab）在LIMK1核定位和肝细胞癌进展中的作用。结果:LIMK1在肝细胞癌组织中的表达明显高于邻近的非肝细胞癌组织。LIMK1在肝细胞癌组织中的核阳性率高于邻近的非肝细胞癌组织,而在肝细胞癌组织中浆阳性率低于邻近的非肝细胞癌组织。生存分析结果表明肝细胞癌组织中相比于总的LIMK1水平和浆的LIMK1水平,只有核LIMK1表达水平与患者预后相关。体外功能实验研究表明核内LIMK1促进肝细胞癌细胞体外生长、侵袭和迁移。生物信息学分析结合体外细胞水平验证证实表皮生长因子（EGF）促进LIMK1核定位并发挥促肿瘤生长侵袭的作用,LIMK1与p-ERK相互作用协同入核。染色质免疫共沉淀实验（ChIP）和双荧光素酶报告实验证实核定位后LIMK1通过转录激活c-Myc发挥其核内功能。Western blot实验和荧光实时定量PCR（qRT-PCR）表明被LIMK1转录激活的c-Myc通过进一步激活下游癌症相关基因发挥促肿瘤的作用。体内外实验证实靶向表皮生长因子受体（EGFR）的抗体西妥昔单抗通过抑制LIMK1核定位进而发挥抑制肿瘤进展的作用。结论:在表皮生长因子EGF作用下LIMK1与p-ERK相互作用协同入核。EGFR抑制剂西妥昔单抗通过抑制LIMK1核定位进而抑制肝细胞癌发展,为临床LIMK1核定位肝细胞癌患者治疗提供新的治疗思路。
钟庭燕[8]（2021）在《基于NF-κB信号通路探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的保护机制》文中认为目的:探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的疗效及可能的作用机制。方法:用以下4种干预手段干预急性肝衰竭大鼠,通过检测各组大鼠肝功能、病理组织、NF-κB、炎症因子以及生长因子来探讨此4种干预手段对急性肝衰竭大鼠的保护机制。1、制备脂肪间充质干细胞:提取、培养脂肪间充质干细胞（ADSCs）,提纯、传代,取第三代ADSCs用于流式细胞仪及免疫荧光鉴定;以及用于E、F组干预治疗。2、分组造模:60只SD雄性大鼠,随机平分为6组,分别为正常组（A组）、模型组（B组）、复方甘草酸苷组（C组）、茵陈四苓颗粒组（D组）、脂肪间充质干细胞组（E组）、茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞组（F组）。实验开始,A组予以5ml生理盐水腹腔注射,24h后再次等量注射;其余各组腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）300mg/kg,24h后再次等量注射。于第一次腹腔注射后:A组:等量生理盐水灌胃、每天2次;B组:等量生理盐水灌胃、每天2次;C组:复方甘草酸苷片15mg/kg灌胃、每天2次;D组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次;E组:等量生理盐水灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞（ADSCs）悬液约1ml（1.0×106个）;F组:茵陈四苓颗粒1.5g/kg灌胃、每天2次,尾静脉注射脂肪间充质干细胞（ADSCs）悬液约1ml（1.0×106个）。除E、F组外各组尾静脉注射1ml完全培养基。3、检测:各组第二次腹腔注射48h后麻醉大鼠,腹主动脉采血,取新鲜肝组织。检测ALT、AST、TBIL;HE染色观察肝组织病理;酶联免疫吸附法（ELISA）法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及生长因子HGF、VEGF;免疫组化检测肝组织NF-κB。结果:1、成功提取、培养、传代脂肪间充质干细胞,第3代细胞表现为长梭形、旋涡样生长。免疫荧光鉴定提示ADSCs纯度达到90%以上;流式细胞仪鉴定提示:第3代ADSCs表面分子高表达CD44（75.69%）、CD90（99.84%）,低表达CD45（0.02%）,符合脂肪间充质干细胞鉴定特点。2、大鼠肝功能检测结果:ALT、AST、TBIL水平:模型组（B组）较正常组（A组）明显升高;各干预组（C、D、E、F组）较B组有所降低,其中F组降低更显着（P<0.05）。3、大鼠肝脏病理切片结果:B组肝组织损伤最为严重,肝细胞弥漫性坏死、水肿,大量炎性细胞浸润,肝小叶结构紊乱,造模成功;各干预组肝脏损伤程度较B组有所减轻,且有新生的肝细胞;其中F组损伤程度更小。4、NF-κB检测结果:肝脏组织中NF-κB细胞数目:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所降低,其中F组降低更明显（P<0.05）。5、炎症因子检测结果:TNF-α、IL-1β、IL-6水平:B组较A组明显升高,各治疗组较B组有所下降,其中F组下降更明显（P<0.05）。6、生长因子检测结果:HGF、VEGF水平:B组较A组明显升高,各治疗组均较B组升高,E组较C、D组明显升高（P<0.05）,F组较C、D、E组上升更显着（P<0.05）;结论:1、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能有效降低肝功能水平、缓解肝脏病理损伤;2、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能降低NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,有效抑制炎症通路;3、茵陈四苓颗粒组、ADSCs组能上调肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达,有效促进肝细胞的增生;4、茵陈四苓颗粒与脂肪间充质干细胞（ADSCs）对急性肝衰竭大鼠的保护机制可能是通过抑制炎症信号通路（NF-κB）及其下游炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达,进而保护肝脏功能;也可能是通过上调HGF、VEGF的表达,促进肝细胞的增生,发挥对急性肝衰竭大鼠的保护作用。
陈琼锋[9]（2021）在《磷脂酰乙醇胺结合蛋白4对肝癌细胞生物行为学的影响及其机制研究》文中研究说明背景与目的:原发性肝癌是临床常见的一种恶性肿瘤,其中75%至85%的原发性肝癌为肝细胞癌。肝细胞癌的主要危险因素是肝炎病毒感染,由于全球对肝炎病毒的传染控制力度加大,使其发病率保持稳定,但肝癌的死亡率却在逐年上升,主要原因是分子机制多样性和不确定性,难以实施靶向治疗。Akt作为肿瘤生长的重要分子,受促癌因子和癌基因的调控,他的生物学功能与mTORC1和mTORC2的参与密不可分。一方面,Akt的许多生物学功能由mTORC1介导,后者磷酸化S6K1,调节蛋白质合成;另一方面,Akt与血清葡萄糖激酶（SGK）和蛋白激酶C（PKC）一样作为底物,其活性受mTORC2调节。研究发现,PEBP4在许多癌组织中上调,并发挥促癌作用;另外,有报道显示PEBP4与Akt结合并参与其活性调节。然而,PEBP4与Akt-mTOR在肝癌中的相互作用尚未见报道,故成为本课题的研究重点,结果将为肝细胞癌的治疗提供分子靶点。实验方法:1.观察PEBP4对肝癌细胞生物行为学的影响（1）免疫组化:检测肝癌患者癌组织和癌旁组织中PEBP4的表达;（2）Western blot（WB）和qPCR:比较正常肝细胞（LO2）和恶性程度相对不同的肝癌细胞系,包括低恶性程度:MHCC97L,中度恶性程度:He PG2,SMMC-7721,高恶性程度:MHCC97H和HCCLM3中PEBP4的表达情况;（3）构建稳定细胞系:用sh RNA-PEBP4和PCMV6-PEBP4分别敲低MHCC97H细胞和过表达MHCC97L细胞中的PEBP4,WB和qPCR验证细胞系的成功构建;（4）通过CCK8,克隆形成实验,检测敲低和过表达PEBP4对肝癌细胞生长能力的影响;（5）采用划痕实验,Transwell检测敲低和过表达PEBP4对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;（6）皮下植瘤实验:在裸鼠皮下（腋窝）接种肝癌细胞,体内观察敲低和过表达PEBP4对肝癌细胞生长能力的影响;（7）肺转移模型构建:通过裸鼠尾静脉接种肝癌细胞,检测敲低和过表达PEBP4对肝癌细胞转移能力的影响。2.观察PEBP4对Akt/mTOR信号通路的影响（1）WB检测敲低和过表达PEBP4细胞中Akt/mTOR信号通路的变化;（2）IGF-1刺激敲低PEBP4的MHCC97H细胞,WB检测Akt/mTOR信号通路的变化;（3）Akt腺病毒（Akt-S473D）感染敲低PEBP4的MHCC97H细胞,WB检测Akt/mTOR信号通路的变化;（4）Akt抑制剂MK-2206处理过表达PEBP4的MHCC97L细胞,WB检测Akt/mTOR信号通路的变化。3.探讨PEBP4、Akt/mTOR信号通路在肝癌细胞生物行为学中的作用（1）Akt-S473D感染敲低PEBP4的MHCC97H细胞,采用CCK8、Transwell分别检测肝癌细胞的生长、迁移和侵袭能力;（2）Akt抑制剂MK-2206处理过表达PEBP4的MHCC97L细胞,CCK8、Transwell分别检测肝癌细胞的生长、迁移和侵袭能力。4.观察PEBP4对EMT的影响（1）WB检测敲低和过表达PEBP4细胞系中EMT的变化;（2）免疫荧光检测敲低和过表达PEBP4细胞系中E-cadherin和N-cadherin的变化;（3）IGF-1刺激敲低PEBP4的MHCC97H细胞,WB检测EMT的变化;（4）Akt-S473D感染敲低PEBP4的MHCC97H细胞,WB和免疫荧光检测EMT的变化;（5）Akt抑制剂MK-2206处理过表达PEBP4的MHCC97L细胞,WB和免疫荧光检测EMT的变化。5.探讨PEBP4、Akt、mTOR之间的关系（1）免疫共沉淀检测MHCC97H细胞中PEBP4、Akt、mTOR之间的关系;（2）用N-myc-PEBP4转染HEK293T细胞,免疫共沉淀方法检测PEBP4、Akt、mTOR之间的关系;（3）在敲低PEBP4细胞系中,采用免疫共沉淀检测PEBP4、Akt、mTOR之间的关系;（4）siRNA-mTOR转染HEK293T细胞后,采用免疫共沉淀检测Akt、mTOR、PEBP4之间的关系。结果:1.PEBP4对肝癌细胞生物行为学的影响（1）免疫组化结果显示,癌旁组织中PEBP4表达偏低,癌组织中PEBP4表达偏高;（2）WB和qPCR结果表明,与正常肝细胞（LO2）和恶性程度低的肝癌细胞（MHCC97L）比较,PEBP4在恶性程度高的肝癌细胞（MHCC97H,HCCLM3）中的表达要高;（3）CCK8和克隆形成实验表明,敲低PEBP4使肝癌细胞较对照组的生长能力减弱,而过表达PEBP4使肝癌细胞生长能力增强;（4）敲低PEBP4后,划痕实验和Transwell结果显示肝癌细胞的迁移和侵袭能力减弱,而过表达PEBP4的结果与其敲低相反;（5）皮下移植实验结果表明敲低PEBP4的肝癌细胞在裸鼠体内的生长能力较对照组下降,而过表达PEBP4的结果与其敲低相反;（6）肺转移结果显示:敲低PEBP4的肝癌细胞较对照组在裸鼠肺中形成的结节减少,而过表达PEBP4的结果与其敲低相反。2.PEBP4对Akt/mTOR信号通路的影响（1）与对照组相比,WB结果显示,敲低PEBP4后（a）mTORC2 Ser2481的磷酸化以及mTORC2的底物SGK1、PKCα的磷酸化降低;（b）Akt Ser473和Thr308磷酸化被抑制;（c）Akt调节直接底物RSK2和mTORC1 Ser2448的磷酸化下降;（d）mTORC1介导的p-S6K1表达下降;（e）过表达PEBP4对以上指标的影响结果与敲低PEBP4完全相反;（2）WB结果显示,（a）IGF-1不影响PEBP4的表达;（b）IGF-1不能逆转敲低PEBP4对结果（1）中各指标的影响;（3）Akt-S473D感染敲低PEBP4的MHCC97H细胞后,WB结果发现:（a）Akt-S473D不影响PEBP4的表达;（b）Akt-S473D对PEBP4敲低引起的mTORC2Ser2481磷酸化下调没有影响;（c）Akt-S473D逆转敲低PEBP4对Akt Thr308磷酸化的下调作用;（d）Akt-S473D抵消敲低PEBP4对RSK2和mTOR Ser2448磷酸化的抑制作用;（e）Akt-S473D逆转敲低PEBP4对p-S6K1表达的下调作用。（4）Akt抑制剂MK-2206处理过表达PEBP4的MHCC97L细胞后,WB结果显示:（a）MK-2206对PEBP4的表达没有影响;（b）MK-2206对过表达PEBP4上调mTOR Ser2481、SGK1、PKCα磷酸化没有影响;（c）MK-2206抑制过表达PEBP4对Akt Ser473和Thr308磷酸化的上调作用;（d）MK-2206抑制过表达PEBP4对RSK2和mTOR Ser2448磷酸化的促进作用;（e）MK-2206下调过表达PEBP4对p-S6K1表达的上调作用。3.PEBP4、Akt/mTOR信号通路对肝癌细胞生物行为学的作用（1）CCK8结果显示,Akt-S473D可以部分逆转敲低PEBP4对肝癌细胞生长能力的抑制作用,而MK-2206可以抑制过表达PEBP4对肝癌细胞生长的促进作用;（2）Transwell结果显示,Akt-S473D可以部分逆转敲低PEBP4对肝癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用,而MK-2206可以抑制过表达PEBP4对肝癌细胞迁移和侵袭的促进作用。4.PEBP4对EMT的影响（1）WB结果显示,敲低PEBP4上调E-cadherin的表达,且下调N-cadherin,vimentin和integrin的表达,而过表达PEBP4的结果与其敲低相反;免疫荧光检测结果与WB一致;（2）WB结果证明,IGF-1刺激PEBP4敲低的细胞并不能影响EMT等指的变化;（3）WB和免疫荧光结果显示Akt-S473D可逆转敲低PEBP4对EMT的作用,且MK-2206可抵消过表达PEBP4对EMT的作用。5.PEBP4、Akt、mTOR之间的关系（1）免疫共沉淀结果显示,无论是在MHCC97H细胞中还是在N-myc-PEBP4转染HEK293T细胞中,都能证明PEBP4,Akt,mTOR之间存在相互作用;（2）在敲低PEBP4细胞系中,免疫共沉淀结果显示,PEBP4与Akt和mTOR之间的相互作用消失,但Akt和mTOR之间的关系仍然存在;（3）siRNA敲除mTOR后,免疫共沉淀结果显示,Akt与PEBP4之间的关系存在,而PEBP4与mTOR之间的关系消失。结论:本实验主要研究PEBP4对肝细胞癌的作用。结果表明,1.PEBP4促进肝癌细胞生物学行为;2.PEBP4促进Akt/mTOR信号通路的活化,籍此调节肝癌细胞的生物行为学;3.PEBP4除了通过Akt发挥功能外,还参与调节其它信号分子,其可能的靶点是mTORC2;4.PEBP4,Akt,mTOR之间存在相互作用,发挥生物学功能。
沈皓[10]（2021）在《VEGFA在肝再生及非酒精性脂肪性肝病中的功能及机制研究》文中提出第一部分肝细胞中的Gata3/Ramp2调控PEDF/VEGFA分子流影响肝窦内皮细胞再生的研究研究背景与目的肝脏部分切除是治疗肝脏肿瘤的主要方法之一,正常肝脏组织的再生能力是实施肝切除术的生物学基础。但由于大部分肝脏肿瘤在发现时已经发展至中晚期,肿瘤累及的肝段多,肝脏整体功能较差,残余肝段无法代偿失去的肝组织,术后肝衰的风险始终存在。如果能有效的加速肝切除术后的残肝再生,就可以扩大肝切除的适应症,同时降低术后肝衰的发生率,提高手术的安全性,对肝癌的手术治疗具有重要的意义。肝再生是一个肝脏内所有细胞都参与的复杂过程。在肝再生早期,肝细胞先增殖形成细胞簇,其后肝窦内皮细胞（LSEC）,星状细胞等非实质细胞才开始增殖。LSEC增殖迁移进入肝细胞簇形成血管,为新生的肝细胞提供新陈代谢的条件,星状细胞则分泌细胞外基质,重新构成肝脏的微观结构。我们前期研究发现,再生早期肝细胞中促血管生成因子血管内皮生长因子A（VEGFA）表达上调,同时抑制血管生成因子色素上皮衍生因子（PEDF）表达下调;VEGFA-promoter GPF小鼠显示,肝切除术后肝再生早期阶段,肝细胞内的VEGFA表达增加;经VEGFA△hep和PEDFhep小鼠证实,肝再生过程中肝细胞可以通过上调VEGFA以及下调色素上皮衍生因子（PEDF）来促进LSEC增殖,进而调控肝再生过程。本课题拟在此基础上,寻找肝细胞中VEGFA的上游调控相关分子,深入探讨肝细胞调控LSEC影响肝再生的分子机制,以寻找关键靶点和潜在药物。研究方法1、野生型小鼠和肝细胞特异性敲除Met（MetΔhep）小鼠行70%肝切除术后,分选术后早期的肝细胞行转录组测序,对比分析肝再生早期肝细胞中影响血管生成的差异基因并进行PCR验证;2、通过基因沉默或基因过表达技术,将上述差异基因导入小鼠肝细胞系AML-12中,并与内皮细胞系SVEC-40或原代LSEC共培养,进一步筛查验证肝细胞中调控内皮细胞增殖的相关基因;3、通过CRISPR-Cas9联合腺相关病毒技术构建肝细胞特异性过表达或抑制相关基因的基因编辑小鼠,并以其为基础,探索相关基因在两种肝再生模型（70%肝切除术模型和联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）模型）中的作用。4、研究相关基因影响肝再生的作用机制,并寻找可能的干预靶点和方法。5、通过肝类器官培养体系,探讨在患者来源的肝脏类器官中干预相关靶点的可行性。研究结果1、野生型小鼠和MetΔhep小鼠行肝切除术后早期阶段的肝细胞转录组测序分析影响血管生成的相关差异基因,结合PCR验证及肝细胞和内皮细胞共培养实验,筛查发现了肝细胞中Gata3下调或Ramp2上调可促进内皮细胞的增殖和成环,即提示Gata3和Ramp2可能是肝细胞调控内皮细胞增殖的候选基因。2、构建肝细胞特异性过表达Gata3（Gata3hep）和肝细胞特异性敲除Ramp2（Ramp2Δhep）小鼠行70%肝切除术,发现Gata3hep和Ramp2Δhep不影响再生早期肝细胞增殖但抑制了后期LSEC增殖,降低了肝再生后期的恢复速率,提示Gata3和Ramp2可能是肝再生中肝细胞启动LSEC增殖的分子开关,前者下调和后者上调联合启动了 LSEC再生。3、ALPPS小鼠模型中,肝细胞中内源性的Gata3或Ramp2表达变化也显示出了类似PHx模型中的互补趋势;且Gata3hep-和Ramp2Δhep-ALPPS小鼠显示两者不影响肝细胞增殖,但影响了 LSEC增殖。4、体内外实验表明,回补VEGFA或中和阻断PEDF可以部分解除Gata3hep和Ramp2Δhep对肝再生后期的抑制作用。5、发现患者来源的肝脏类器官中GATA3的表达水平存在差异;与GATA3中、低表达水平组相比,GATA3高表达组的肝脏类器官的条件培养基明显抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖和成环能力;而且,这种相对抑制作用可被PEDF中和性抗体或GATA3的特异性抑制剂K-7174部分解除。结论本研究发现了肝再生进程中Gata3和Ramp2作为肝细胞中的分子开关阀,通过调控VEGFA和PEDF平衡流,影响LSEC的再生启动:即肝再生过程中肝细胞通过下调Gata3和上调Ramp2表达,导致VEGFA生成增多和PEDF减少,启动LSEC增殖影响肝再生。Gata3和Ramp2分别是肝再生的负向和正向调控分子,作为分子开关启动了 LSEC增殖。PEDF中和性抗体或GATA3的特异性抑制剂有望作为一种干预手段,加速肝脏手术后的肝再生,为降低围手术期肝衰风险提供了实验依据。第二部分肝细胞源的VEGFA通过激活肝星状细胞加速非酒精性脂肪性肝病向肝癌转化研究背景与目的随着人类生活习惯的改变以及病毒性肝炎的控制,非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）已经成为最常见的慢性肝病。NAFLD 是多种病理状态的总称,其疾病谱包括单纯性肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎、NAFLD相关性肝纤维化以及NAFLD相关性肝癌（HCC）。目前尚没有有效控制NAFLD病程进展的治疗方法。VEGFA作为体内重要的促血管生成因子,在多种肝病和恶性肿瘤中发挥重要作用。其在NAFLD中的作用尚不十分清楚,一些研究结果间存在矛盾,这可能与研究对象的不典型,NAFLD病程的复杂性以及VEGFA来源的细胞多样性等因素有关。本研究主要探讨VEGFA在NAFLD病程进展中的作用和机制以及其作为NAFLD治疗靶点的可行性。研究方法1、通过西方饮食联合四氯化碳（WD/CC14）诱导的方式,建立NAFLD-HCC转化的小鼠模型,以完整反应NAFLD病程进展。2、采用PCR、Western、组织免疫化学和免疫荧光等多种方法,分析NAFLD-HCC转化小鼠模型中VEGFA的表达和细胞分布变化与NAFLD病程进展的关系。3、根据GEO数据库中NAFLD相关数据,分析肝内VEGFA的表达变化;结合临床上伴有或不伴有NAFLD的肝脏良性肿瘤患者的瘤旁组织,分析其中的VEGFA变化及细胞分布;4、同理构建肝细胞特异性敲除VEGFA（VegfaΔhep）的NAFLD-HCC小鼠模型,探讨肝细胞源的VEGFA在NAFLD病程中发挥作用的具体机制。5、收集临床上NAFLD相关性HCC（NAFLD-HCC）,乙肝病毒相关性HCC（HBV-HCC）和肝血管瘤患者的瘤旁组织,通过分子生物学检测,分析VEGFA在不同病因背景的肝纤维化过程中的作用。6、通过NAFLD患者来源的肝脏类器官与肝星状细胞（HSC）系LX2共培养实验,探讨肝细胞源VEGFA对HSC活化的影响及其对NAFLD治疗的潜在价值。研究结果1、饮食联合药物诱导的小鼠NAFLD模型能较好的反映人类NAFLD进展过程中的不同病理状态。2、在接受饮食和药物诱导的野生型小鼠（WD/CC14-WT）中,肝细胞来源的VEGFA随着NAFLD的进展而逐渐升高;临床上伴有NAFLD的肝脏良性肿瘤患者的瘤旁组织中,肝细胞来源的VEGFA也呈现了类似趋势。3、与WD/CC14-WT小鼠相比,WD/CC14-VegfaΔhep小鼠纤维化程度明显减轻,肿瘤的发生发展受到抑制,但肝脏的脂肪变性程度没有明显差异。4、肝细胞敲除VEGFA可减轻血管内皮功能障碍,抑制HSC激活。5、在NAFLD-HCC患者的癌旁组织中观察到VEGFA与肝纤维化程度相关,但在HBV-HCC患者中,没有观察到这种相关性。6、体外实验证实,来自NAFLD患者的肝细胞类器官的条件培养基可刺激HSC的活化,VEGFA中和性抗体可以阻断这种活化。结论我们的研究发现了肝细胞来源的VEGFA可以促进NAFLD病程中纤维化进展,加速NAFLD向HCC转化,但对脂肪变性过程没有影响。机制上主要通过激活HSC,引起血管内皮功能障碍。VEGFA中和性抗体可阻断该活化,这为NAFLD治疗提供了潜在的靶点。
二、肝细胞生长因子的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝细胞生长因子的研究进展（论文提纲范文）
（1）人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 肝脏发育过程和调控因素 |
| 1.1.1 肝脏的功能和结构 |
| 1.1.2 肝脏发育过程 |
| 1.1.3 调节肝脏发育的信号通路介绍 |
| 1.1.4 肝脏发育过程中的遗传控制 |
| 1.2 体外获得人肝细胞的方法 |
| 1.2.1 分离原代肝细胞及肝脏干细胞 |
| 1.2.2 分化人多能干细胞 |
| 1.2.3 分化人成体干细胞 |
| 1.2.4 转分化人成纤维细胞 |
| 1.3 分化人多能干细胞到肝脏样细胞的方法和应用 |
| 1.3.1 分化方法和进展介绍 |
| 1.3.2 肝脏样细胞的鉴定方法 |
| 1.3.3 肝脏样细胞在疾病模型和药物筛选中的应用 |
| 1.3.4 肝脏样细胞临床应用的局限性和发展方向 |
| 1.4 内胚层祖细胞/肝祖细胞的获得和应用 |
| 1.4.1 体外获得可扩增的内胚层祖细胞 |
| 1.4.2 体外获得可扩增的肝祖细胞 |
| 1.5 化学小分子诱导体系的介绍 |
| 1.6 本课题的研究内容 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器及设备 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 |
| 2.1.3 检测试剂盒 |
| 2.1.4 抗体及小分子 |
| 2.1.5 主要细胞系 |
| 2.1.6 小鼠品系 |
| 2.1.7 常用试剂配方 |
| 2.2 分子生物学及细胞生物学实验方法 |
| 2.2.1 细胞内总RNA的提取和反转录 |
| 2.2.2 实时荧光定量PCR (qRT-PCR) |
| 2.2.3 免疫荧光染色 |
| 2.2.4 FACS流式分析实验 |
| 2.2.5 过碘酸雪夫(PAS)染色 |
| 2.2.6 油红O染色 |
| 2.3 细胞实验方法 |
| 2.3.1 细胞复苏、传代与冻存 |
| 2.3.2 细胞计数 |
| 2.3.3 细胞培养 |
| 2.3.4 干细胞向定型内胚层的分化 |
| 2.3.5 内胚层祖细胞向肝脏样细胞的分化 |
| 2.3.6 Foxa3慢病毒包装及转染 |
| 2.3.7 Foxa3介导的转分化 |
| 2.3.8 化学小分子筛选 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 带有报告基因的人胚胎干细胞系的鉴定 |
| 3.2 诱导人胚胎干细胞向定型内胚层细胞分化 |
| 3.3 内胚层祖细胞的获得和鉴定 |
| 3.4 内胚层祖细胞扩增过程的优化 |
| 3.4.1 去除生长因子严重影响了内胚层祖细胞的增殖 |
| 3.4.2 PKC激活剂恢复了内胚层祖细胞的增殖能力 |
| 3.4.3 PKC激活剂不能恢复SOX17的表达 |
| 3.4.4 CHIR99021对内胚层祖细胞有浓度依赖性作用 |
| 3.4.5 OEM培养的内胚层祖细胞可以维持长期自我更新能力 |
| 3.4.6 OEM-EPCs在Matrigel基质上可维持正常生长 |
| 3.4.7 OEM扩增体系具有可重复性 |
| 3.5 OEM-EPCs具有分化为肝脏样细胞的能力 |
| 3.6 内胚层祖细胞向肝细胞分化过程的优化 |
| 3.6.1 RA显着促进内胚层祖细胞向肝脏样细胞分化的效率 |
| 3.6.2 VX-11e显着促进内胚层祖细胞向肝脏样细胞分化的效率 |
| 3.6.3 RA和VX-11e叠加可将肝脏分化的效率进一步提高 |
| 3.6.4 VX-11e促进早期的肝脏命运决定 |
| 3.6.5 VX-11e在肝脏转分化过程中也有一定促进效果 |
| 3.7 优化后的肝脏分化体系的鉴定 |
| 4 结论 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 答辩决议书 |
（2）HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 鹿茸 |
| 1.1.1 鹿茸的生长 |
| 1.1.2 鹿茸的自然脱落与创伤修复 |
| 1.1.3 鹿茸的再生过程 |
| 1.2 鹿茸的组织形态结构 |
| 1.2.1 茸皮 |
| 1.2.2 间充质组织 |
| 1.2.3 软骨 |
| 1.2.4 骨 |
| 1.3 鹿茸生长的影响因素 |
| 1.3.1 睾酮对鹿茸生长的影响 |
| 1.3.2 EGF对鹿茸生长的影响 |
| 1.3.3 IGF对鹿茸生长的影响 |
| 1.3.4 信号通路对鹿茸细胞的调节 |
| 1.4 HGF和 c-Met基因及其对鹿茸生长的作用机制 |
| 1.4.1 组织的创伤修复 |
| 1.4.2 HGF基因 |
| 1.4.3 c-Met基因 |
| 1.4.4 HGF/c-Met信号通路作用机制 |
| 1.4.5 HGF和 c-Met基因在组织修复的作用机制 |
| 1.5 目的与意义 |
| 1.6 技术路线 |
| 第2章 塔里木马鹿茸HGF基因全长克隆及生物信息学分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 引物设计 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 总RNA的提取 |
| 2.2.2 第一链c DNA的制备 |
| 2.2.3 塔里木马鹿HGF基因全长序列的获取 |
| 2.2.4 生物信息学分析 |
| 2.3 试验结果与分析 |
| 2.3.1 塔里木马鹿茸总RNA的提取 |
| 2.3.2 塔里木马鹿茸HGF基因片段扩增结果 |
| 2.3.3 HGF基因序列比对及同源性分析 |
| 2.3.4 蛋白质结构预测 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 HGF、c-Met基因在损伤塔里木马鹿茸组织中的表达差异 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 引物设计 |
| 3.1.2 试验样品采集 |
| 3.1.3 试验试剂与仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 RNA提取 |
| 3.2.2 反转录为第一链c DNA |
| 3.2.3 标准曲线的制作 |
| 3.2.4 qRT-PCR |
| 3.2.5 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 获取不同处理组鹿茸不同组织RNA |
| 3.3.2 HGF基因在健康与损伤鹿茸不同组织中的表达差异 |
| 3.3.3 HGF基因在损伤鹿茸组织不同生长时期的表达差异 |
| 3.3.4 c-Met基因在健康与损伤鹿茸不同组织中的表达差异 |
| 3.3.5 c-Met基因在损伤鹿茸组织不同生长时期的表达差异 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 HGF、c-Met蛋白在损伤塔里木马鹿茸组织中的表达差异 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验样品 |
| 4.1.2 主要试剂配制 |
| 4.1.3 试验试剂与仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 不同鹿茸组织制作冷冻切片 |
| 4.2.2 冷冻切片免疫组化 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 HGF在鹿茸组织中的表达差异 |
| 4.3.2 c-Met在鹿茸组织中的表达差异 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 结论 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 中西医治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第一节 西医诊断和治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二节 中医药治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二章 柴芪益肝方治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎肝纤维化的临床回顾性研究 |
| 前言 |
| 第一节 临床资料 |
| 第二节 分组与治疗 |
| 第三节 结果分析 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 第三章 基于网络药理学探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的作用机制 |
| 前言 |
| 第一节 资料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论与小结 |
| 第四章 柴芪益肝方对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的作用及机制研究 |
| 前言 |
| 第一节 材料与研究方法 |
| 第二节 指标检测 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（5）地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的临床研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 分组 |
| 1.5 随访及监测指标 |
| 1.6 观察和评价指标 |
| 1.7 安全性评价 |
| 1.8 检验方法 |
| 1.9 试验流程图 |
| 2 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 三组HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者主要基线特征 |
| 3.2 三组HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者失访率比较 |
| 3.3 地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者生化学应答的影响 |
| 3.4 地五养肝胶囊对HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒学应答的影响 |
| 3.5 地五养肝胶囊降低HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝癌发病率 |
| 4 讨论 |
| 4.1 HBeAg阴性慢性乙型肝炎抗病毒治疗的研究进展 |
| 4.2 HBeAg阴性慢乙肝患者存在肝纤维化的异常肝再生微环境是其肝癌发生风险居高不下的重要机制 |
| 4.3 地五养肝胶囊改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的作用 |
| 4.4 地五养肝胶囊改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发病率的作用 |
| 5 小结 |
| 第二部分 体外实验研究地五养肝胶囊对肝星状细胞与肝癌细胞共培养体系中两种细胞的影响及其改善EMT/MET失衡和TGF-β/Smad信号通路紊乱的相关机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 TGF-β1 诱导LX2 活化以及LX2/HCCLM3 共培养体系中LX2的形态学观察 |
| 3.2 筛选DWYG含药血清最佳给药浓度 |
| 3.3 DWYG含药血清对LX2/HCCLM3 共培养体系中两种细胞增殖的影响 |
| 3.4 DWYG含药血清对LX2/HCCLM3 共培养体系中两种细胞凋亡的影响 |
| 3.5 DWYG含药血清对LX2/HCCLM3 共培养体系中HCCLM3侵袭能力的影响 |
| 3.6 DWYG含药血清对LX2/HCCLM3 共培养体系LX2细胞EMT和 TGF-β/Smad信号通路相关m RNA的表达的影响 |
| 3.7 DWYG含药血清对LX2/HCCLM3 共培养体系EMT和TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 肝纤维化的异常肝再生微环境影响肝癌发生发展的作用及其机制 |
| 4.2 地五养肝胶囊改善肝再生微环境防治肝癌发生发展的作用及其机制 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 肝再生信号通路研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间论文发表及参与科研情况 |
| 致谢 |
（6）肝宁方对小鼠肝癌癌前病变炎症微环境影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 中医对肝癌癌前病变的认识与研究 |
| 1.1 肝癌癌前病变的病名 |
| 1.2 肝癌癌前病变的病因病机 |
| 1.3 肝癌癌前的辨证与分型 |
| 1.4 中医药治疗肝癌癌前病变 |
| 2 现代医学对肝癌癌前病变的认识与研究 |
| 2.1 肝癌癌前病变的流行病学 |
| 2.2 肝癌癌前病变的发病机制 |
| 2.3 现代医学对肝癌癌前病变的诊断 |
| 2.4 现代医学对肝癌癌前病变的治疗 |
| 3 肝癌癌前病变的肿瘤微环境 |
| 3.1 肿瘤微环境的定义 |
| 3.2 肿瘤免疫微环境 |
| 3.3 肿瘤炎症微环境 |
| 3.4 中医药调节肿瘤微环境 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试验药物及试剂 |
| 1.2.1 实验药物 |
| 1.2.2 实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物造模方法 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.3.1 小鼠的一般情况 |
| 2.3.2 体重、肝脏指数、脾脏指数 |
| 2.3.3 肝脏病理HE染色 |
| 2.3.4 血清肝功能和肿瘤相关因子检测 |
| 2.3.5 蛋白质印迹法检测肝组织中TLR4、NF-κB蛋白表达 |
| 2.4 统计学处理 |
| 第三部分 研究结果与分析 |
| 3.1 小鼠的一般情况 |
| 3.2 各组小鼠体重变化趋势 |
| 3.3 体重、肝脏指数、脾脏指数变化情况 |
| 3.4 肉眼可见结节大小、数量、分布情况 |
| 3.5 肝脏病理学观察HE染色 |
| 3.6 肝功能 |
| 3.7 血清炎症相关因子与肿瘤相关指标 |
| 3.8 肝脏TLR4、NF-κB表达情况 |
| 第四部分 讨论 |
| 4.1 肝宁方的研究基础 |
| 4.2 肝宁方的药物组成成分及研究现状 |
| 4.3 肝宁方对DEN/CCl4诱发的肝癌癌前病变炎症微环境影响的评价 |
| 4.3.1 肝宁方对小鼠一般情况的影响 |
| 4.3.2 肝宁方对肝脏指数/脾脏指数的影响 |
| 4.3.3 肝宁方对肝功能的影响 |
| 4.3.4 肝宁方对肝脏病理的影响 |
| 4.3.5 肝宁方对肝癌癌前病变相关炎症因子的影响 |
| 4.3.6 肝宁方对肝癌癌前病变相关肿瘤标志物的影响 |
| 4.3.7 肝宁方对肝癌癌前病变TLR4、NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4.4 中西结合防治肝癌及癌前病变的特色与优势 |
| 4.5 不足与展望 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 中医药调节肝癌及癌前微环境中的TLR4/NF-κB信号通路研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（7）LIM激酶1核定位促进肝细胞癌进展及抗EGFR治疗耐受的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 LIMK1核定位与肝细胞癌的发生和不良预后相关 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 结论 |
| 1.5 讨论 |
| 第二章 核内LIMK1体外实验中增强肝细胞癌细胞侵袭表型 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 结论 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 在EGF作用下LIMK1与p-ERK相互作用协同入核 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 结论 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 核内LIMK1通过直接结合c-Myc启动子区域转录激活其表达 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 结论 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 西妥昔单抗通过减弱LIMK1核定位进而抑制肿瘤进展 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.4 结论 |
| 5.5 讨论 |
| 全文讨论 |
| 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词注解 |
| 研究生期间成果 |
| 致谢 |
（8）基于NF-κB信号通路探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的保护机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 脂肪间充质干细胞在急性肝衰竭中的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）磷脂酰乙醇胺结合蛋白4对肝癌细胞生物行为学的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 引言 |
| 1.1 肝癌基本概况 |
| 1.2 PEBP4 概况 |
| 1.2.1 PEBP4 的结构,分布和功能 |
| 1.2.2 PEBP4 在肿瘤中的作用 |
| 1.2.3 PEBP4 参与的信号通路 |
| 1.3 Akt概况 |
| 1.3.1 Akt的结构,生物学功能和调节 |
| 1.3.2 Akt与肿瘤 |
| 1.4 mTOR概况 |
| 1.4.1 mTOR复合物 |
| 1.4.2 mTOR信号通路 |
| 1.4.3 mTOR与肿瘤 |
| 1.5 EMT概况 |
| 1.5.1 EMT特征和功能 |
| 1.5.2 诱导EMT因素和相关信号通路 |
| 1.5.3 EMT与肿瘤 |
| 1.6 本课题研究内容与创新之处 |
| 1.6.1 主要研究内容 |
| 1.6.2 主要创新之处 |
| 第二部分 PEBP4 对肝癌细胞生物行为学的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.1.5 主要试剂配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 免疫组化 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 WB |
| 2.2.4 qPCR检测组织PEBP4的m RNA表达水平 |
| 2.2.5 质粒扩增: |
| 2.2.6 sh-PEBP4 敲低 MHCC97H中 PEBP4,构建敲低 PEBP4 的稳定细胞系 |
| 2.2.7 用PCMV6-PEBP4 过表达MHCC97L中的PEBP4,构建过表达PEBP4 的稳定细胞系 |
| 2.2.8 细胞活力测定 |
| 2.2.9 细胞划痕实验 |
| 2.2.10 克隆形成实验 |
| 2.2.11 Transwell实验 |
| 2.2.12 增殖模型构建(皮下移植模型) |
| 2.2.13 肺转移模型构建 |
| 2.2.14 形态学观察(肺部组织HE染色) |
| 2.2.15 统计学分析:采用SPSS软件对实验结果行统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 PEBP4 在肝癌组织和细胞中高表达 |
| 2.3.2 构建敲低和过表达PEBP4 的稳定细胞系 |
| 2.3.3 敲低PEBP4 抑制肝癌细胞的生长 |
| 2.3.4 过表达 PEBP4 促进肝癌细胞的生长 |
| 2.3.5 敲低PEBP4 抑制肝癌细胞的迁移和侵袭 |
| 2.3.6 过表达PEBP4 促进肝癌细胞的迁移和侵袭 |
| 2.3.7 敲低PEBP4 抑制异体移植瘤的生长 |
| 2.3.8 过表达PEBP4 促进异体移植瘤的生长 |
| 2.3.9 敲低PEBP4 抑制肝癌细胞肺转移 |
| 2.3.10 过表达PEBP4 促进肝癌细胞肺转移 |
| 2.4 讨论 |
| 第三部分 PEBP4 通过Akt/mTOR信号通路促进肝癌细胞的增殖、侵袭和转移 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要试剂配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 WB检测敲低和过表达PEBP4 细胞系中Akt/mTOR信号通路以及EMT的改变 |
| 3.2.3 免疫荧光检测敲低和过表达PEBP4 细胞系中E-cadherin和N-cadherin的表达 |
| 3.2.4 IGF-1 刺激敲低PEBP4 细胞系,WB检测Akt/mTOR信号通路以及EMT的改变 |
| 3.2.5 Akt抑制剂MK-2206 处理过表达PEBP4 细胞系,WB检测Akt/mTOR信号通路以及EMT的改变 |
| 3.2.6 Akt-S473D感染敲低PEBP4 细胞系,WB检测Akt/mTOR信号通路以及EMT的改变 |
| 3.2.7 Akt-S473D和 Akt抑制剂MK-2206 分别处理敲低和过表达PEBP4细胞系,CCK8 检测细胞增殖能力 |
| 3.2.8 Akt-S473D和 Akt抑制剂MK-2206 分别处理敲低和过表达PEBP4细胞系,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力 |
| 3.2.9 Akt-S473D和 Akt抑制剂MK-2206 分别处理敲低和过表达 PEBP4细胞系,免疫荧光检测E-cadherin和 N-cadherin的表达 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 敲低PEBP4 下调Akt/mTOR信号通路 |
| 3.3.2 过表达PEBP4 上调Akt/mTOR信号通路 |
| 3.3.3 PEBP4 参与Akt/mTOR信号通路活化 |
| 3.3.4 PEBP4 促进Akt/mTOR信号通路活化 |
| 3.3.5 PEBP4 通过Akt/mTOR信号通路促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭 |
| 3.3.6 敲低PEBP4 抑制EMT进展 |
| 3.3.7 过表达PEBP4 促进EMT进展 |
| 3.3.8 PEBP4 可能通过Akt/mTOR信号通路调节EMT的进展 |
| 3.3.9 PEBP4 通过Akt/mTOR信号通路调节E-cadherin和 N-cadherin的表达 |
| 3.3.10 PEBP4 通过Akt/mTOR信号通路促进EMT的进展 |
| 3.4 讨论 |
| 第四部分 探讨PEBP4、Akt、mTOR之间的关系 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 主要试剂配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 免疫共沉淀 |
| 4.2.3 N-myc-PEBP4 质粒扩增 |
| 4.2.4 N-myc-PEBP4 转染HEK293T用于免疫共沉淀 |
| 4.2.5 siRNA-mTOR转染HEK293T细胞用于验证siRNA敲低效果 |
| 4.2.6 siRNA-mTOR转染HEK293T细胞用于免疫共沉淀 |
| 4.2.7 Western blot |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 PEBP4、Akt、mTOR之间具有相互作用 |
| 4.3.2 mTOR可能通过Akt与 PEBP4 发生作用 |
| 4.4 讨论 |
| 第五部分 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 NF-κB 信号通路在肝细胞癌作用中的研究进展 |
| References |
（10）VEGFA在肝再生及非酒精性脂肪性肝病中的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分肝细胞中的Gata3/Ramp2 调控PEDF/VEGFA分子流影响肝窦内皮细胞再生的研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 肝细胞源的VEGFA通过激活肝星状细胞加速非酒精性脂肪性肝病向肝癌转化 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 血管新生在肝脏损伤后修复中作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、肝细胞生长因子的研究进展（论文参考文献）
- [1]人多能干细胞向肝脏样细胞定向分化体系的优化[D]. 葛文燕. 浙江大学, 2021(01)
- [2]HGF和c-Met基因在马鹿茸组织创伤修复及再发育过程中的表达特征研究[D]. 芮雪. 塔里木大学, 2021(08)
- [3]柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究[D]. 周怡驰. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [5]地五养肝胶囊通过改善肝再生微环境降低HBeAg阴性慢乙肝患者肝癌发生风险的作用及机制研究[D]. 陈乞. 湖北中医药大学, 2021
- [6]肝宁方对小鼠肝癌癌前病变炎症微环境影响的实验研究[D]. 曹献. 广西中医药大学, 2021(01)
- [7]LIM激酶1核定位促进肝细胞癌进展及抗EGFR治疗耐受的机制研究[D]. 潘志华. 南方医科大学, 2021(02)
- [8]基于NF-κB信号通路探讨茵陈四苓颗粒联合脂肪间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠的保护机制[D]. 钟庭燕. 西南医科大学, 2021(01)
- [9]磷脂酰乙醇胺结合蛋白4对肝癌细胞生物行为学的影响及其机制研究[D]. 陈琼锋. 南昌大学, 2021(01)
- [10]VEGFA在肝再生及非酒精性脂肪性肝病中的功能及机制研究[D]. 沈皓. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)