一、冰七滴丸对大鼠急性心肌缺血保护作用的研究（论文文献综述）
宋欣丽[1]（2021）在《龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价》文中研究表明研究目的1.通过建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,观察龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用;并且探讨其保护作用是否与线粒体功能障碍以及内质网应激有关。2.通过Meta分析方法对中成药治疗心肌缺血再灌注损伤疗效进行系统评价,为临床使用中成药治疗心肌缺血再灌注损伤治疗提供循证医学依据。研究方法1.实验研究:采用随机数字表法将Wistar大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组,通过结扎左前降支30min后复灌,构建大鼠在体心肌缺血再灌注损伤模型,假手术组、模型组予生理盐水灌胃,龙牙楤木总皂苷剂量组分别按50、100、200mg/（kg·d）灌胃处理。2,3,5—氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法测定大鼠心肌梗死面积,酶联免疫法检测各组大鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白T（cTnT）的含量,TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）染色法观察心肌组织细胞凋亡指数;使用透射电镜观察心肌组织中线粒体结构和形态变化,提取各组大鼠心肌组织线粒体,活性氧荧光（DCFH-DA）探针法观察线粒体活性氧簇（Reactive Oxygen Species,ROS）的生成变化、JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位变化、比色法观察腺嘌呤核苷三磷酸（Adenosine Triphosphate,ATP）的形成及琥珀酸脱氢酶（Succinate dehydrogenase,SDH）活性变化情况。免疫组织化学检测法、蛋白质印迹法（Western blot）法检测内质网经典信号通路PERK-eIF2α通路中蛋白激酶R样内质网激酶（proteinkinase R-like ER kinase,PERK）、p-蛋白激酶R 样内质网激酶（p-protein kinase R-like ER kinase,p-PERK）、真核起始因子 2（eukaryotic initiation factor 2,eIF2α）、p-真核起始因子 2（p-eukaryotic initiation factor 2,p-eIF2α）相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测PERK、eIF2α中mRNA的含量。2.临床研究:通过全面搜索并筛选数据库中自建库到2021年1月1日以来发表的关于中成药治疗心肌缺血再灌注损伤患者的随机临床对照试验,对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行系统评价。评价指标包括心肌损伤标志物:肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白I（cTNI）、肌钙蛋白T（cTNT）、再灌注心律失常发生率、不良事件发生率、左室射血分数（LVEF）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）等。研究结果实验研究:实验一:TTC染色结果显示,sham组、I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组心肌梗死面积占总心肌面积百分比分别为:0%、72%、56%、52%、31%。其中,与sham组相比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高组心肌梗死面积所占比例明显增加,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;龙牙楤木总皂苷各剂量组和I/R组相比较,从各组心肌梗死面积所占百分比可见,龙牙楤木总皂苷各组梗死面积比值均低于I/R组,并且随着龙牙楤木总皂苷剂量的增加,心肌梗死面积所占比值逐渐降低,统计学分析显示,龙牙楤木总皂苷低剂量组统计结果显示无统计学差异（P>0.05）;龙牙楤木总皂苷中剂量组结果显示具有统计学意义（P<0.05）,而龙牙楤木总皂苷高剂量组结果提示具有显着统计学意义（P<0.01）。TUNEL染色结果显示,从颜色上看,sham组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为蓝色;I/R组:大部分心肌细胞的细胞核呈现为黄褐色;龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量黄褐色细胞核所占比例介于sham组和I/R组之间,但呈逐渐减少的趋势。sham组细胞凋亡很不明显,可见存在少量散在凋亡细胞;具体的凋亡细胞百分比见下表。与sham组比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡百分比则明显增加,阳性凋亡细胞数明显升高,统计学分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组提示差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异具有统计学意义（P<0.05）,中、高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01）。酶联免疫法结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高CK-MB、cTnT含量,均有所显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异无明显统计学意义（P>0.05;P>0.05）,龙牙楤木总皂苷中剂量组差异具有统计学意义（P<0.05;P<0.05）,龙牙楤木总皂苷高剂量组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）。实验二:透射电镜结果显示:sham组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。I/R组心肌细胞大小及形态有较大差异,可见萎缩及坏死肌细胞,肌原纤维排列紊乱;肌细胞内线粒体分布不均,部分聚集,线粒体大小及形态有较大差异,内脊大多模糊。龙牙楤木总皂苷低剂量组心肌细胞形态有一定差异,肌原纤维排列不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体肿胀,内脊扩张、大多结构模糊;中剂量组心肌细胞大小及形态稍不规则,细胞核呈长梭形,肌原纤维排列稍不规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊部分结构清晰、部分模糊;高剂量组心肌细胞大小及形态基本规则,肌原纤维排列规则;肌细胞内线粒体丰富,线粒体结构完整、形态规则,线粒体内脊排列密集、结构清晰。DCFH-DA探针法检测ROS水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ROS水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ROS水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。比色法观察ATP水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高ATP水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,ATP水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;JC-1荧光探针法观察线粒体膜电位水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高线粒体膜电位水平水平均有所降低,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,线粒体膜电位水平水平呈现出逐步增高的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;比色法观察SDH活性水平结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高SDH活性水平均有所升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,SDH活性水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。实验三:Western blot方法检测心肌组织中PERK、eIF2α的表达。结果显示:与sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显变化,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK的表达也没有明显改变,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。Western blot方法检测心肌组织中p-PERK、p-eIF2α的表达结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK、p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01、P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK、p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。qRT-PCR 方法检测心肌组织中PERK、eIF2αmRNA的表达,结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高PERK、eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01;P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,PERK、eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化结果显示:与 sham组相比,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达没有明显改变,统计学分析结果显示,差异均不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05）。而与I/R组相比较,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组PERK、eIF2α的表达也没有太大差异,统计学分析显示,差异也不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05;P>0.05,P>0.05,P>0.05）。免疫组化方法检测心肌组织中p-PERK的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-PERK表达水平均显着升高,I/R组差异具有显着统计学意义（P<0.01）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-PERK表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异均具有显着统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。免疫组化方法检测心肌组织中p-eIF2α的表达。结果显示,和sham组进行比较,I/R组、龙牙楤木总皂苷低、中、高p-eIF2α表达水平均显着升高,统计分析结果显示,I/R组差异具有统计学意义（P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低、中、高剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05,P>0.05,P>0.05）;与I/R组相比,随着龙牙楤木总皂苷剂量的增高,p-eIF2α表达水平呈现出逐步走低的趋势;统计分析结果显示,龙牙楤木总皂苷中、高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.05）,龙牙楤木总皂苷低剂量组差异不具有统计学意义（P>0.05）。临床研究:最终纳入研究96项,中文文献92篇,英文文献4篇。Meta分析结果显示:CK-MB（SMD:-1.86,95%CI:[-2.33,-1.38],I2=95%,P<0.00001）;CK（SMD:-102.21,95%CI:[-129.34,-75.09],I2=100%,P<0.00001）;cTnI（SMD:-0.80,95%CI:[-0.97,-0.62],I2=99%,P<0.00001）,cTnT（SMD:-1.55,95%CI:[-1.8,-1.3],I2=100%,P<0.00001）;再灌注心律失常发生率（MD:-0.42,95%CI:[-0.34,-0.51],I2=45%,P<0.00001）;不良事件发生率（MD:-0.28,95%CI:[-0.22,-0.36],I2=12%,P<0.00001）;LVEF（SMD:-4.89,95%CI:[-3.9,-5.87],I2=86%,P<0.00001）;HsCRP（SMD:-5.04,95%CI:[-6.92,-3.16],I2=99%,P<0.00001）;MDA（SMD:-4.25,95%CI:[-5.22,-3.28],I2=99%,P<0.00001）;SOD（SMD:-15.26,95%CI:[-10.74,-19.78],I2=99%,P<0.00001）;NO（SMD:-15.26,95%CI:[-5.29,-7.51],I2=97%,P<0.00001）;LDH（MD:-13.83,95%CI:[-20.31,-7.35],I2=0%,P<0.00001）。研究结论1.龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可减少心肌酶漏出,抑制心肌细胞凋亡,改善损伤心肌组织和线粒体结构,抑制SDH活性,同时降低ROS生成,减缓蛋白磷酸化,其机制可能与降低线粒体功能障碍、抑制内质网应激的过度激活有关。龙牙楤木总皂苷的保护作用与剂量呈正相关,发挥大鼠抗心肌缺血再灌注损伤作用的最适有效剂量在200mg/（kg·d）左右。2.中成药联合西医常规治疗心肌缺血再灌注损伤疗效肯定,尤其在降低再灌注性心律失常和不良事件发生率方面效果显着,但鉴于纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,未来需要更多高质量的随机对照试验来证实。
高宏杰[2]（2021）在《基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究》文中认为1 研究目的心肌缺血再灌注损伤（Myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI）常发生在心脏手术、冠脉搭桥、心肌梗塞后再通、心脏移植以及休克等情况下,已成为血运重建后常见的严重并发症。课题组的自拟方痰瘀同治方经过多年的临床观察发现其抗MI/RI疗效显着。故本研究拟采用网络药理学研究方法,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的核心药效物质基础、潜在作用靶点及分子网络机制,对课题组前期开展的痰瘀同治方抗MI/RI的系列作用机制研究进行总结、补充和完善,为今后深入开展痰瘀同治方抗MI/RI的药理药效作用机制的实证研究指出方向。同时,为更好的预测和分析痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制,本研究对随机游走算法进行了优化和验证,为优化后的算法应用于中医药领域的网络药理学研究提供了参考依据。2 研究方法2.1基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制研究应用OMIM数据库、GeneCards数据库、DisGeNET数据库和Pubmed数据库获得MI/RI的靶点。应用TCMSP数据库、TCMID数据库和化学专业数据库获得中药成分,应用SwissADME数据库筛选中药的活性成分,并用SwissTargetPrediction数据库预测中药活性成分的靶点。将痰瘀同治方中药活性成分的靶点和MI/RI的靶点做映射,获得痰瘀同治方抗MI/RI的潜在作用靶点,应用String数据库筛选出核心潜在作用靶点。运用cytoscape3.7.2软件构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”关系的网络图,计算痰瘀同治方中药活性成分抗MI/RI的网络效力值,得出痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分。应用Cluego插件对痰瘀同治方抗MI/RI的核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的可能的潜在作用机制。为了快速有效的发现其可能的潜在作用机制,本研究对随机游走算法进行了优化,形成了基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法,并对该算法进行了验证。将优化后的算法应用于构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的关系网络中,获得痰瘀同治方抗MI/RI的可能潜在的核心靶点,应用Cluego插件对核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方抗MI/RI的可能潜在的分子网络机制。2.2痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制研究应用TCMSP数据库、TCMID数据库和化学专业数据库获取祛痰中药组/化瘀中药组的中药成分,应用SwissADME数据库筛选出中药的活性成分,并用SwissTargetPrediction数据库预测中药活性成分的靶点。将痰瘀同治方祛痰中药组中药活性成分/化瘀中药组中药活性成分的靶点与MI/RI的靶点做映射,分别获得痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的潜在的可能的靶点。应用String数据库获得祛痰中药组/化瘀中药组的核心靶点。应用DAVID数据库对祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的核心靶点进行富集分析,探讨痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的可能的潜在分子网络机制。3 结果3.1基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制研究（1）MI/RI靶点共1283个;（2）痰瘀同治方中药活性成分683个,预测中药活性成分靶点共1452个;（3）痰瘀同治方抗MI/RI的靶点共398个,运用String数据库获得核心靶点共337个;（4）应用cytoscape3.7.2软件构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”关系网络,共有885个节点和12462条边,根据计算出的网络效力值获得痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分;（5）对痰瘀同治方抗MI/RI的337个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析生物反应过程共986个,KEGG信号通路共79条;（6）基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络共有节点269个,中药活性成分节点32个,疾病靶点节点237个。采用分子对接等方法对优化算法进行验证。（7）对痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”核心网络的237个靶点进行富集分析,结果显示:GO分析生物反应过程共739个,KEGG信号通路共131条。3.2痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制研究（1）痰瘀同治方祛痰中药组中药成分共173个,中药活性成分87个,预测中药活性成分靶点共560个;痰瘀同治方化瘀中药组中药成分共143个,中药活性成分194个,预测中药活性成分靶点共430个。（2）痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的靶点共178个,应用String数据库获得核心靶点140个;痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的靶点共155个,应用String数据库获得核心靶点113个。（3）对痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的140个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析中生物反应过程共469个,KEGG信号通路共114条;对痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的113个核心靶点进行富集分析,结果显示:GO分析中生物反应过程共495个,KEGG信号通路共108条。4 结论4.1本研究提出的基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法可以准确快速的提取痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”核心网络,为该算法应用于中医药领域的网络药理学研究提供参考。4.2痰瘀同治方抗MI/RI核心中药活性成分共32个,核心中药为人参、川芎、薤白等6味中药。4.3痰瘀同治方呈现多成分、多靶点、多信号通路协同抗MI/RI的作用特点。本研究得出的痰瘀同治方抗MI/RI的“炎症反应”机制、痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的“凋亡过程负调控”作用机制与课题组前期的研究结果相吻合。此外,痰瘀同治方抗MI/RI的作用机制可能与“PI3K-Akt信号传导通路”“TNF信号通路”“ERK1和ERK2级联的正调控”“一氧化氮生物合成过程的正调控”“MAPK级联”作用机制有关。痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的作用机制还可能与“cAMP信号通路”有关,痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的作用机制可能与“HIF-1信号通路”和“血管内皮生长因子信号通路”有关。
李晓文[3]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中认为研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
王擎擎[4]（2021）在《活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究》文中研究说明背景:当代以干细胞技术为核心的再生医学的迅速发展,为心肌梗死的治疗带来新的希望,其中干细胞移植治疗心梗,有望修复坏死的心肌组织,改善受损的心功能,但是梗死区缺血、缺氧局部微环境使MSCs移植后存活率降低,极大地限制了 MSCs用于治疗MI的疗效。中药促进MSCs移植后存活的研究目前也显示出了很好的疗效,可以调控MSCs的归巢、定植,提高MSCs移植后存活率。导师姚魁武教授基于中医胸痹心痛“阳微阴弦”的基本病机,常用活血温通法治疗冠心病,临床疗效显着,并根据多年临床经验拟定了具有活血温通效果的经验方—活血温通方。我们前期研究也发现活血温通方可以显着改善心肌缺血模型组大鼠心功能,明显缩小心肌梗死面积,而且能够降低炎症反应、抑制心肌细胞凋亡、减少胶原纤维面积以及促进血管新生,同时发现活血温通方减轻心肌缺血损伤可能与Sirt1信号通路激活有关。而活血温通方联合MSCs移植治疗心梗,还没有相关的报道。目的:1.总结导师姚魁武教授活血温通法治疗冠心病阳虚证的用药规律、治疗思路,并进行系统的经验总结。2探索活血温通方对BMSCs移植治疗心梗疗效的影响以及可能的作用机制。方法:1.收集2016年1月—2020年12月就诊于中国中医科学院广安门医院姚魁武主任医师门诊,应用中药汤剂治疗且符合纳排标准的全部初诊原始病案。通过“中医传承计算平台（V3.0）”软件系统进行数据分析,根据分析得到到药物频次、常用药物组合、潜在处方等,分析探讨姚魁武教授活血温通法治疗冠心病的用药规律、诊疗思路,并做系统总结。2.提取大鼠BMSCs,培养至第三代时,用流氏细胞仪进行细胞鉴定。用活细胞染色剂CM-Dil进行荧光标记,以检测移植后细胞的存活情况。3.通过结扎左冠状动脉前降支制备心机梗死模型。SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）：冠状动脉只穿线不结扎，术后灌胃纯水，持续28天；心梗组（MI组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的PBS。术后灌胃纯水,持续28天;BMSCs移植组（BMSCs组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的MSCs单细胞悬液（细胞浓度3x106个/100μL）。术后灌胃纯水,连续28天;活血温通方组（HXWTF组）:造模方法同心梗组。术后灌胃活血温通方,连续28天;活血温通方+BMSCs移植组（BMSCs+HXWTF组）:造模方法同BMSCs移植组。术后灌胃活血温通方,连续28天。4.超声心动图检测大鼠心功能、TTC染色用于观察心肌梗死面积大小、HE染色观察心梗大鼠心肌组织形态的改变、荧光显微镜观察BMSCs移植后的存活情况。5.用WST-1法测定大鼠血清SOD活力和TBA法测定大鼠血清MDA水平,以评价各组氧化损伤程度;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清中炎性因子TNF-a、IL-6、IL-10与生长因子VEGF、bFGF水平,评价炎症反应程度;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌纤维化程度;免疫组织化学染色检测梗死边缘区α-SMA和CD31的表达情况,以评价血管新生情况;Western blotting检测心肌组织Sirt1、NF-κB、FoxO1和p53的蛋白的表达水平。结果:1.从用药频次分析,196张处方中,共137味中药,用药频次≥20的中药有39味,用药频次≥50的有22味,用药频次≥50按频次由高到低依次为丹参（193）,桂枝（164）,砂仁（123）,川芎（117）,瓜蒌（109）,白芍（105）,炙甘草（95）,鸡血藤（93）,茯苓（88）,柴胡（87）,炒枳壳（80）,当归（78）,干姜（77）,炒白术（76）,杜仲（64）,党参（61）,麦冬（59）,肉苁蓉（58）,炒酸枣仁（56）,薤白（54）,葛根（54）,五味子（50）。2.196张处方中的137味中药按功效共分为16类,根据药物功效使用频次由高到低排列前10位的依次为补虚类（769）,活血化瘀类（436）,温里类（339）,清热类（210）,化湿类（198）,解表类（184）,理气类（177）,化痰类（155）,利水渗湿类（119）,安神类（114）。3.从药物组合频次分析,药物组合频次≥90的由高到低依次是丹参-桂枝（162）,丹参-砂仁（123）,丹参-川芎（115）,丹参-瓜蒌（108）,丹参-白芍（104）,丹参-桂枝-砂仁（99）;桂枝-砂仁（99）。基于关联规则深入分析用药组合,导师活血温通法治疗冠心病常用的2味药的组合是丹参-瓜蒌,丹参-砂仁,丹参-桂枝,丹参-鸡血藤等;3味药的组合是丹参-砂仁-瓜蒌,丹参-桂枝-瓜蒌,丹参-桂枝-鸡血藤等。从用药关联规则网络拓扑图可以看出,关联性比较大的药物组合是丹参、桂枝、鸡血藤、瓜蒌、川芎、砂仁。4.基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心组合。3种药物聚类核心组合为丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,鸡血藤;丹参,桂枝,川芎,白芍,砂仁;丹参,桂枝,川芎,砂仁,茯苓。4种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,鸡血藤;丹参,桂枝,麦冬,炙甘草,川芎,生地黄;丹参,桂枝,砂仁,鸡血藤,川芎,降香;丹参,桂枝,砂仁,干姜,茯苓,瓜蒌。5种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,鸡血藤,瓜蒌,川芎,党参;桂枝,丹参,麦冬,川芎,炙甘草,炒白术;丹参,桂枝,干姜,砂仁,茯苓,黄连;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,白芍;丹参,砂仁,桂枝,川芎,鸡血藤,降香。5.基于方剂频数分析,可以得出196例病案中共涉及方剂54个,方剂频数为2以上的药物有32个,方剂频数为5以上的方剂有24个,方剂频数为10以上的方剂有13个,方剂频数为20以上的药物有6个。可以看出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂有丹参饮（118）,四逆散（73）,桂枝甘草龙骨牡蛎汤（25）苓桂术甘汤（23）、瓜蒌薤白白酒汤（21）等。6.根据方剂配伍的使用频次,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散（47）,丹参饮-黄芪赤风汤（11）,丹参饮-交泰丸（11）,丹参饮-瓜蒌薤白白酒汤（11）,丹参饮-半夏泻心汤（11）,丹参饮-瓜蒌薤白半夏汤（11）等。基于关联规则深入分析用方组合,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散-瓜蒌薤白半夏汤,丹参饮-四逆散-黄芪赤风汤,丹参饮-四逆散-桂枝甘草龙骨牡蛎汤等。根据方剂组合规律关联规则网络拓扑图可以看出关联比较大的方剂是丹参饮、四逆散、生脉散、桂枝甘草龙骨牡蛎汤、瓜蒌薤白半夏汤、瓜蒌薤白白酒汤、交泰丸等。基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心方剂组合是生脉散,丹参饮,枳实薤白桂枝汤,补中益气汤,四君子汤;丹参饮,交泰丸,半夏泻心汤,苓桂术甘汤,越鞠丸;丹参饮,四逆散,黄芪赤风汤,瓜蒌薤白半夏汤,桂枝甘草龙骨牡蛎汤。7.BMSCs的鉴定:用流氏细胞仪检测第3代BMSCs表面标记物CD44、CD90、CD45的表达情况,结果显示CD44表达率为99.2%,CD90表达率为97.4%,CD45的表达率为6.7%。8.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心功能的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组EF均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合 BMSCs 移植组 EF比BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组FS均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合BMSCs移植组FS 比 BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,***P<0.001）。9.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌梗死面积的影响:假手术组无梗死,完整心脏表面和心脏切片均呈现红色,无苍白色区域。心梗组完整心脏表面和心脏切片苍白色区域均最大,故心梗面积最大,且心梗处明显凹陷,心梗处心肌明显变薄。BMSCs移植组和活血温通方组较心梗组,完整心脏表面和心脏切片的苍白色区域均明显减少,说明BMSCs移植和活血温通方药物干预均能减少心梗面积。活血温通方联合BMSCs移植组心脏苍白色区域最小,心梗处轻微凹陷,说明活血温通方能提高BMSCs移植改善心梗大鼠心肌梗死面积的疗效。10.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌组织形态的影响:HE染色显示与假手术组相比,其余各组梗死区均有不同程度的炎性细胞浸润。心梗组细胞排列紊乱,细胞间隙增大,炎性细胞浸润最严重。BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组这些病变均有明显改善,炎性细胞浸润有不同程度的降低。与BMSCs移植组、活血温通方组相比较,活血温通方联合BMSCs移植组细胞排列更有序,炎性细胞浸润更少。11.活血温通方对BMSCs移植四周后存活的影响:在全景数字扫描显微镜下观察,可以看到活血温通方联合BMSCs移植组红色荧光分布更广。红色荧光与蓝色荧光重叠的数量明显更多。12.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清SOD、MDA的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（***P<0.001,**P<0.01）;与心梗组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组MDA水平均有显着降低（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs 移植组 MDA 均有显着降低（***P<0.001,**P<0.01）。13.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌细胞凋亡的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平均有显着降低（***P<0.001,***P<0.001）。14.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-10的影响:与假手术组相比,MI组TNF-α、IL-6和IL-10水平水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合 BMSCs 移植组 TNF-α 显着降低（**P<0.01,**P<0.01,***P<0.001）,IL-6 显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）,IL-10 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组TNF-α显着降低（**P<0.01,**P<0.01）,IL-6显着降低（***P<0.001,**P<0.01）,IL-10显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。15.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌纤维化的影响:与假手术组相比,MI组心肌纤维化明显（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（*P<0.05,**P<0.01）。16.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠梗死边缘区α-SMA、CD31表达的影响:与假手术组相比,MI组α-SMA、CD31的表达明显增多（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs 移植组 α-SMA、CD31 的表达均显着增多（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组 α-SMA、CD31 的表达显着增多（**P<0.01,*P<0.05;*P<0.05,***P<0.001）。17.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清生长因子VEGF、bFGF的影响:与假手术组相比,MI组VEGF、bFGF水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。18.活血温通方联合BMSCs移植对心肌组织SIRT1、NF-kB、FoxO1和p53蛋白表达的影响:与假手术组相比,MI组Sirt1的表达明显降低（***P<0.001）,NF-kB、Foxo1、p53 的表达明显升高（**P<0.01,**P<0.01,**P<0.01）。与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,NF-κB的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）,FoxO1 的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05,*P<0.05）,p53 的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达均显着升高（**P<0.01,*P<0.05）,NF-kB的表达显着降低（**P<0.01,*P<0.05）,FoxO1的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）,p53的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）。结论:1.导师活血温通法治疗冠心病常活血药与温阳药并重,且用药平和,配伍主次分明,以经方为主。在活血温通法治疗冠心病的组方用药中常含有活血温通方,治疗效果短期的显着,可能是因为改善了心肌缺血缺氧微环境,也初步说明了活血温通方的临床疗效比较显着。2.活血温通方可能是通过改善心梗后缺血缺氧微环境而提高了 BMSCs移植后的存活率,而进一步提高BMSCs移植治疗心梗在抗细胞氧化损伤、抗细胞凋亡、降低炎症反应、抗心肌纤维化和促进血管新生方面的疗效,以及促进移植后的BMSCs的旁分泌功能而进一步修复受损的心肌,缩小心肌梗死面积,改善心功能。3.活血温通方能促进BMSCs移植后Sirt1信号通路的激活,以协同恢复心功能。
黄表华[5]（2021）在《龙血竭总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及PI3K/AKT表达的影响》文中提出目的:通过构建大鼠心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）模型,并经龙血竭（Sanguis Draconis flavones,SDF）干预后,明确磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路与MIRI的关系,明确龙血竭干预后,PI3K/AKT信号通路的变化及其对MIRI的影响。方法:（1）将80只SD大鼠按随机数字表法分为4组:空白对照组（control check,Control组）,20只;假手术组（sham surgery,Sham组）,20只;缺血再灌注组（Ischemia/reperfusion,I/R）,20只;缺血再灌注+龙血竭总黄酮干预（即通过灌胃法将龙血竭混悬液注入大鼠胃内）组（Sanguis Draconis flavones-I/R,SDF-I/R）,20只。（2）第29天手术,术前禁食禁水12小时;空白对照组（Control组）不需手术处理。假手术组的动物手术全过程与其他组相同,但只穿线不结扎冠脉,并在穿线后将心脏放回胸腔,适当闭合胸腔切口。I/R组及SDF-I/R组进行缺血30min后,抽去塑料管,进行再灌注120min,造成心肌缺血再灌注损伤（MIRI）造模。（3）所有大鼠均在（1）实验造模0分钟、30分钟、再灌注120分钟三个时间点采集体表心电图数据;（2）所有动物直接从腹主动脉取2～4 mL血液,离心得到血清,检测各组造模后再灌注120分钟的血清炎性细胞因子肌酸激酶（Creatine Kinase,CK）、肌酸激酶同功酶（creatine kinase isoenzymes,CK-MB）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）水平;用ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和炎症因子白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）含量;（3）最后放血法处死大鼠后立即取出心脏,留取结扎水平线下相应梗死部位心肌组织进行苏木精-伊红染色法染色（hematoxylin-eosin staining,HE）,显微高倍镜下观察其病理变化。心肌梗死面积测量:实验结束后分离出心脏,将心脏横切成3～4片,采用1%2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色检测心肌梗死面积。（4）通过实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）检测心肌组织中各组PI3K、AKT的信使核糖核酸（Messenger RNA,m RNA）表达量;（5）Western Blot检测心肌组织中各组PI3K、AKT的蛋白水平。所有计量资料用均数±标准差（（?）±S）表示,多组间比较用One-Way ANOVA方法进行统计分析,多组间两两比较采用SNK法,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:（1）血清酶学检测:各组心肌酶学检测情况比较,LDH、CK、CK-MB指标中,I/R组、SDF-I/R组比Control组、Sham组检测结果均高水平（P<0.05）;其中在指标LDH中,SDF-I/R组检测结果比I/R组低下（P<0.05）;在指标CK中,SDF-I/R组检测结果比I/R组低下（P<0.05）;在指标CK-MB中,SDF-I/R组检测结果比I/R组低下（P<0.05）。（2）检测炎症因子TNF-α、IL-6含量:I/R组和SDF-I/R组的TNF-α检测结果与Control组以及Sham组比较有升高,差异具有统计学意义（P<0.001）;而SDF-I/R组TNF-α检测结果比I/R组的TNF-α检测结果低下（P<0.001）;Sham组的IL-6检测结果与Control组比较有升高（P<0.001）;I/R组和SDF-I/R组的IL-6检测结果与Control组以及Sham组比较均有升高（P<0.001）;而SDF-I/R组IL-6检测结果较I/R组的IL-6检测结果低下（P<0.05）。（3）HE染色:大鼠目标心肌组织HE染色通过高倍显微镜下阅片比较各组结果,I/R组的结构最为紊乱,肌纤维有明显断裂,心肌核周空泡化、心肌间质水肿最明显;SDF-I/R组与I/R对比,其心肌排列较规整、断裂较少,组织间隙水肿较轻。（4）TTC染色:Control组、Sham组间比较,P>0.05,梗死面积差异无统计学意义;I/R组、SDF-I/R组与Control组、Sham组间两两比较,SDF-I/R组梗死面积大于Control组、Sham组（P<0.001）;而SDF-I/R组与I/R组比较,SDF-I/R组梗死面积小于I/R组（P<0.001）。（5）q PCR检测PI3K、AKT的m RNA表达量:PI3K的检测中Control组、Sham组扩增率之间的比较,差异无统计学意义（P>0.05）;SDF-I/R组表达水平比I/R组表达水平低下（P<0.001）;AKT的检测中Control组、Sham组的扩增率尚可认为差异有统计学意义（P=0.034<0.05）;I/R组检测水平结果高表达,SDF-I/R组表达水平比I/R组表达水平低下（P<0.001）。（6）Western Blot检测PI3K、AKT的蛋白水平:PI3K蛋白表达量的检测中,Control组、Sham组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）,SDF-I/R组比Control组的表达量高（P<0.05）;I/R组表达量升高,而SDF-I/R组表达量比较I/R组表达结果低下（P<0.001）;AKT的检测中Control组、Sham组的表达量之间比较同样的差异无统计学意义（P>0.05）;I/R组、SDF-I/R组与Control组、Sham组比较表达量均有上调,SDF-I/R组表达量比Control组的表达量高（P<0.05）;SDF-I/R组与Sham组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）;SDF-I/R组表达量比I/R组表达量低下（P<0.001）。结论:1.龙血竭总黄酮可能通过抑制肿瘤炎症因子TNF-α、IL-6释放的机制,在心肌缺血再灌注损伤大鼠中,保护心肌细胞组织结构的完整性,并能稳定心肌细胞膜功能结构,减少心肌酶LDH、CK、CK-MB的释放。2.心肌缺血再灌注损伤大鼠的PI3K/AKT信号通路被激活;前期干预的龙血竭总黄酮对心肌细胞组织损伤的保护作用,可能部分下调了PI3K/AKT信号通路的活化程度。
冀楠[6]（2021）在《益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究》文中认为背景:急性心肌梗死（Acute Myocardial infarction,AMI）发生后,左心室大小、结构、功能改变,造成心室重构。心室重构（Ventricμlar remodeling,VR）是AMI向心力衰竭发展的主要病程。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）可通过旁分泌、归巢、转化等方式缓解AMI后心肌损伤,改善心室重构。但由于AMI后内环境改变,造成BMSCs迁移效率低下。团队前期研究发现,益气活血方可改善AMI后炎性环境,改善AMI大鼠心肌损伤。但益气活血方是否可以促进BMSCs向AMI大鼠梗死部位迁移,发挥更好的心肌保护作用,值得深入研究。目的:探讨益气活血方联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死后心室重构的干预作用,以mi RNA-210/BNIP3为切入点,从自噬-凋亡途径研究益气活血方联合干细胞对心室重构的可能的作用机制。方法:1、从SD大鼠骨髓中提取BMSCs,显微镜下观察细胞形态,流式检测细胞表面标志物。采用LAD结扎的方法建立大鼠心肌梗死模型,分为假手术组、模型组、益气活血方组、骨髓间充质干细胞组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组。造模2小时,心电图检测心肌缺血情况。药物干预4周后,心脏超声评价大鼠心脏结构和功能,TTC染色评价大鼠心肌梗死面积,HE染色观察大鼠心肌炎性细胞浸润情况、Masson染色观察心肌纤维组织病理改变。2、使用CM-DIL染料对BMSCs细胞膜标记染色。造模后隔天尾静脉移植入大鼠体内。干预4周后取材,运用免疫荧光检测BMSCs向梗死部位富集情况,免疫组化检测心肌组织中SDF-1/CXCR4蛋白的表达水平。3、TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡情况。Western Blot检测造模后各组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62表达情况,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达情况,目的蛋白BNIP3表达情况。RT-q PCR检测mi R-210、BNIP3 mRNA表达情况。结果:1、与假手术组相比,模型组大鼠的LVESD、LVEDD增加（P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.01）,提示模型组大鼠左室扩大,心功能下降,心脏结构改变;与模型组相比,益气活血方组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组的LVEDD、LVESD减小（P<0.05or P<0.01）,LVEF、LVFS升高（P<0.05 or P<0.01）,提示此两组可减轻心肌梗死所致的大鼠心脏损伤,减轻大鼠心脏结构改变;与模型组比较,骨髓间充质干细胞组的LVESD减小（P<0.01）,LVFS、LVEF升高,LVEDD减小,但差异无统计学意义（P>0.05）。与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组与骨髓间充质干细胞组LVESD、LVEDD增加（P<0.05 or P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.05 or P<0.01）。提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组对梗死心肌的保护作用最为显着。TTC染色结果显示:与假手术组相比,模型组梗死面积显着增加（P<0.01）。与模型组相比,各给药组梗死面积减少（P<0.05 or P<0.01）。与益气活血联合骨髓间充质干细胞组相比,其余两给药组梗死面积增大（P<0.05 or P<0.01）。HE染色结果显示:假手术组大鼠心肌细胞形态正常,细胞核结构清晰,居于中央,肌丝着色均匀,排列整齐规则,呈正常心肌细胞形态;与假手术组比较,模型组大鼠病变程度严重,心肌细胞形态不规则,排列紊乱,细胞核深染,炎性细胞浸润增多;与模型组比较,各给药组大鼠梗死范围缩小,心肌结构改变减轻,肌丝排列较规则,炎性细胞浸润和水肿减少。Masson染色结果显示:假手术组心肌细胞排列整齐,极少纤维组织沉积;模型组病变最为严重,染色显示在心肌梗死边缘区心肌细胞肥大,纤维组织沉积严重,排列紊乱,可见大面积蓝色纤维化;与模型组比较,各给药组显示胶原纤维沉积减少,心肌排列整齐。2、AMI大鼠造模后隔天经尾静脉移植BMSCs,荧光显微镜下观察其迁移情况,可见心肌组织中橙红色荧光,BMSCs向心肌梗死部位富集。免疫组化结果显示:与骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方联合骨髓间充质干细胞组SDF-1蛋白表达增加（P<0.05）,CXCR4表达无统计学差异。3、TUNEL染色显示假手术组未见明显阳性细胞核染色,阳性细胞核染色多见于模型组。与模型组相比,给药组阳性细胞核染色数量明显减少。凋亡相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌Bax蛋白表达上调（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.01）,Caspase-3表达上调（P<0.01）,提示凋亡激活;与模型组比较,各给药组可下调Bax蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可下调Caspase-3蛋白表达（P<0.01）,上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,骨髓间充质干细胞组Bcl-2蛋白表达有上调趋势,Caspase-3蛋白表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组Bax、Caspase-3蛋白表达上调,（P<0.01 or P<0.05）,Bcl-2表达下调（P>0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组抑制凋亡效应最显着。自噬相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌P62蛋白表达上调（P<0.05）,LC3B、Beclin-1蛋白表达下调,（P<0.01 or P<0.05）提示自噬激活;与模型组比较,各给药组可下调P62蛋白表达（P<0.01）,上调Beclin-1蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调LC3B蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组LC3B蛋白表达有上调趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组P62蛋白表达上调（P<0.01 or P<0.05）,LC3B、Beclin-1表达下调（P<0.01 or P<0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组诱导自噬效应最显着。BNIP3蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）;与模型组比较,各给药组可下调BNIP3蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）。mi R-210与BNIP3 Mrna PCR检测结果显示,与假手术组比较:模型组大鼠心肌mi R-210表达下调（P<0.01）,BNIP3 mRNA表达水平上调（P<0.01）;与模型组比较:益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调mi R-210表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组mi R-210表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）,各给药组可下调BNIP3 mRNA表达情况（P<0.01）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比:益气活血方组和骨髓间充质干细胞组mi R-210表达下降,（P<0.01）,骨髓间充质干细胞组BNIP3 mRNA表达水平上升（P>0.01）,益气活血方组BNIP3 mRNA有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。提示益气活血方可能通过mi R-210/BNIP3通路发挥作用,且益气活血方联合骨髓间充质干细胞效用最为显着。结论:1、益气活血方联合骨髓间充质干细胞能够提高心梗后射血分数,改善大鼠的心脏结构,减轻心脏损伤。2、益气活血方通过干预SDF-1/CXCR4轴增加BMSCs向梗死区富集效率。3、益气活血方联合骨髓间充质干细胞可能通过调控mi RNA-210/BNIP3轴,影响心肌细胞自噬-凋亡,发挥抑制VR机制。
杨杉杉[7]（2021）在《基于TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路的麝香通心滴丸促血管新生作用机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过体外缺血缺氧条件下培养人脐静脉内皮细胞及复制AMI大鼠模型,观察麝香通心滴丸（STDP）促进大鼠心肌梗死后血管新生作用,并探讨相关的作用机制。方法:实验一:将HUVECs采用无血清培养基并置于缺氧培养箱（1%O2;5%CO2;94%N2）中培养24小时,制备缺血缺氧内皮细胞模型,加入不同浓度（0%、5%、10%、20%、40%）的STDP含药血清继续培养24h。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞迁移能力;Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成能力;Western Blot法检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5蛋白的表达。实验二:选用SD雄性大鼠90只,随机选取其中的70只,采用结扎左冠状动脉制备急性心肌梗死大鼠模型,将造模成功后的48只大鼠随机分为模型组、STDP低剂量组、STDP中剂量组、STDP高剂量组。将余下的20只大鼠随机分为空白组和假手术组,每组各10只。假手术组大鼠与模型组的手术操作过程相同,只穿线但不结扎冠状动脉。术后第3天对各组大鼠灌胃,空白组、假手术组、模型组分别给予STDP各剂量组等体积生理盐水灌胃,STDP低、中、高剂量组分别给予相应剂量的麝香通心滴丸水溶液灌胃,每日1次,连续灌胃14天。观察大鼠一般情况;二维超声测定大鼠心脏功能;TTC染色检测大鼠心肌梗死面积;HE染色观察大鼠心肌病理形态;TUNEL法测定大鼠心肌细胞凋亡;CD31免疫荧光法检测心肌新生血管情况;ELISA法检测血清IL-12水平;Western Blot法检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5蛋白的表达;RT-PCR法检测TGF-β1,Smad1,Smad5,ALK1,Id1mRNA的表达。结果:实验一:1.麝香通心滴丸含药血清可以促进HUVECs的增殖、迁移与管腔形成,当含药血清浓度达到20%时,这种促进能力最强;2.Western Blot检测结果:麝香通心滴丸含药血清可以促进HUVECs TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5蛋白的表达,当含药血清浓度达到20%时,这种促进能力最强。实验二:1.心功能检测结果显示:与模型组相比,STDP中、高剂量组大鼠心脏LVIDs、LVIDd明显减少（P<0.01）,LVFS、LVEF明显增加（P<0.01）。2.TTC染色结果显示:模型组心肌变薄,可见明显的心肌梗死灶;与模型组相比,STDP中、高剂量组心肌梗死面积明显减少（P<0.01）。3.HE染色结果显示:STDP中、高剂量组心肌纤维部分溶解、断裂,细胞间质稍变宽,横纹较清晰,较模型组心肌损伤减轻。4.TUNEL检测结果显示:与模型组相比,STDP中、高剂量组大鼠心肌细胞凋亡水平降低。5.CD31免疫荧光检测结果显示:与模型组相比,STDP中、高剂量组CD31荧光表达明显增加,MVD明显增加（P<0.01）。6.血清IL-12结果显示:与模型组相比,STDP低剂量组大鼠血清IL-12水平降低（P<0.05）;STDP中、高剂量组IL-12水平明显降低（P<0.01）。7.Western Blot检测结果显示:与模型组相比,STDP中、高剂量组大鼠心肌组织TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5蛋白表达明显增加（P<0.01）。8.RT-PCR检测结果显示:与模型组相比,药物中、高剂量组大鼠TGF-β1、Smad1、Smad5、ALK1、Id1mRNA表达明显增加（P<0.01）。结论:1.麝香通心滴丸含药血清能够促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及管腔形成,增加TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5蛋白的表达;2.麝香通心滴丸能够减少急性心肌梗死模型大鼠的梗死面积,改善心脏功能,减轻心肌的病理损伤,降低血清IL-12水平;3.麝香通心滴丸能够促进急性心肌梗死模型大鼠血管新生,其作用机制可能与上调TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路关键蛋白及基因表达,上调VEGFA蛋白的表达相关。
高毅洁[8]（2021）在《从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制》文中提出治疗性血管新生作为缺血性心脏病血运重建的代偿策略之一,对于恢复缺血区的血流供应和及时挽救受损心肌具有重要的意义。而外泌体作为细胞间通讯的新型传导介质,为血管新生的“无细胞”策略提供了新的思路。活血益气方可促进大鼠梗死边缘区心肌组织的血管新生,但其具体作用机制尚不明确。因此,本研究拟以外泌体为切入点,进一步探索活血益气方促心梗后血管新生的作用。目的:观察活血益气方血清外泌体促大鼠心梗后血管新生的作用,及其对缺氧HUVECs增殖、迁移、成管能力和血管新生相关信号通路的影响,进而从外泌体角度揭示活血益气方促心梗后血管新生的作用机制。方法:（1）制备大鼠去离子水血清及活血益气方含药血清,超速离心提取血清外泌体,通过透射电镜观察外泌体形态变化,NanoSight检测外泌体粒径,Western blot检测外泌体标志蛋白CD9、CD63及TSG101的表达进行鉴定。（2）采用左冠状动脉前降支结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,随机分为活血益气方血清外泌体组、去离子水血清外泌体组和模型组,冠脉结扎后立即于心梗交界区的四个方向分别注射活血益气方血清外泌体、去离子水血清外泌体和等量的PBS;假手术组只穿线,不结扎和注射,常规饲养四周。HE染色法观察梗死边缘区心肌组织病理形态学变化;免疫组织化学染色法检测内皮特异性CD31和α-SMA表达以观察梗死边缘区心肌组织微血管内皮细胞的增生情况;小动物超声成像系统检测大鼠心功能改善的情况;全自动生化分析仪检测大鼠血清心肌酶CK、CK-MB及LDH变化;实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达。（3）构建HUVECs缺氧细胞模型,分别给予活血益气方血清外泌体、去离子水血清外泌体进行干预,缺氧组给予0.5%无外泌体血清培养;以常氧组为对照,常规换液培养。免疫荧光检测HUVECs与外泌体的融合;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell迁移实验及Matrigel基质胶实验分别检测缺氧HUVECs细胞增殖、迁移和成管能力。实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测缺氧HUVECs HIF-1 α、VEGF、FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 及其 mRNA 的表达。结果:（1）透射电镜下可观察到外泌体的特征形态为茶托状;粒径分析验证外泌体的大小集中在30-150nm;Westernblot检测出外泌体标志蛋白CD9、CD63及TSG101的表达,证明本实验所提取纯化的样本为外泌体。（2）光镜下可见,假手术组心肌肌束形态完整,心肌细胞排列致密,胞核轮廓清晰;模型组和去离子水血清外泌体组梗死区心肌横纹消失,心肌肌束断裂且排列紊乱,纤维结缔组织增生;活血益气方血清外泌体组梗死区心肌肌束断裂且排列紊乱,胞核不清晰,但范围和程度较模型组和去离子水血清外泌体组有所减轻。（3）与假手术组比较,模型组的LVEF、LVFS降低,LVIDd、LVIDs升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组LVEF、LVFS、LVIDd、LVIDs均有上升趋势,但未见统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组LVEF、LVFS均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）,LVIDd、LVIDs有降低趋势,但未见统计学意义（P>0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组LVEF、LVFS有上升趋势,LVIDd、LVIDs有降低趋势,但均未见统计学意义（P>0.05）。（4）与假手术组比较,模型组大鼠血清CK、CK-MB及LDH有升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）。与模型组相比,去离子水血清外泌体组大鼠血清CK、CK-MB及LDH有降低趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组大鼠血清CK、CK-MB及LDH均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组大鼠血清LDH降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;CK及CK-MB有降低趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。（5）与假手术组比较,模型组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达有降低趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织CD31及α-SMA的表达升高,差异具有统计学意义（P<0.01）。（6）与假手术组相比,模型组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较,去离子水血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α、VEGF及其mRNA的表达水平有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织VEGF mRNA的表达水平有上升趋势,HIF-1 α mRNA的表达水平有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1和VEGF的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与去离子水血清外泌体组相比,活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组梗死边缘区心肌组织HIF-1 α和VEGF的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）。（7）与常氧组比较,缺氧组细胞增殖减少,差异具有统计学意义（P<0.01）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞增殖增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞增殖增加,差异具有统计学意义（P<0.01）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞增殖,但未见统计学差异（P>0.05）。（8）与常氧组比较,缺氧组细胞迁移面积百分比及迁移的面积减少,差异具有统计学意义（P<0.01）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组和活血益气方血清外泌体组细胞迁移百分比有增多的趋势,但无统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组迁移面积有增加的趋势,但无统计学差异（P>0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞迁移面积增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞迁移百分比有增多的趋势,但无统计学差异（P>0.05）;细胞迁移面积增多,差异具有统计学意义（P<0.01）。（9）与常氧组比较,缺氧组细胞形成新生血管的长度明显减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组和活血益气方血清外泌体组形成新生血管的长度增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组形成新生血管的长度增加,但未见统计学差异（P>0.05）。（10）与常氧组比较,缺氧组细胞HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α表达水平下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;VEGF表达下调,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞HIF-1 α和VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α和VEGF的表达水平有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,活血益气方血清外泌体组细胞HIF-1α、VEGF及其mRNA的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。与去离子水血清外泌体组相比,活血益气方血清外泌体组细胞HIF-1 α mRNA的表达水平下调,差异具有统计学意义（P<0.01）;VEGF mRNA的表达水平上调,差异具有统计学意义（P<0.01）;HIF-1 α和VEGF的表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）。（11）与常氧组比较,缺氧组细胞FAK、p38、MAPKAPK mRNA表达水平均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）,HSP27 mRNA表达有上调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;FAK、p38、MAPKAPK及HSP27蛋白表达水平有下调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,去离子水血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,FAK、p38蛋白表达水平有下调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）;MAPKAPK、HSP27蛋白表达均下调,差异具有统计学意义（P<0.05）;活血益气方血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01）,FAK、p38、HSP27蛋白表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,MAPKAPK蛋白表达有上调趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。与去离子水血清外泌体组比较,活血益气方血清外泌体组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27及其mRNA表达均上调,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论:活血益气方血清外泌体可促进大鼠心梗后血管新生,减少心肌损伤,改善心功能,还可促进缺氧内皮细胞增殖、迁移及成管能力,其具体的作用机制可能与上调HIF-1α、VEGF及FAK/p38/MAPKAPK/HSP27信号通路的表达有关。
韩额尔德木图[9]（2020）在《蒙药朱日很滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究》文中提出目的:本研究建立大鼠心肌缺血再灌注模型,朱日很滴丸进行有效的干预,旨在阐明蒙药朱日很滴丸在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用及其分子机制,从而为蒙药朱日很滴丸治疗蒙医心刺痛提供客观依据。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（I/R）、阳性组（DS）,朱日很滴丸低（ZRH-L）、中（ZRH-M）、高（ZRH-H）剂量组;各组连续灌胃给药15天,每天1次,Sham组、I/R组分别给予生理盐水（10ml·kg-1）,DS组给予复方丹参滴丸（170mg·kg-1）,ZRH-L、ZRH-M、ZRH-H组分别给予朱日很滴丸（300、900、1500mg·kg-1）,各组均于造模前1h给药1次,采用结扎大鼠左冠前降支缺血30 min,再灌注2h,构建大鼠心肌缺血/再灌注模型,腹主动脉采血,摘心脏留标本。应用图像分析软件（mage-Pro Plus）计算心肌梗死面积,酶联免疫吸附（ELISA）法检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）、心肌肌钙蛋白T（CTnT）含量和心肌丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力,HE染色观察心肌组织病理形态学变化以及透射电镜观察心肌线粒体超微结构的变化,评价朱日很滴丸的保护作用。采用TUNEL法检测并计算心肌细胞凋亡指数,观察朱日很滴丸对细胞凋亡的影响;采用Western Blot法分别检测了 Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3、Bax、Bcl-2、P-Akt蛋白表达水平以及采用RT-PCR法检测了 Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达水平,阐明朱日很滴丸的作用机制。结果:1蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌梗死面积的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的心肌梗死面积明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的心肌梗死面积明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组的心肌梗死面积与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）。2蒙药朱日很滴丸对MIRI后血清CK-MB、CTnT含量的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的CK-MB、CTnT含量明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的CK-MB、CTnT含量明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组的CK-MB、CTnT含量与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）。3蒙药朱日很滴丸对MIRI后大鼠心肌组织病理形态学和心肌线粒体超微结构的影响:在光镜下的观察结果,I/R组的心肌细胞形态不规则、排列发生紊乱,局部肌纤维横纹消失,可见心肌细胞发生水肿、且有局灶性变性及坏死,并伴有中性粒细胞浸润。朱日很滴丸各组、DS组的心肌细胞水肿减轻、中性粒细胞浸润的数量减少。在透射电镜下的观察,I/R组的肌丝排列疏松、紊乱;线粒体大部分出现肿胀,嵴间隙增大,伴有嵴断裂。朱日很滴丸各组和DS组的肌丝无明显疏松现象,线粒体大小形态较正常,轻中度肿胀,嵴排列基本有序,结构尚清晰完整。4蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌MDA含量及SOD活力的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的MDA值明显增高,SOD值明显降低;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的MDA值明显下降,SOD值明显升高,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组的MDA、SOD值与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）。5蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞凋亡指数的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的心肌细胞凋亡指数明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的心肌细胞凋亡指数明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组的心肌细胞凋亡指数与DS组对比,无统计学意义（P>0.05）。6蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞Cyto-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的Cyto-C、c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组、ZRH-H组的Cyto-C蛋白表达与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）;ZRH-M组的c-caspase-9、c-caspase-3蛋白表达与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）。7蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响:与Sham组比较,I/R组的Bcl-2蛋白和mRNA表达明显下降,而Bax蛋白和mRNA表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、ZRH-H组、DS组的Bcl-2蛋白和mRNA表达明显升高,而Bax蛋白和mRNA表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;ZRH-M组、ZRH-H组的Bcl-2蛋白和mRNA表达与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）;ZRH-M组、ZRH-H组的Bax蛋白表达与DS组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;ZRH-M组的Bax mRNA表达与DS组比较,无统计学意义（P>0.05）。8蒙药朱日很滴丸对MIRI后心肌细胞P-Akt蛋白表达的影响:结果显示,与Sham组比较,I/R组的P-Akt蛋白表达明显升高;与I/R组比较,ZRH-M组、DS组的P-Akt蛋白表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）。结论:1 蒙药朱日很滴丸具有改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用。2 在心肌缺血/再灌注损伤过程中,蒙药朱日很滴丸通过抑制线粒体凋亡通路发挥心肌保护作用。3 PI3K/AKT信号通路可能参与了蒙药朱日很滴丸对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。4蒙药朱日很滴丸具有治疗蒙医心刺痛的作用。
李万平[10]（2019）在《Tv2p涂膜剂对脑缺血和心肌缺血的药效学研究》文中指出目的:探究TV2p涂膜剂对MCAO/R大鼠的治疗作用,以及对心肌缺血小鼠和大鼠的预防保护作用。方法:采用MCAO/R模型,考察TV2p涂膜剂不同治疗时间窗对脑缺血大鼠的治疗作用。将大鼠随机分为不同给药治疗时间窗的三个大组,每个大组均包含疏血通阳性药组和TV2p涂膜剂的低、中、高三个剂量组,三个大组共用假手术组和模型组;对实验组实施MCAO手术操作,以神经功能缺损评分、脑梗死面积、乳酸脱氢酶以及过氧化脂质的表达来评价TV2p涂膜剂对MCAO/R大鼠的治疗作用。采用ISO诱导心肌缺血小鼠模型,考察TV2p涂膜剂对心肌缺血小鼠的保护作用。将小鼠按假手术组、模型组、复方丹参滴丸阳性药组和TV2p涂膜剂低、中、高三个剂量组随机分成6组,连续给药6 d,从第5 d起,给药30 min后,实验组腹腔注射ISO 5 mg/kg诱导心肌缺血模型,连续2 d,第6 d给药2 h后,处死小鼠;通过检测心肌组织SOD、MDA、AST、CK、LDH的表达以及心肌切片来评价TV2p涂膜剂对ISO诱导心肌缺血小鼠的保护作用。采用PIT诱导心肌缺血大鼠模型,考察TV2p涂膜剂对心肌缺血大鼠的保护作用。将大鼠按假手术组、模型组、复方丹参滴丸阳性药组和TV2p涂膜剂低、中、高三个剂量组随机分为6组,连续给药6 d,第6 d给药0.5 h后,实验组采用舌下静脉注PIT 0.8 U/kg诱导心肌缺血模型;通过对凝血四项以及心率、血压等指标的检测来评价TV2p涂膜剂对PIT诱导心肌缺血大鼠的保护作用。结果:TV2p涂膜剂不同治疗时间窗对MCAO/R的治疗结果表明:三个不同的治疗时间窗给药,TV2p涂膜剂均可显着降低脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损评分和脑梗死面积;除第一治疗时间窗高剂量组对乳酸脱氢酶的表达与模型组相比无显着性差异,其余各受试药物组均可显着地降低乳酸脱氢酶和脂质过氧化物的表达。TV2p涂膜剂对ISO诱导心肌缺血小鼠的保护作用结果显示:除低剂量组对AST和LDH的表达影响无显着性差异外,其余剂量组均可不同程度地升高SOD和降低CK、AST、LDH、MDA的表达;对比心肌切片,各剂量组未见心肌纤维大面积断裂,中剂量给药组仅个别细胞有轻微肿胀。TV2p涂膜剂对PIT诱导心肌缺血大鼠的保护作用结果显示:各剂量组均可不同程度地延长PT、TT和降低FIB的表达,高剂量组还可延长APTT;各剂量组均可不同程度地降低心率和左心室最大压升速率。此外高、中剂量组可明显降低左心室收缩压,高剂量组对动脉收缩压具有降低作用。结论:TV2p涂膜剂对MCAO/R大鼠脑缺血有较好的治疗效果,治疗时间窗控制在4 h内可取得较好治疗效果,其机制可能与降低脂质过氧化物和乳酸脱氢酶的表达有关;TV2p涂膜剂对心肌缺血具有较好的预防保护作用,其机制可能与其具有降低CK、ASD和LDH的表达以及升高SOD的表达和改善心率、血压变化等因素有关。
二、冰七滴丸对大鼠急性心肌缺血保护作用的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、冰七滴丸对大鼠急性心肌缺血保护作用的研究（论文提纲范文）
（1）龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 上篇 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与内质网应激 |
| (一) 内质网应激的主要路径 |
| (二) 内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 线粒体功能障碍与心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| (一) 线粒体形态动力学异常 |
| (二) 线粒体能量代谢障碍 |
| (三) 活性氧产生过量 |
| (四) 钙稳态异常 |
| (五) 线粒体膜通透性改变 |
| 参考文献 |
| 综述三 心肌缺血再灌注损伤的中西医结合研究进展 |
| 1.中药复方汤剂 |
| 2.中成药 |
| 3.中药单体及有效成分 |
| 4.结语与展望 |
| 参考文献 |
| 下篇 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 龙牙楤木总皂苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 实验器材和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 基于线粒体功能障碍探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要仪器和材料 |
| 2 实验方法 |
| 3.结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 基于内质网应激探讨龙牙楤木总皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 主要实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 研究的临床意义 |
| 2 龙牙楤木总皂苷抗MIRI的研究基础 |
| 3 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的选择 |
| 4 研究结果分析 |
| 参考文献 |
| 临床研究 中成药治疗心肌缺血再灌注损伤的系统评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药抗心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药复方的网络药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 网络药理学算法在中医药领域的应用现状 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 临床研究 |
| 1 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 1.1 MI/RI靶点的收集与整理 |
| 1.2 痰瘀同治方中药活性成分及其靶点的收集与整理 |
| 1.3 痰瘀同治方中药活性成分抗MI/RI的核心靶点的筛选 |
| 1.4 构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”分子网络并计算中药活性成分的网络效力值 |
| 1.5 痰瘀同治方抗MI/RI核心靶点的富集分析 |
| 1.6 小结 |
| 2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法 |
| 2.1 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的基本原理与优势 |
| 2.2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的公式 |
| 2.3 小结 |
| 3 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.1 基于优化算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络 |
| 3.2 基于优化算法构建痰瘀同治方“中药活性成分-靶点-MI/RI”的核心网络靶点的富集分析 |
| 3.3 小结 |
| 4 对平均最短路径偏向的重启随机游走算法的验证 |
| 4.1 痰瘀同治方核心中药活性成分与MI/RI关键靶点的分子对接 |
| 4.2 应用优化算法前后痰瘀同治方抗MI/RI靶点数量及富集分析路径的对比 |
| 4.3 基于优化算法的痰瘀同治方抗MI/RI靶点富集分析结果与课题组前期研究结果的对比 |
| 4.4 小结 |
| 5 痰瘀同治方祛痰中药组/化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 5.1 痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 5.2 痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 讨论 |
| 1 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法 |
| 1.1 有偏向的重启随机游走算法中对偏向概率参数的筛选 |
| 1.2 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法与其它算法的对比与分析 |
| 1.3 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法与随机游走算法的对比与分析 |
| 1.4 基于平均最短路径偏向的重启随机游走算法的适用性及其不足 |
| 2 痰瘀同治方抗MI/RI的核心中药活性成分及其核心中药 |
| 3 痰瘀同治方、本方祛痰中药组和本方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制的对比与分析 |
| 3.1 痰瘀同治方与本方祛痰中药组共同抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.2 痰瘀同治方与本方化瘀中药组共同抗MI/RI的分子网络机制 |
| 3.3 痰瘀同治方、本方祛痰中药组和本方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制的对比研究 |
| 4 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.1 痰瘀同治方抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.2 痰瘀同治方祛痰中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 4.3 痰瘀同治方化瘀中药组抗MI/RI的分子网络机制 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（3）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（4）活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 活血温阳类药物治疗冠心病的文献研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药联合MSCs移植治疗心肌梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 姚魁武教授论治冠心病阳虚证的经验以及发掘 |
| 导师姚魁武活血温通法治疗冠心病的经验总结 |
| 基于中医传承计算平台分析姚魁武教授治疗冠心病阳虚证用药特点 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 活血温通方联合BMSCs移植治疗大鼠急性心梗的疗效评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 活血温通方联合BMSCs移植改善大鼠心梗区缺血缺氧微环境的机制研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 创新点与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 查新报告 |
（5）龙血竭总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及PI3K/AKT表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及设备 |
| 1.3 实验所用药物及试剂 |
| 1.4 实验动物分组及预处理 |
| 1.5 药物配制、大鼠MIRI模型的制备及动物取材 |
| 1.6 检测大鼠血清酶学CK、CM-MB、LDH水平 |
| 1.7 心肌组织HE染色及TTC染色 |
| 1.8 ELISA法检测大鼠血清炎症因子TNF-α和IL-6 含量 |
| 1.9 实时荧光定量PCR检测PI3K、AKT的 m RNA扩增表达水平 |
| 1.10 Western Blot 法检测 PI3K、AKT 蛋白表达 |
| 1.11 数据统计与分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 造模大鼠心电图变化情况 |
| 2.2 检测血清酶学CK、CK-MB、LDH水平 |
| 2.3 检测血清中 TNF-α和 IL-6 含量 |
| 2.4 各组大鼠心肌组织H E染色 |
| 2.5 心肌梗死面积TTC染色 |
| 2.6 qPCR检测实验大鼠PI3K、AKT mRNA表达并比较 |
| 2.7 Western Blot检测PI3K、AKT蛋白表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验大鼠心肌缺血再灌注损伤造模的意义 |
| 3.2 龙血竭总黄酮 |
| 3.3 PI3K/AKT信号通路 |
| 3.4 龙血竭对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞组织的影响 |
| 3.5 龙血竭对大鼠血清酶学的影响 |
| 3.6 龙血竭对大鼠血清炎症因子TNF-α和IL-6 的影响 |
| 3.7 龙血竭对大鼠心肌细胞PI3K、AKT mRNA及蛋白表达的影响 |
| 3.8 总结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 PI3K/AKT 信号通路在心血管及常见疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研经历 |
（6）益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 益气活血方联合骨髓间充质干细胞对大鼠心肌梗死心功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验二 益气活血方对骨髓间充质干细胞缺血心肌归巢影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验三:益气活血方联合骨髓间充质干细胞通过miRNA-210/BNIP3 通路影响自噬-凋亡机制 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 microRNA在心肌梗死后心室重构中的研究现状 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗心肌梗死后心室重构的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）基于TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路的麝香通心滴丸促血管新生作用机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1 心肌梗死的研究进展 |
| 1.1 中医学对心肌梗死的认识与研究进展 |
| 1.2 现代医学对急性心肌梗死的认识与研究进展 |
| 2 治疗性血管新生的应用研究进展 |
| 2.1 治疗性血管新生的概述 |
| 2.2 血管新生相关分子机制 |
| 2.3 TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路的研究进展 |
| 3 麝香通心滴丸的研究进展 |
| 3.1 麝香通心滴丸的功效作用与药物成分 |
| 3.2 麝香通心滴丸的药理作用 |
| 3.3 麝香通心滴丸在心血管疾病中的应用 |
| 实验一 麝香通心滴丸对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及血管新生能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 麝香通心滴丸含药血清制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 MTT法检测细胞增殖能力 |
| 2.4 Transwell小室法检测细胞迁移能力 |
| 2.5 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成能力 |
| 2.6 Western Blot检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5蛋白的表达 |
| 3 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 MTT法检测细胞增殖能力 |
| 4.2 Transwell小室法检测细胞迁移能力 |
| 4.3 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成能力 |
| 4.4 Western Blot检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5 蛋白的表达 |
| 实验二 麝香通心滴丸促进AMI模型大鼠血管新生的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验器械与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物模型的制备 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 动物取材 |
| 2.4 心脏功能测定 |
| 2.5 TTC染色检测心肌梗死面积 |
| 2.6 HE染色观察大鼠心肌病理形态 |
| 2.7 TUNEL荧光法测定大鼠心肌细胞凋亡 |
| 2.8 CD31 免疫荧光检测新生血管情况 |
| 2.9 酶联免疫(ELISA)法检测血清IL-12水平 |
| 2.10 Western Blot检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5蛋白的表达 |
| 2.11 RT-PCR法检测TGF-β1,Smad1,Smad5,ALK1,Id1mRNA的表达 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 大鼠的一般情况 |
| 4.2 大鼠心脏功能测定 |
| 4.3 TTC染色检测心肌梗死面积 |
| 4.4 HE染色观察大鼠心肌病理形态 |
| 4.5 TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡 |
| 4.6 CD31 免疫荧光检测新生血管情况 |
| 4.7 酶联免疫(ELISA)法检测血清IL-12水平 |
| 4.8 Western Blot检测TGF-β1、VEGFA、p-Smad1/5、Smad1/5 蛋白的表达 |
| 4.9 RT-PCR法检测TGF-β1, Smad1, Smad5,ALK1,Id1mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 1 关于AMI动物模型的建立 |
| 2 对HUVECs增殖、迁移、成管能力的影响 |
| 3 对AMI模型大鼠心肌梗死面积的影响 |
| 4 对AMI模型大鼠心肌细胞凋亡及心功能的影响 |
| 5 对AMI模型大鼠血清IL-12 水平的影响 |
| 6 对AMI模型大鼠心肌病理形态学的影响 |
| 7 对AMI模型大鼠新生血管情况的影响 |
| 8 对AMI模型大鼠TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路的影响 |
| 9 关于麝香通心滴丸促血管新生的中医理论探讨 |
| 创新点 |
| 问题与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表论文 |
| 个人简历 |
（8）从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 益气活血法治疗缺血性心脏病的研究进展 |
| 1 益气活血法治疗缺血性心脏病的中医理论基础 |
| 2 益气活血法治疗缺血性心脏病的作用机制 |
| 综述二 外泌体治疗心肌梗死后血管新生的研究进展 |
| 1 外泌体的生物学特征 |
| 2 内源性心脏细胞来源的外泌体与血管新生 |
| 3 外源性干细胞来源的外泌体与血管新生 |
| 4 循环血液来源的外泌体与血管新生 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 第一部分 血清外泌体的提取及鉴定 |
| 实验一 外泌体的提取与鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 活血益气方血清外泌体对大鼠心梗后血管新生的影响 |
| 实验一 大鼠急性心梗模型的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 活血益气方血清外泌体对心梗后大鼠心肌损伤及心功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 活血益气方血清外泌体对梗死边缘区心肌组织CD31、α-SMA表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 活血益气方血清外泌体对梗死边缘区心肌组织HIF-1α、VEGF及其mRNA的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 活血益气方血清外泌体促心梗后血管新生的细胞分子机制 |
| 实验一 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs增殖的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs迁移的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs成管能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs HIF-1α、VEGF及其mRNA的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验五 活血益气方血清外泌体对缺氧HUVECs VEGF及其信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（9）蒙药朱日很滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 附件1 |
| 正文 |
| 参考文献 |
| 附件2 |
（10）Tv2p涂膜剂对脑缺血和心肌缺血的药效学研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TV2p涂膜剂对MCAO/R大鼠治疗时间窗的考察 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂和受试药物 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 TTC溶液的配制 |
| 2.2 多聚甲醛固定液的配制 |
| 2.3 阳性药给药量计算方法和给药方式 |
| 2.4 动物分组和给药 |
| 2.5 模型制备 |
| 2.6 神经功能缺损评分 |
| 2.7 血清中相关因子的含量测定 |
| 2.8 脑组织梗死率检测 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 TV2p涂膜剂对不同治疗时间窗MCAO/R大鼠神经功能缺损评分的影响 |
| 4.1.1 TV2p涂膜剂对第一治疗时间窗MCAO/R大鼠神经功能缺损评分的影响 |
| 4.1.2 TV2p涂膜剂对第二治疗时间窗MCAO/R大鼠神经功能缺损评分的影响 |
| 4.1.3 TV2p涂膜剂对第三治疗时间窗MCAO/R大鼠神经功能缺损评分的影响 |
| 4.2 TV2p涂膜剂对不同治疗时间窗MCAO/R大鼠脑梗死面积的影响 |
| 4.3 TV2p涂膜剂对不同治疗时间窗MCAO/R大鼠乳酸脱氢酶表达的影响 |
| 4.4 TV2p涂膜剂对不同治疗时间窗MCAO/R大鼠脂质过氧化物表达的影响 |
| 5 实验讨论 |
| 6 实验小结 |
| 第二部分 TV2p涂膜剂对异丙肾上腺素致心肌缺血小鼠的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂和受试药物 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组造模与给药 |
| 2.2 阳性药给药量计算方法和给药方式 |
| 2.3 心脏组织相关因子的检测 |
| 2.4 心肌切片HE染色 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 TV2p涂膜剂对心肌缺血小鼠AST、LDH、MDA、CK和 SOD表达的影响 |
| 4.2 心肌切片分析 |
| 5 实验讨论 |
| 6 实验小结 |
| 第三部分 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂和受试药物 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组造模与给药 |
| 2.2 阳性药给药量计算方法和给药方式 |
| 2.3 血流动力学的测定 |
| 2.4 凝血四项的测定 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠心率的影响 |
| 4.2 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠动脉收缩压的影响 |
| 4.3 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠左心室收缩压的影响 |
| 4.4 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠左心室最大压升速率的影响 |
| 4.5 TV2p涂膜剂对垂体后叶素致心肌缺血大鼠FIB、TT、PT、APTT的影响 |
| 5 实验讨论 |
| 6 实验小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表的论文 |
| 综述 脑缺血损伤信号通路的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、冰七滴丸对大鼠急性心肌缺血保护作用的研究（论文参考文献）
- [1]龙牙楤木总皂苷抗MIRI机制研究及中成药防治MIRI的系统评价[D]. 宋欣丽. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]基于优化算法的痰瘀同治方抗心肌缺血再灌注损伤分子网络机制研究[D]. 高宏杰. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究[D]. 王擎擎. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]龙血竭总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及PI3K/AKT表达的影响[D]. 黄表华. 右江民族医学院, 2021(01)
- [6]益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究[D]. 冀楠. 天津中医药大学, 2021(01)
- [7]基于TGF-β1/ALK1/Smad1/5信号通路的麝香通心滴丸促血管新生作用机制研究[D]. 杨杉杉. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [8]从外泌体角度探讨活血益气方促大鼠心梗后血管新生的作用机制[D]. 高毅洁. 北京中医药大学, 2021(01)
- [9]蒙药朱日很滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D]. 韩额尔德木图. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]Tv2p涂膜剂对脑缺血和心肌缺血的药效学研究[D]. 李万平. 大理大学, 2019(05)
标签：丹参滴丸的作用与功效论文; 心肌损伤论文; 丹参滴丸论文; 血清蛋白论文; 外泌体论文;